《苹果中六个胁迫相关的转录因子表达特性及与醇酰基转移酶基因表达相关性分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《苹果中六个胁迫相关的转录因子表达特性及与醇酰基转移酶基因表达相关性分析（80页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
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2、照表 目录 摘要I A b s t r a c t I I I l 引言- 1 1 1 苹果酯类挥发性成分的代谢调控1 1 1 1 挥发性酯类成分的代谢途径1 1 1 2 醇酰基转移酶2 1 2 植物转录因子的结构特点3 1 2 1 D N A 结合域3 1 2 1 1 含锌结构3 1 2 1 2 同源异型4 1 2 1 3 碱性亮氨酸拉链4 1 2 1 4 碱性。螺旋环螺旋和M Y B 结构域4 1 2 2 核定位信号域5 1 2 3 转录调控域5 1 3 转录因子的分类及调控5 1 3 1E R F 转录因子6 1 3 1 1E R F 转录因子的调控作用6 1 3 2 W R K Y 转
3、录因子8 1 3 2 1W R K Y 转录因子的调控作用9 1 3 3 b Z I P 转录因子1 0 1 3 3 1b Z I P 转录因子的调控作用1 0 1 3 4 M Y B 转录因子1 1 1 3 4 1 M Y B 转录因子的调控作用1 2 1 3 5 M Y C 转录因子1 4 1 3 6 N A C 类转录因子1 4 1 4 转录因子的组合调控1 4 1 5 本研究的目的及意义1 6 2 材料与方法1 7 2 1 材料及试剂1 7 2 1 1 植物材料1 7 2 1 2 质粒载体及菌种1 7 2 1 3 酶和试剂1 7 2 1 4 培养基1 7 2 1 5P C R 引物1
4、7 2 1 6 提取的D N A ( R N A ) 的浓度检测1 8 2 I 7 本研究使用的软件1 9 2 2 实验方法1 9 2 2 1 材料处理方法1 9 2 2 1 1 苹果花和叶子的采集和处理1 9 2 2 1 2 苹果果实的采集和处理2 0 2 2 2 苹果总R N A 的提取2 0 2 2 2 1T R I Z O L 法提取总R N A 2 0 2 2 2 2C T A B 法提取总R N A 2 1 2 2 3 电泳检测R N A 是否降解步骤2 2 2 2 4R N A 反转录2 3 2 2 5 苹果转录因子的克隆及检测2 3 2 2 5 1P C R 扩增2 3 2 2
5、 5 2 大肠杆菌感受念细胞的制备2 4 2 2 5 3 连接2 5 2 2 5 4 转化及克隆筛选2 5 2 2 5 5 碱法小量提取质粒D N A 2 5 2 2 5 6 酶切鉴定2 6 2 2 6 目的基因的半定量R T P C R 分析2 7 2 2 7M Y B l 和M Y B 6 原核表达载体的构建2 8 3 结果与分析3 0 3 1 绷4 刀启动子的序列分析3 0 3 2 六个转录因子的克隆。3 l 3 3 转录因子在苹果果实和花器官中的表达特性。3 2 3 4 转录因子在果实发育中的表达特性3 3 3 5 水杨酸处理后转录因子在果实中的表达特性3 5 3 6 茉莉酸甲酯处理后
6、转录因子在果实中的表达特性3 7 3 7 乙烯利处理后转录因子在果实中的表达特性3 9 3 8 转录因子的结构预测4 2 3 9 原核表达载体的构建4 2 4 讨论4 3 5 结论4 7 参考文献4 9 致谢6 5 攻读硕士学位期间完成的论文6 6 山东农业大学硕士学位论文 苹果中六个胁迫相关的转录因子表达特性及与醇酰基 转移酶基因表达相关性分析 摘要 醇酰基转移酶( A l c o h o la c y l t r a n s f e r a s e ，A A T ) 是生物体内酯类挥发性 成分合成的关键酶。前期研究发现，水杨酸( s a l i c y l i ca c i d ，S A
7、) 、乙烯利 ( E t h e p h o n ，E T H ) 和茉莉酸甲酯( m e t h y li a s m o n a t e ，M e J A ) 可以不同程度的 诱导苹果果实中醇酰基转移酶基因( j I 删4 乃) 的表达，这表明该基因可 能参与了对胁迫信号的响应。目前，对醇酰基转移酶基因的研究主要集中 在果实和花香气合成调控方面，其转录调控的机制及上游转录因子尚不清 楚。本试验通过生物信息学技术，筛选并克隆了六个胁迫相关的转录因子 ( M d M Y B l ，M d M Y B 2 ，M d M Y B 6 ，M d E R F l ，M d E R F 2 和W R K
8、 Y ) ，通过半 定量R T - P C R 技术分析了这些转录因子在金帅苹果不同组织、发育阶段以 及不同信号物质诱导后的表达特性，分析了其与M d A A T 2 基因表达的相关 性。主要结果如下： l 、利用P L A N T C A R E 等相关数据库，对 织d 4 乃启动子的顺式元件 进行了分析。研究发现，M d A A T 2 启动子区域存在两个水杨酸响应元件 W b o x 和一个茉莉酸甲酯响应元件T G A C G m o t i f ，分别位于转录起始位 点上游6 6 1 b p 、11 3 0b p 和一11 2 9 b p 处。结合同源性分析，在金帅苹果中 克隆了六个候
9、选的转录因子：M d M Y B l ( G U 0 1 3 6 8 4 ) 、M d M Y B 2 ( G U 0 1 3 6 8 1 ) 、M d M Y B 6 ( G U 0 1 3 6 8 2 ) 、M d E R F l ( A B 2 8 8 3 4 7 ) 、M d E R F 2 ( A B 2 8 8 3 4 8 ) 和W R K Y ( G U 0 13 6 8 3 ) 。 2 、通过R T - P C R 技术分析了候选转录因子和M d A A T 2 在苹果果实和 花器官中的表达特性。研究发现六个候选转录因子在柱头中均有显著表 达，其中M d E R F l 和M
10、d E R F 2 在果实和花器官中均有不同程度的表达。 序列分析发现M d A A T 2 启动子中存在两个与花粉特异表达有关的元件， P O L L E N I L E L A T 5 2 ，分别位于8 2 b p 和8 8 2 b p 处。这表明所分析的转录因 子可能通过调控功能基因的表达或与? I 删4 乃相互作用，参与果实和花器 官中挥发性酯类成分的合成。 苹果中六个胁迫相关的转录因子表达特性及与醇酰基转移酶基因表达相关性分析 3 、通过R T P C R 技术分析了M d A A T 2 和候选转录因子在果实发育阶 段的表达特性。相关性分析发现W R K Y , M d M Y B
11、 6 与M d A A T 2 的表达模式 相关性不显著，而M d M Y B J 、M d M Y B 2 、M d E R F l 、M d E R F 2 与M d A A T 2 表达特性具有显著的相关性。这表明W R K Y 和M d M Y B 6 可能不参与对 M d A A T 2 的转录调控，而M d M Y B l 、M d M Y B 2 、M d E R F l 三个转录因子 可能通过调控M d A A T 2 的表达，参与了挥发性酯类物质的代谢。 4 、水杨酸( 2 0 m M ) 处理发现，M d E R F l 与M d A A T 2 的表达模式具 有极显著的相关性，M d M Y B 6 与M d A A T 2 也具有显著的相关性。这表明 M d E R F l 和M d M Y B 6 可能在水杨酸信号转导途径中，调控了M d A A T 2 的
