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1、微生物及免疫学 实训一 显微镜的使用 一、实验目的 练习和掌握显微镜的使用方法（低倍镜、 高倍镜、油镜）。 二、实验原理 （一）显微镜的结构、光学原理和操作方法 显微镜分机械系统和光学系统两部分 机械系统包括：镜筒、转换器、载物台 、镜臂、镜座、粗准焦螺旋、细准焦螺旋 。 光学系统包括：目镜、物镜、聚光器、 光源、滤光片、虹彩光圈。 双目光学显微镜双目光学显微镜 （二）显微镜的光学原理 1.成像原理 光路：光源虹彩光圈聚光镜通光孔 标本（一定要透明）物镜镜筒目镜 眼。 (三)油镜工作原理 香柏油的折光率（1.51-1.52）与玻璃片折 光率（1.52）相近似，因此在物镜（玻璃）与标 本载片（玻
2、璃）之间加入香柏油可以使光线不致 因从一个介质（玻璃）进入到另一折光率不同的 介质即空气（折光率为1.0）而引起部分散射， 造成亮度不够而观察不清，这对透镜弯曲度较大 ，直径较小（通过光线亦较小）的油镜头是特别 重要的。 做法是在用油镜观察时要把油镜头（100 ）浸入香柏油中。 (四)目测微尺的标定 将目测微尺装入目镜的隔板上，使刻度朝下；把物 测微尺放在载物台上使刻度朝上。用低倍镜找到目测 微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺，使两者的第 一条刻度线重合，顺着刻度找到另一条重合刻度线。 计算在该放大倍数下目测微尺每个小格的实际长度。 目测微尺每小格长度(m)= 用物测微尺标定目测微尺用物测微尺
3、标定目测微尺 1.材料 枯草芽孢染色涂片。 金黄色葡萄球菌涂片。 酵母菌染色涂片。 2.用具：显微镜、二甲苯、香柏油、镜头 纸、物测微尺、目测微尺。 三、实验材料和用具 （一）显微镜的使用 1.取镜和安放 右手握住镜臂，左手托住镜座。 把显微镜放在水平的实验台上，略偏左（显微镜 放在距实验台边缘7厘米左右处）。 四、实验方法 2.低倍镜的操作 置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。 将标本片放在载物台上，是观察的目的物处于圆孔 的正中央。 将粗准焦螺旋向下旋转，眼睛在测向注视物镜，防 止物镜和载玻片相碰。 张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十 分清楚，可用细准焦螺旋，至目的物清晰为
4、止。注 意观察时两眼应同时睁开。使用单筒显微镜，应习 惯用左眼观察，以便绘图。 3.高倍镜的操作 使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的 物后将它移至视野正中处。 旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立 即停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物 并没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高倍 镜下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直到视 野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台 上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力接触，损 坏镜头或载玻片。 4.油镜的操作 如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用 低倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正 中。 在载玻片上滴一滴香
5、柏油（或液体石蜡），将油 镜移至正中使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片 。用细准焦螺旋微微向上调（切忌不用粗准焦螺旋 ）即可。 油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另 用擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干 。 5.显微镜使用注意事项 .显微镜应置于平坦的桌面上。 .将标本片夹在显微镜载物台的十字夹中，注意要 正面向上。 .先用低倍镜再用高倍镜观察寻找目的物，此时要 控制视野不能太亮，注意区别镜头上的灰尘和目的 物。 .在标本中央滴加一小滴香柏油，从镜筒侧面观察 ，将油镜（100）轻轻旋下，使它浸在香柏油内 。切勿猛烈的将镜头压在标本片上，防止损坏物镜 ！ .将眼睛移至目镜，一边观察
6、一边慢慢旋动粗准焦 螺旋，将载物台上提。当见到物象时，再用细准 焦螺旋调至图像清晰。对于单目显微镜，使用油 镜时要将聚光器尽量上升，虹彩光圈放大。 .注意在旋动粗准焦螺旋时，必须特别小心。决不 能在观察时将载物台很快提升，以免损伤螺旋。 .假如用油镜时一再看不清目的物，可验看油中是 否存在气泡。如存在气泡，可将镜头及标本片上 的油擦去，重新滴加。 .观察完毕后，下降载物台，取下标本片，用干净 的擦镜纸蘸少量的二甲苯，轻揩去载玻片上的香柏 油后，立即用干擦镜纸揩干。 .收存显微镜时，应将最短的镜头对准透光孔，或 将物镜的长镜头转成“八”字式，使两个镜头同时 搁在载物台上。切勿将长镜头对准透光孔，以免与 聚光器相碰而损坏。镜台、镜身上占有水及污物， 必须及时擦去。然后套上显微镜罩，对号放入显微 镜箱中锁好。 1.在低倍镜、高倍镜和油镜下观察标本片 2.测量菌体的大小 在高倍镜下测量酵母的大小(测1020个菌，求平 均值)。 在油镜下测枯草芽孢杆菌的长与宽，测金黄色葡萄 球菌的直径(测量1020个菌体求平均值)。 在低倍镜下求出目测微尺每格长度后，再用同法求 出在高倍镜下和油镜下(物测微尺上需加1滴香柏油) 目测微尺每格的长度。 五、实验内容 1.使用油镜时为什么要先用低倍镜和高倍镜检查？ 2.油镜使用时为什么一定要浸在香柏油里？ 3.在使用油镜时应怎样控制聚光器与光圈？ 六、思考题
