动物实验基本技术和方法课件

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1、<p>&lt;p&gt;&amp;lt;p&amp;gt;&amp;amp;lt;p&amp;amp;gt;&amp;amp;amp;lt;p&amp;amp;amp;gt; v理论准备:了解动物实验基础知识 制定研究计划和方案 查阅关于实验方法的参考文献 v条件准备:仪器、器械、药品 运输 实验和饲养场所 v小鼠 v大鼠 v豚鼠 v家兔 v犬 猫的抓取 v猴 1、染色法:浅色动物 3.5-5苦味酸溶液(黄色) 0.5%中性红或碱性品红溶液(红色) 2硝酸银溶液(咖啡色,涂后光照10分钟) 煤焦油酒精溶液(黑色) 龙胆

2、紫溶液(紫色) 2、打耳孔法:小型动物 3、剪趾法:小型动物 4、剪尾法:大、小鼠,仅限与两组间区分 5、烙印法:刺号钳,中、大型动物 6、针刺法:中、大型动物 7、号牌法:耳标签、项圈、腿圈,中、大型动物 8、剪毛法:大动物 9、笼子标号 ?随机化分组:避免人为影响 ?例:将14只小鼠随机分成两组。 ?先将小鼠编为I14号, ?在随机数字表上任点一数,按任意方向连续抄12 个随机数字。 编排如下; ?动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 ?随机数日 16 22 77 94 39 49 54 43 54 82 17 37 93 23 ?归 组 B B A

3、B A A B A B B A A A A ?奇数代表A织,偶数代表B组 ?A组: 3 5 6 8 11 12 13 14 ? B组: 1 2 4 7 9 10 ?调整分组:接刚才随机数字23继续抄表得随机数 字78,用78除以8(因为需要把C组的8个数字调整 掉一个),得余数6,所以把A组的第6个动物,即 12号动物调整到B组 ? 最终分组 ?A组: 3 5 6 8 11 13 14 ?B组: 1 2 4 7 9 10 12 例:12只大鼠随机分为3组 大鼠编号112 在随机数字表上任点一数,按任意方向连续抄12 个随机数字。 每个数分别用3除,记录余数, 根据余数分组 大鼠编号:1, 2,

4、 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 随机数字:08,27,01,50,15,29,39,39,43,79, 69,10 余数: 2, 0, 1, 2, 0, 2, 0, 0, 1, 1, 0, 1 组别: B, C, A, B, C, B, C, C, A, A,C, A A:3,9,10,12 B;1,4,6 C:2,5,7,8,11 调整分组:接刚才随机数字10继续抄表得随 机数字61,用61除以5(因为需要把C组的5 个数字调整掉一个),得余数1,所以把C组 的第1个动物,即2号动物调整到B组。 最终分组 A:3,9,10,12 B;1, 2 ,4,6 C:

5、5,7,8,11 1、剪毛:弯头剪毛剪 2、拔毛:大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射 3、剃毛:将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍,蘸温肥皂 水润湿,用剃刀顺着被毛方向剃毛,用电动剃毛推 剪,则逆被毛向剃毛。 4、化学脱毛: 常用脱毛剂 8%硫化钠水溶液 硫化钠3份,洗衣粉1份、淀粉7份,加水调成 糊状 硫化钡50克,氧化锌25克,淀粉25克,加水 100毫升调成糊状 硫化钠10克,生石灰15克,加水到100毫升, 适合犬和其他大动物。 1、自动口服:加入饲料或饮水 2、投喂药片:掰开口,放到舌根部 3、灌胃(i.g): 4、直肠给药 5、呼吸道给药 6、滴鼻 7、点眼 8、经皮肤给药:常用于检测药物、毒

6、物、化妆 品等的透皮吸收、局部作用、至敏作用等。家兔 和豚鼠选择脊柱两侧皮肤,大小鼠常采取浸尾方 式。 9、皮内注射(i.d):一般用于接种或过敏实验。 将药液注射在真皮和表皮之间。 10、皮下注射(s.c):颈背部、腋下、腿、侧腹 11、肌肉注射(i.m):股部肌肉 12、腹腔注射(i.p):下腹部腹中线两侧 13、静脉注射(i.v): v 小鼠:尾静脉 v 大鼠:尾静脉、 阴茎静脉、 舌下静脉、 浅背侧跖静脉 尾静脉注射: 大小鼠有上、左、右 3根尾静脉 阴茎静脉注射 舌下静脉注射 浅背侧跖静脉注射 猴的后肢皮下静脉注射 v豚鼠:浅背侧跖静脉、耳静脉注射 v家兔:耳静脉注射 v猪:耳缘静脉

7、 v猴:前肢桡静脉、后肢隐静脉注射 v猫、狗:前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉 注射 狗前肢内侧头静脉 狗后肢外侧小隐静脉 14、脑腔注射: (1)小鼠 小指夹鼠尾,拇指和是指置小鼠头两侧固定,中指和 无名指压住鼠身,在注射处消毒后,右手持注射器 ,以食指固定针芯,垂直刺入针头深度约57mm (2)兔 将兔用固定器固定好,剃去头顶的被毛,左手将头 皮绷紧,消毒后,右手持锥子,自头顶正中稍偏一 侧部位,锥穿头骨,即换以左手固定锥子,右手持 注射器,使针头沿锥尖刺入,慢慢拔出锥子,即刻 将针头刺入约1020mm,即可推液 15、关节腔注射: 16、椎管内注射:注射入蛛网膜下腔 17、淋巴囊内注射:

8、蛙和蟾蜍 18、小脑延髓池注射: 1、大小鼠: v眶静脉丛(窦): 少量多次采大小鼠血。 小鼠0.20.3ml, 大鼠0.40.6ml v摘眼球:用于一次大量采小鼠血,可得到 45体重的血量 v尾静脉:用于少量多次采大小鼠血 v剪头:用于一次性大量采小鼠血,可得到0.5 1.0ml的血量 v大血管:包括颈动脉(静脉),股动脉(静脉 ),腋下动脉(静脉),腹主动脉。此方法不常 用于小鼠采血,而多用于大鼠一次性大量采血。 可得5ml左右血量。 v心脏采血:小鼠少用,可用于大鼠一次性(开 胸)或多次采血(不开胸)。 2 、家兔 : v耳缘静脉:可反复采血,每次510ml。 v耳中央静脉:可反复采血,

9、每次1015ml。 v心脏采血:可用于 一次性(开胸)或 多次采血(不开胸)。 一次性开胸采血可 得到80100ml血量 v颈动静脉采血:用于一次性采血,需要手术, 可得血量8010ml。 3、豚鼠: v心脏采血:可用于一次性(开胸)或多次采血 (不开胸)。一次性开胸采血可得到510ml 血量。 v背跖静脉采血:用于少量反复采血。 4、犬猫:和静脉注射部位相同,前肢内侧头静脉 、后肢外侧小隐静脉。也可颈静脉(动脉)或心 脏采血 5、猪:心脏采血或耳大静脉采血 6、羊:颈静脉采血 7、猴:前肢头静脉、 后肢皮下静脉 或耳缘静脉等。 8、禽类:翼下静脉 v常用抗凝剂: &amp;amp;a

10、mp;amp;#167;肝素:抑制凝血酶活力,阻止血小板凝集。纯品 肝素1mg125U,10U20U抗1ml血凝集,但 通常应用23倍剂量。 用法:可配成1%肝素溶液,用时取0.1ml于试管 内,100烘干,每管可抗凝510ml血。或用1% 肝素溶液湿润采血注射器。 肝素可改变蛋白质等电点,当用盐析法分离蛋白 作分类测定时,不可用肝素抗凝。 &amp;amp;amp;amp;#167;枸橼酸钠:使凝血必需的钙离子失活。常用 35%水溶液,碱性较强。 &amp;amp;amp;amp;#167;草酸盐合剂:草酸铵1.2g,草酸钾0.8g,福尔 马林1.0ml,加蒸馏水至100ml

11、。使凝血必需的 钙离子失活。每毫升血加草酸盐合剂0.1ml。 &amp;amp;amp;amp;#167;氟化钠:每毫升血加6mg。 1、胸水、腹水采集:穿刺 2、消化液采集:唾液,胃液,胰液,胆汁 3、精液采集:中、大动物用假阴道,小动物穿 刺附睾来采集精液。 4、脑脊液采集:手术或小脑延髓池抽取 5、骨髓采集:大动物活体穿刺,小动物处死后 取股骨或胸骨骨髓 6、尿液采集: v代谢笼收集 v导尿管采集 v膀胱穿刺 v压迫排尿 1、麻醉方法: v全麻 吸入麻醉,静脉注射、腹腔注射。 v局麻 浸润麻醉。根据手术,按皮下、筋膜、肌肉、腹膜 、骨膜等顺序逐步深入注射到术野周围。 2、麻醉前准

12、备: v禁食812h,防止呕吐,可饮水 v根据实验部位和种类,给动物脱毛。 v犬、猪、猴等大动物可在麻醉前给予一些药物 以减少动物紧张,减少支气管分泌 &amp;amp;amp;amp;#167;阿托品:减少支气管和唾液腺分泌,防止气管阻 塞。副作用:加快心率。用量:肌肉或皮下注射 0.04mg/kg &amp;amp;amp;amp;#167;安定:产生镇静作用,加强麻醉效果,使骨骼肌 松弛。用量:2.55mg/kg &amp;amp;amp;amp;#167;吗啡:产生镇静作用。副作用:抑制呼吸中枢。 用量:皮下注射12mg/kg,肌肉注射 1020mg/kg. 3

13、、麻醉药物: v全麻药物 &amp;amp;amp;amp;#167;乙醚:强挥发性、易燃。乙醚是最常用的吸入麻 醉剂,各种动物适用。 机制:抑制中枢神经系统。 特点:安全范围大,肌肉完全松弛,对肝肾毒 性小,麻醉诱导期和苏醒期较长。副作用:局部 刺激大,引起上呼吸道黏膜分泌增加,导致呼吸 道阻塞,可用阿托品对抗解救。 &amp;amp;amp;amp;#167;巴比妥类:种类很多,有巴比妥钠,戊巴比妥钠 ,硫喷妥那,苯巴比妥钠等。适用于各种动物。 特点;安全范围广,毒性小,麻醉潜伏期短, 麻醉维持时间长。可腹腔或静脉给药。机理:阻 断神经冲动传递到大脑。 副作用:过量使用可导

14、致呼吸肌麻痹而死亡, 同时抑制末梢循环,导致血压降低,并影响基础 代谢,导致体温降低 &amp;amp;amp;amp;#167;氯胺酮:常用其盐酸盐。 特点:麻醉潜伏期短,麻醉维持期仅 1020min,麻醉浅,安全性高,可重复给药。 机制:阻断大脑联络途径。 副作用:兴奋心血管系统,使血压升高,心率 加快,偶尔引起呕吐。 &amp;amp;amp;amp;#167;水合氯醛:作用特点和巴比妥类相似。但安全范 围小,麻醉剂量和中毒剂量接近,对皮肤和黏膜 有较强刺激。 v局麻药物 &amp;amp;amp;amp;#167;普鲁卡因:是无刺激性的局麻药物。 特点:麻醉速度

15、快,注射后13分钟就可产生 麻醉。可以维持3045分钟。对皮肤和黏膜穿 透力很弱,需要注射给药才能产生局麻效果。它 可以使血管舒张,易被吸收入血液而失去效果。 在其溶液中加入肾上腺素(每100ml加入0.1% 肾上腺素0.20.5ml)可以使麻醉时间延长12 小时。 &amp;amp;amp;amp;#167;利多卡因:效力和穿透力比普鲁卡因强 &amp;amp;amp;amp;#167;的卡因:化学结构和普鲁卡因类似,效力和穿透 力比普鲁卡因强。 4、实验动物的急救 v呼吸停止: &amp;amp;amp;amp;#167;人工呼吸 &amp;amp;amp;

16、amp;#167;尼可刹米:适用于各种原因的中枢性呼吸衰竭, 每次0.25g0.5g,静脉注射。 &amp;amp;amp;amp;#167;戊四氮:对抗巴比妥类和氯丙嗪过量导致的呼吸 衰竭,每次0.1g,静脉注射或心内注射 &amp;amp;amp;amp;#167;美解眠:对抗巴比妥类和水合氯醛中毒,每次 50mg,静脉缓慢注射 v心跳停止: &amp;amp;amp;amp;#167;心脏按摩 &amp;amp;amp;amp;#167;针刺或脉冲电刺激 &amp;amp;amp;amp;#167;肾上腺素:用于心脏骤停的急救。每次 0.51.0m

17、l静脉注射 &amp;amp;amp;amp;#167;碳酸氢钠:纠正急性酸中毒。可注射肾上腺素后 立即静脉注射5%碳酸氢钠12ml/kg 1、颈椎脱臼法:小鼠、大鼠 2、空气栓塞法:兔、猫、犬等大动物 3、放血法:心脏放血或大血管放血 4、断头法:小鼠、大鼠 5、吸入二氧化碳 6、注射巴比妥类药物 ?(1)切面术语 ?矢状面:是与动物体长轴平行面与地面垂直 的切面。其中把动物体等分成左、右对称两半 的叫正中矢面;与正中矢面相平行的所有切面 均称为矢状面。 ?横断面:是与动物体长轴相垂直的切面,把 动物体分成前、后两部分。与器官长轴相垂直 的切面也叫横断面。 ?额切面(水平面):与地面

18、平行面与矢状面 和横断面相垂直的切面,可把动物体分成背、 腹两部分。 1.横切面 2、矢状面 3、额切面 4、颅侧(前侧) 5、尾侧(后侧) 6、背 侧 7、腹侧 8、内侧 9、外侧 10、口侧 11、 远口侧 12、背侧 13、掌 侧、14、跖侧 15、近端 16、远端 17、轴侧 18、远轴侧 狗躯体各部名称 小鼠的淋巴系统 小鼠乳腺区域 大鼠无创血压测量 v尸体需要做无害化处理:高压、焚烧、深埋等 &amp;amp;amp;lt;/p&amp;amp;amp;gt;&amp;amp;lt;/p&amp;amp;gt;&amp;lt;/p&amp;gt;&lt;/p&gt;</p>

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