《视黄酸诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《视黄酸诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的研究（72页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号：Q 2 5 4 密级：( 机密) 学校代码：1 0 0 5 7 研究生学号：0 7 81 2 5 3 7 视黄酸诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的研究 T h e s t u d y O i ln e u r a lc e l l sd i f f e r e n t i a t i o no fb o n em a r r o w m e s e n c h y m a ls t e mc e l l si n d u c e db yr e t i n o i ca c i d 专业名称：微生物与生化药学( 理) 指导教师姓名：张同存教授 研究生姓名：马琳琳 申请学位级 J I
2、J 理学硕士 论文提交日期：2 0 1 0 年1 月 论文课题来源：国家自然科学基金 天津市自然科学基金 学位授予单位：天津科技大学 簟l_罾疆琴童曩量I叠疆要疆墨参漫誊参Ir鳘， I q习竭羞羞耍鼍溷蠹灌歹夏罄尸_王I I r 】 “ - 奄 一 ， 勺 天津科技大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成 果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或 撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过 的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完
3、全意识到本声明的法律后果由本人承担。 作者签名：豸卅木研木 日期：缈l 口年多月f ： 日 知识产权和专利权保护声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下 完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所 涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，以本 论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本 人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。 作者签名：。荔嗣扫静 日期：矽f 年乡月7 乡日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同
4、意学校保留并向 国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允 许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入 有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密日( 请在方框内打“”) ，在) 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密ll ( 请在方框内打“”) 。 作者签名： 导师签名： 作者签名： 导师签名： 日期：矽ro 年；月哆日 日期：，。年3 月侈日 ( 请在方框内打“寸) 。 日期：f o 年多月，罗日 日期：，一年乡月锣日 f l 0 一 骨髓间充质干细胞( B o n em a
5、 r r o wm e s e n c h y m a ls t e mc e l l s ，B M S C s ) 具有取材方 便、来源广泛、自体移植无免疫排斥性等优点而成为理想的移植细胞。成功诱导骨髓 间充质干细胞分化为神经细胞，对临床上治疗神经退行性疾病和中枢神经系统损伤修 复具有重要意义。本研究探讨体外分离培养、纯化S D 大鼠骨髓间充质干细胞的方法， 对视黄酸( R e t i n o i c A c i d ，R A ) 抑制骨髓间充质干细胞增殖，促进其向神经细胞分化 及作用机制进行初步研究。 通过密度梯度离心培养法和完全贴壁培养法，分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞， 证实通过离体培养
6、，可使体内环境下低丰度的B M S C s 实现数目扩增，发现密度梯度离 心法有利于B M S C s 的纯化。 不同浓度R A 诱导B M S C s ，加入碱性成纤维生长因子( b a s i cf i b r o b l a s tg r o w t h f a c t o r ，b F G F ) 优化诱导条件，对其进行形态学观察，M T T 法测定细胞存活率，确定 R A 最佳诱导浓度。R T P C R 及免疫细胞化学对诱导后的细胞进行鉴定，证实视黄酸诱 导B M S C s 分化为神经细胞，细胞表达神经细胞特异性烯醇化酶( N S E ) 、神经胶质纤 维酸性蛋白( ) 和微管相
7、关蛋白2 ( M A P 2 ) ，同时发现b F G F 可以明显提高B M S C s 存活率和保护分化后的神经细胞，但是对于B M S C s 的分化率无明显作用。 R T P C R 检测I 认诱导B M S C s 过程中，R A 受体R X R I 的表达上调，证明R X R G t 参与 R A 诱导的B M S C s 向神经细胞分化的过程。 同时检测到在m R N A 水平上转录因子M y o c a r d i n 和M R T F A 的表达升高，证明 M y o c a r d i n 和M R T F A 也参与R A 诱导的B M S C s 向神经细胞分化的过程。
8、利用M y o c a r d i n 缺失转录激活域的真核表达质粒M y o c a r d i n A C ，通过竞争性的抑制内源M y o c a r d i n 的 功能，研究M y o c a r d i n 在R A 诱导B M S C s 分化为神经细胞中的作用。结果发现，M y o c a r d i n 功能缺失时，R A 诱导效率显著降低，证明R A 诱导B M S C s 向神经细胞分化过程部分依 赖转录因子M y o c a r d i n 。 R T P C R 检测细胞周期相关蛋I 刍C y c l i n E 1 和P 2 1 的表达情况。结果显示，在m R N
9、A 水平上，细胞周期蛋白c y c l i n E 1 的表达下降，P 2 1 的表达升高。证明在一定浓度范围 内，I 认能通过下调细胞周期蛋C y c l i n E 1 的表达，上调细胞周期抑制蛋l 兰t P 2 1 的表达， 抑带I J B M S C s 的增殖，促进其分化。 关键词：骨髓间充质干细胞；视黄酸；碱性成纤维生长因子；M y o c a r d i n ；细胞周期 控制因子 。 一 一 - 一 1 1 o #o卅0 - A B S T R A C T B o n em a r r o wm e s e n c h y m a ls t e mc e l l s ( B M
10、S C s ) a r ei d e a lf o rt r a n s p l a n t a t i o nb e c a u s e t l l e yc a nb ec o n v e n i e n t l yi s o l a t e df r o mw i d ev a r i e t yo ft i s s u e sa n d d o n ts t i m u l a t ea n i m m u n e - r e j e c t i o nr e s p o n s e T oi n d u c eB M S C sd i f f e r e n t i a t i o
11、ni n t on e u r a lc e l l sw i l lo f f e ra n e x p e r i m e n t a lf o u n d a t i o nf o rt h ec l i n i c a lt r e a t m e n to fn e u r o d e g e n e r a t i v ed i s e a s e sa n d 也e r e p a i ro fc e n t r a ln e r v o u ss y s t e mi n j u r y I nt h i sp a p e r , w ei s o l a t ea n dc
12、u l t u r er a tB M S C s i I l v i t r oa n dr e a s e r c ht h em e c h a n i s mb yw h i c hR e t i n o i cA c i d ( R A ) i n h i b i tt h eB M S C s p r o l i f e r a t i o na n dp r o m o t et h e i rd i f f e r e n t i a t i o ni n t on e u r a lc e l l s B M S C sa r es e p a r a t e da n dp
13、 u r i f i e db yd e n s i t yg r a d i e n tc e n t r i f u g a t i o nm e t h o da n df u l l y a d h e r e n tc u l t u r em e t h o d B M S C st h a ta r ei nl o wa b u n d a n c ei nv i v oc a ng r o wq u i c k l yw h e n c u l t u r e di nv i t r o ，d e n s i t yg r a d i e n tc e n t r i f u
14、g a t i o ni sa na p p r o p r i a t em e t h o dt op u f f 矽B M S C s W bt r e a t e dB M S C sw i t hR Aa n do p t i m i z e dd i f f e r e n t i a t i o nc o n d i t i o n sb ya d d i n gb F G F t om e d i a T h eo p t i m a lc o n c e n t r a t i o n so fR Aw e r ed e t e r m i n e db ym o r p h
15、 o l o g yo b s e r v a t i o n a n dM T Tm e t h o d T h ed a t ao fI m P C Ra n di m m u n o c y t o c h e m i s t r ys h o w e dt h a tR Ac o u l d i n d u c eB M S C sd i f f e r e n t i a t i o ni n t on e u r a lc e l l sa n dt h ed i f f e r e n t i a t e dc e l l se x h i b i t e d p o s i t
16、 i v eN S E ，G l A F Pa n d 凡I A P 一2e x p r e s s i o n s T h e r e f o r e ，b F G FC a ns i g n i f i c a n t l yi m p r o v e t h ec e l ls u r v i v a lr a t eo fB M S C sa n dp r o t e c td i f f e r e n t i a t e dn e u r a lc e l l s ，b u tc a nn o ti m p r o v e t h ed i f f e r e n t i a t i o nr a t eo fB M S C s T h eK r - P C Rd a t as h o w e dt h a tt h em R N Al e v e l so fR X 鼬W a si n c r e a s e di nt h e R A t r e a
