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1、河南中医学院 硕士学位论文 蝎素ITX对C57BL/6小鼠Lewis肺癌生长及对荷瘤小鼠免疫调节的 作用 姓名：崔平方 申请学位级别：硕士 专业：中西医结合基础 指导教师：刘文第 20080430 硕士学位论文原创性声明 本人所呈交的硕士学位论文，是在导师割塞筮教授的指导下， 独立进行科学研究工作所取得的成果。除文中已特别加以注明引用的内 容外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明 并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 特此声明。 论文作者( 签名) ： 崔孕方 2 0 0 8 年0 4 月3
2、0 日 硕士学位论文使用授权声明 本人已完全了解河南中医学院有关保留、使用硕士学位论文的相关 规定，同意学校保留或向国家有关部门、机构送交本学位论文的复印件 和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权河南中医学院可以将本论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或 其他复制手段保存、汇编本论文( 注：保密论文在解密后适用本授权声 明) 。 翟，崔平方 论文作者( 签名) ：虹J 一 2 啤o q 闫3 p 目 导师( 签名) ：缒 2 0 p 缉骅闫3D 回 摘鹱 摘要 目的：选择C 5 7 B L 6 小鼠L e w i s 肺癌为动物模型，并以r l L 2 为阳性对照
3、药， 观察蝎素I T X 对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用、及对C 5 7 B L 6 小鼠L e w i s 肺癌生 长的影响。 方法：取清洁级C 5 7 B L 6 小鼠4 0 只，体质量1 8 - - 一2 5 9 ，4 “ 6 周龄，雌雄各 半，按清洁级要求饲养。小鼠适应环境7 天后，随机抽取8 只，设为A 空白对照 组，其余接种L e w i s 肺癌荷瘤种鼠的瘤细胞悬液。第2 天起，将动物称体重、分 组，随机分为4 组，每组8 只，分别为：B 模型对照组、C 阳性对照r l L 2 i p 组、 D I T X i p 组、E I T X i v 组，并开始按设定的剂量和给药方法用药。
4、用药1 6 天后， 摘眼球取血，用流式细胞仪检测外周血中免疫细胞( 单核、N K 、B 和T 细胞) 的功 能状态；用酶联免疫方法检测外周血T G F p I 的血清含量；用免疫组织化学的方法 检测肿瘤组织中癌细胞表面M H C 1 分子、共刺激分子C D 8 0 和F a s 配体( F a s L ) 的 表达水平。 结果：接种肿瘤后第8 天，小鼠腋下可触及肿瘤节结，模型复制成功。用 药1 6 天后，取材并检测结果。 1 瘤体质量( g ) ：B 模型对照组( 0 2 3 4 - 0 0 8 ) ，C 阳性对照r l L 一2 - i p 组( O 。3 1 4 - 0 1 0 ) 、 D
5、 I T X i p 组( O 6 5 4 - 0 2 0 ) 、E I T X i v 组( O 2 9 士0 3 8 ) ，各用药组瘤体质量均比模型组增 加，其中组间两两比较，无统计学意义。 2 活化的单核细胞总量：A 空白组( 3 3 4 - 1 7 ) 、B 模型对照组( 7 9 4 - 2 O ) 、C 阳性对照 r l L - 2 i p 组( 8 7 4 - 3 9 ) 、D I T X - i p 组( 9 2 + 4 2 ) 、E I T X i v 组( 7 3 4 - 2 6 ) ，后四组与空白组 相比，活化的单核细胞总量高于空白组，有统计学意义( 尸 O 0 5 。 3
6、 瘤体质量和瘤体体积 瘤体质量：各用药组瘤体质量均比模型组高，I T X i p 组最高。具体见表3 。 表3 各组瘤体质量的变化( i s ，g ) 注：经多个独立样本的非参数检验，P O 0 5 ；再经两独立样本 的非参数检验进行组间比较，P O 0 5 。 蝎素I T X 对C 5 7 B L 6 小鼠L e w i s 肺癌生长及对荷瘤小鼠免疫调节的作用 瘤体体积：随着时间的推移，各组的肿瘤体积都明显增长，均比模型组增加， 各组问的最后瘤体体积大小无明显统计学差异。具体见表4 。 表4 各组瘤体体积的变化( i s ，m m 3 ) 注：采用单个重复测量方差分析进行组内比较，P 0 0
7、 5 。 4 小鼠外周血中红细胞、白细胞、淋巴细胞和粒细胞计数 4 1 红细胞( R B C ) 计数 组间比较，仅空白组与I T X i p 组、模型组与I T X i p 组相比，I T X i p 组低于空白 组、模型组，有明显统计学差异，其它组问比较，无明显差异。 4 2 白细胞( W B O 计数 组间比较，无明显统计学差异。其中模型组的白细胞低于空白组，各用药组 中以I T X i p 组含量最高。 4 3 淋巴细胞( L Y ) 计数 组间比较，无明显统计学差异。其中模型组的淋巴细胞低于空白组小鼠，各 用药组的淋巴细胞与模型组相比，无明显统计学差异。 4 4 粒细胞( G R )
8、 计数 组间比较，无明显统计学差异。其中模型组的粒细胞低于空白组，各用药组 中以I T X i p 组的计数最高。具体见表5 和图1 。 表5 各组小鼠外周血R B C 、W B C 、L y 和G R 的变化( j J ) 注：经多个独立样本的非参数检验，o 表示与空白组比较，P 0 0 5 ；聋表示与模型 组比较，P O 0 5 。 结果 单 位 。 芦 空 模r l L - 2I T X i pl T X - i v 白 型i p 一 A 红细胞计数( z s ) 芰50n0-_ 空模r l L 2I T X i pI T X i v 白型 i p C淋巴细胞计数( 工s ) 量7 0
9、0 - ! i 塾 单 位 ： o 气 芦 、- 一 空模 r l L 2I T X - i pI T X - i v 白型 i p D淋巴细胞计数( i J ) 图I 各组小鼠外周血的血象变化 5 各免疫细胞总量及活化的免疫细胞总量 5 1 各组的单核细胞和活化单核细胞总量 组问比较，各组单核细胞总量无明显统计学差异。后四组活化的单核细胞总 量高于空白组，有明显统计学差异；后四组间的活化单核细胞总量无明显统计学 差异，I T X i p 组活化单核细胞总量最高。具体见表6 和图2 。 表6 各组小鼠外周血单核细胞膜分子的表达率( j 墨，) 注：经多个独立样本的非参数检验，O 表示与空白组比
10、较，P O 0 5 。 蝎素I T X 对C 5 7 B L 6 小鼠L e w l s 肺癌生氏及对荷窟小鼠免疫调节的作用 单 位 ： ，、 摹 空模r l L 一2I T X i pI T X - i v 白 型i p AC D l 4 表达率( i s ) 单 位 ： ，一、 零 空 模r l L 2I T X - i pI T X i v 白型i p B C D l 4 C D 6 9 表达率( i J ) 图2 各组小鼠外周血中单核细胞总量( A ) 和活化单核细胞总量( B ) 变化 5 2 各组的N K 细胞总量和活化N K 细胞总量 N K 细胞总量：模型组、I T X i p
11、 组、r I L 2 i p 组和I T X i v 组依次升高，后四组与 空白组相比，均低于空白组，且空白组与模型组、r I L 2 i p 组和I T X i p 组相比，有 明显统计学差异；I T X i v 组接近于空白组，两者没有明显差异。后四组间相比， 仅模型组与 T X i v 组间，有明显统计学差异，其它组间比较，无统计学意义。 活化的N K 细胞总量：后四组与空白组相比，仅模型组低于空白组，其它三组 接近或高于空白组，仅空白组与r I L - 2 i p 组相比，有明显统计学差异；后四组间相 比，模型组与r l L 2 i p f l t 、r l L 2 i p 组- 与I
12、 T X i p 组相比，r l L 2 i p 组明显高于模型组和 I T X i p 组，有明显统计学差异，I T X i v 组的活化N K 细胞总量，高于空白组、模型 组和I T X i p 组，但无明显统计学差异，I T X i v 组与r I L 2 i p 组相比，I T X i v 组活化的 N K 细胞总量接近于r I L - 2 i p 组。具体见表7 和图3 。 表7 各组小鼠外周血N K 细胞膜分子的表达率( j s ，) 注：经多个独立样本的非参数检验o 表示与空白组比较，P 0 0 5 ；，表 示与模型组比较，P 0 0 5 ；A 表示与r I L 一2 - i p
13、 组比较，P 0 0 5 。 结果 6 0 0 单4 o o 位 S2 0 0 o 、 O 0 0 豪 位 l隧溺上 窑。j 豳围豳囱圜 空模r l L - 2I T X i pI T X - i V 空模r l L - 2I T X i pI T X - i V 白 型一i p 白型i p AN K I 1 表达率( 孑s )B N K I I C D 6 9 表达率( 孑s ) 图3 各组小鼠外周血中N K 细胞总量( A ) 和活化N K 细胞总量( B ) 变化 5 3 各组的B 细胞总量和活化B 细胞总量 B 细胞总量：后四组与空白组相比，B 细胞总量均低于空白组，仅空白组与 I T
14、 X i p 组、空白组与I T X i v 组相比，有明显统计学差异；后四组问相比，无明显统 计学差异。， 活化B 细胞总量：后四组与空白组相比，活化B 细胞总量明显低于空白组 ( P 0 0 5 ) ；模型组与r I L 一2 - i p 组、r I L - 2 一i p 组与I T X - i p 组相比，r l L 2 i p 组的活化B 细 胞总量明显高于模型组和I T X i p 组，有统计学意义( 氏O 0 5 ) ；I T X i v 组的活化B 细 胞总量高于模型组和I T X - i p 组，接近于r I L 2 i p 组，但无明显统计学差异。具体见 表8 和图4 。 表
15、8 各组小鼠外周血B 细胞膜分子的表达率( j 暑，) 注：经多个独立样本的非参数检验，o 表示与空白组比较，P 0 0 5 ；# 表 示与模型组比较，P O 0 5 ；表示与r l L 2 i p 坌l l 比较，P 0 0 5 。 蝎素I T X 对C 5 7 B L 6 小鼠L e w i s 肺癌生长及对荷瘸小鼠免疫调节的作用 单 位 ： ，- 、 摹 单 位 ： ，、 零 空模r l L 2I T X - i pI T X i v 空模 r I L 2I T X i pI T X i v 白型。i p 白型i p A C D l 9 表达率( i s ) B C D l 9 C D
16、6 9 表达率( i s ) 图4 各组小鼠外周血中B 细胞总量( A ) 和活化B 细胞总量( B ) 变化 5 4 各组的C D 4 + T 细胞总量、活化C D 4 + T 细胞总量和表达共刺激分子受体C D 2 8 的 C D 4 + T 细胞的总量 C D 4 + T 细胞总量：空白组、模型组、r I L 2 i p 组和I T X i p 组四组间相比，无明 显统计学差异；I T X i v 组与空白组、模型组、r I L 2 i p 组相比，低于空白组、模型 组、r l L 2 i p 组，有明显统计学差异。其余组间比较，无明显统计学差异。 活化C D 4 + T 细胞总量：空白组与模型组、I T X i
