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1、第七眉海峡雨岸真菌睾挈衍研封台输文集7 9 8 7 冬蛊夏草霰酵粉化肇成分的组成特黠 思肇枘米生物技有限公司 俞永信 摘要 冬蛊夏草是傅梳的食用和檠用真菌，市埸上已桎有多獯多矗夏草健康食品。本研究封一檀新型冬蛊夏 草固髓霰酵品的化孽成份遣行了分析，包括粗成份、生物活性成份、脂肪酸、金属元素以及氨基酸。 秸果：晶草粉中3 L 脱氧腺营、腺苷含量分别属4 0 8 1 心g 、7 4 5 4I ，t e g g ：多醣含量属1 7 5 9 2m g g ， 分雕獾得的多醣粗份主要牛乳糖、葡萄糖和甘露糖粗成：穗氨基酸的含量属21 5 9 ，谷氨酸、天门冬 氨酸及苯丙氨酸是三大叛主要氨基酸：不鲍和脂肪酸
2、合量5 7 7 4 ，亚油酸舆油酸属主要不鲍和脂肪 酸。和文献琵鲧的秸果的相比，蛊草粉中主要化罩和活性成份的水平、合量舆天然冬蛊夏草中的相臆 成份颊同，蓝具有一般食用真菌成份的特黠。 丽锺匍：化肇成分、多矗夏革、活陛成分、疆酵粉o 1 L = = j 日U舀 冬鑫夏草具有多植檠理活| 生和功能，包括 稠箭免疫、改善睡眠，抗疲蒡，抗氧化等作 用，有治瘵老年熳性氯管炎、臀功能衰竭， 封某些膻瘤疾病有预防作用，抗心律失常作 用及具有抑制血小板凝聚作用等研究鞭溥。 多蛊夏草的多槿瘵效作用舆它的整髓化擎 成分是相翮的。 天然多矗夏草和液髓深唇我酵菌糸糸髓的化 擎成分已程有很多鞭溥，但液髓深屠袭酵有 很多
3、弊端，溶解杪我酵液中的活性物耍鞋以 回收：我酵收得率低：排放骚酵液封瑕境造 成污染。探索鑫草菌的固髓我酵有一定意 羲。蛊草菌的固髓疆酵麈物和天然矗草成分 的分析未兄赧尊。现将我们用固髓骚酵方法 所得蛊草菌髓成分的分析牿果赧告方八下。 寅黢材料和方法 弑黢材料 饔角固醇，3 一脱氧腺苷( F L U K A 公 司) ：甲醇，乙睛( T E D I A 公司，U S A ) ：腺 苷、尿苷、次黄瞟呤( 上海源聚生物科技有 限公司) ：尿嘧啶、腺嘌呤、甘露醇、葡萄 糖( 中圆臀蘖( 集圈) 上海化掣弑剂公司) ： S e p h a d e xG 一1 0 0 ( 上海宏梗寅莱骚展有限公 司) o
4、 其他弑剖属茼品分析糸屯。冬蛊夏草固 髓疆酵粉由成都思摩衲米生物科技有限公司 提供。 分析方法 粗成份的分析探用硫酸一蒽酮法测定穗 糖：粗蛋白：凯氏定氮法：粗脂肪：檬品桎 石油醚提取，减座濮稿，乾燥至衡重：粗檄 + 俞永信：畏期徒事檠用菌阴骚新檠的研究，E m a i l ：y y x 9 8 9 5 v i p s i n a c o r n 行勤鼋秸棱：1 3 9 8 0 7 1 7 2 6 7 。摹柬理工 大犟生物工程罩院王尊生博士、籁宇翔博士，周鼹硕士，袁勤生教授参舆研究。 8 0第七眉海峡雨岸真菌擎挈衍研讨舍输文集 雒：檬品程酸洗，碱洗、遇滤、乾燥後稀 重：水分：檬品乾燥至衡重後稀量
5、：灰分： 檬品糨高温灼烧後稽重。 核苷和生物献分析方法( 高效液相色措法) 外檩法定量3 一脱氧腺苷、腺苷、腺嘌呤、 尿苷、尿嘧啶和次黄嘌呤。精稀1g 蛊草粉 溶方A 5 0m L2 0 乙醇，混匀，超聱3 0 m i n ，於5 0 0 C 水浴中浸提1h ，重梭2 次。 浸出液1 3 0 0 0r m i n 雕心1 5m i n 後取上清 液，沈溅用少量水洗滁三次，合饼，5 0 0 C 减厘渥箱定容至1 0m L ，0 4 5p m 滤膜遇 滤，H P L C 分析。色藉系航：W a t e r5 1 0 系 航 色稽柱：K r o m a s i lC 8 ，5g m ，2 0 0m
6、mX 4 6m m 流勤相霜甲醇一笺蒸水，探用梯度 洗脱，初始睛配比属2 ：9 8 ，1 5m i n 後燮属 1 0 ：9 0 ，洗脱睛筒4 0m i no 流速1m L m i n ， 桧测波畏2 6 0n m ，曩敏度0 0 1A U F S ，每次 遭檬量2 0 L ，柱温3 0 。C o 甘露醇的分析甘露醇的定量分析参照檠 典2 0 0 0 版。 多醣粗成的分析多醣粗成成份探用柱唇 析和薄屠屠析法。多醣的裂倩：1 0g 檬品用 石油醚脱脂後，溶於去雕子水，混匀，超罄 3 0m i n 後方八沸水浴中浸提1h ，重梭2 次。 浸出液1 3 0 0 0r m i n 雕心1 5m i n
7、 ，沈溅溶方A 去雕子水，加入1 活性炭，煮沸1 0m i n 趁 熟抽滤，5 0 0 C 溅厘濮稿定容，加入3 倍髓 稹的乙醇，冰箱保存2 4h 後，1 3 0 0 0r m i n 雕心1 5m i n ，沈溅用少量乙醇洗滁三次，烘 乾。将其溶方八2 0 倍髓稹的水，S e v a g 法去蛋 白，上清液中加入1 的彀聚糖，6 0 0 C 水浴 监不断搅拌，1h 後抽滤。去雕子水中透析 1 天，5 0 。C 减膣溃箱，乙醇沈溅，於4 。C 保 存2 4h 後1 3 0 0 0r m i n 雕心1 5m i n ，沈溅用 少量乙醇洗滁三次，烘乾後榷S e p h a d e xG 1 0
8、0 ( 9 0 1 6c m ) 糸屯化，以0 1m o l LN a C l 洗脱，流速1m L 4m i n ，收集檬品，1 0 0 度 水解，薄板盾析测罩糖粗成，以檩举的罩糖 做封照。 蜜角固醇的分析道雕娈角固醇檬品的裂 倩：精稻1 克矗草我酵粉，加入5 0m L 乙 醇，浸提遇夜，取出上清液，加5 0m L 乙醇 方八滤渣中，回流庭理1 小畴，合饼上清液， 6 0 0 0r m i n 雕心2 0m i n ，溅厘溃辅至1 0 m LoO 4 5l a m 滤膜遇滤，H P L C 分析。 穗套角固醇檬品的裂储：精稀1 克矗草骚 酵粉，加入5 0m L2 0 的氢氧化钾乙醇溶 液，浸提
9、遇夜，取出上清液，加3 0m L2 0 的氢氧化钾乙醇溶液方八滤渣中，回流魔理1 小峙，合饼上清液，减蜃蒸斡去醇，加水 1 0m L 溶解，1 6 0m L 石油醚分三次萃取， 合饼醚液，加入2 0 醋酸中和至中性，溅 厘蒸斡，乙醇定容1 0 m L ，O 4 5g m 滤膜遇 滤，H P L C ( 同核苷和生物献分析方法) o 流 勤相：甲醇：水( 矍蒸水) = 9 2 ：8 ：流速1 0 m L m i n ，D A D2 8 2a m ，柱温4 0 0 Co 连檬量 2 0 “Lo 氨基酸的分析 使用高效液相色藉法 ( H P L C ) o 本寅黩在中圆科挈院，上海生物 化掣研究所完
10、成。 脂肪酸的定性分析氯象色稽一贾藉定性 分析。檬品的魔理：乾燥後的盎草骚酵粉 1 0g ，石油醚回流提取1 0 小睛，溅厘蒸去 石油醚，得油脂i 勺0 3 3 5go 稽取油脂1 0 0 m g ，於1 0m L 具塞弑管中，加入苯一石油醚 ( 髓稹比1 ：1 ) 2m L ，再加入0 5m o l LN a O H 甲醇溶液2m L ，摇均，放匿敷小睛後，沿 管壁加入水，静止，取上屠溶液，加入燕水 硫酸钠後，作属氯象色藉一赁稽檬品。通逍 H PM S D 化擎工作站榆索N I S T9 8 檩辈耍藉 国库，秸合人工分析，碓定脂肪酸的成分。 通遇H PM S D 化犟工作站资料魔理系糸充，按
11、 照锋面稽蹄一化法求得各脂肪酸在矗草粉中 的相封含量。 氯象色稽贾藉恭行睛圈贾稽俄M i c r o m a s s G C T ( U S A ) ：色稽柱：H P - 5 M S ，3 0mx 冬矗夏草我酵粉 0 3 2m m 0 2 5g mo 分析傈件：柱温 8 0 0 C ，保持3m i n ：以每分锺8 。C 升至 2 4 0 。C ：连檬器温度2 8 0 0 C ：雕子源E I ：矗 擎能量7 0e v 。遭檬量l g L ，分流比5 0 ：1 。 金厨元素的分析I C P - A E S 等雕子髓我射 光藉法。俄器T J AI R I S l 0 0 0 美圆熟鼋公 司，本寅黢
12、在苹柬理工大挈分析测弑中心雕 子吸收光稽寅赎室完成。 统针分析所有资料是三佃平行弑黢的平 均敷。 籍果舆封输 粗成份的分析 矗草霰酵粉的粗成份分析秸果兄表1o 粗 蛋白，脂肪和稳糖的量分别属3 0 8 1 、6 4 6 和2 3 3 0 ，含水量和灰分分别属8 4 7 7 和 5 6 0 。 鑫草粉的粗成分接近冬矗夏草的粗成分， 文献赧洋的冬鑫夏草中的粗成份：粗蛋白， 脂肪和碳水化合物的量分别属2 9 1 3 3 、 8 6 2 9 0 9 和1 3 9 4 _ 2 4 2 0 。灰分的含量低 方八文献赧溥的冬蛊夏草子寅髓中的灰份的含 量：8 6 4 o 矗草粉中粗檄雅的含量篇 9 5 5 ，
13、低方八一般野生蘑菇菌蒜中的含量。 主要活性成分 核苷，套角固醇，甘露醇和多醣的分析秸 表2 多矗夏草粉中的主要滑陛成分 8 1 兄表2 ，3 一脱氧腺苷，腺苷和尿苷的含量分 另属4 0 8 1 、7 4 8 4 3 和7 5 5 1 2 g go 腺嘌 呤，尿嘧啶和次黄嘌呤的含量分别属 8 1 0 2 5 、8 3 8 9 和3 8 9 4I r t g g ，生物嫉中腺嘌 呤的含量最高8 1 0 2 5 , g g o 腺苷是冬矗夏草中的主要活性成份之一， 蛊草粉中其含量7 4 8 4 3p g ，高於T a i H a o H s u ( H s ue ta 1 ，2 0 0 2 ) 赧溥
14、的多矗夏草寄主疆 最髓中的合量3 1 1 l a g g ，低於冬鑫夏草子寅 髓中腺苷的含量：1 9 3 0l a g go3 一脱氧腺苷 具有抗艟瘸的作用。蛊草粉中3 一脱氧腺苷 的合量速速高方八天然鑫草和菌糸糸髓中的含 量，S h e i ( S h e ie ta 1 ，19 9 4 ) 赧洋的冬矗夏草 骚酵菌糸糸中蛊草素的最高含量6 7g g go 蛊草粉中甘露醇的含量属1 6 5 8 o 甘露 醇的合量因天然蛊草的彦地而不同，一般在 2 9 8 5 ，菌糸糸中的合量高方A 子寅髓中的含 量。甘露醇是一槿凰味成分，存在方八一般蘑 菇的子寅髓中。 表1 最草我酵粉粗成分 成份 稳糖 粗脂
15、肪 粗蛋白 粗撇稚 灰分 水分 合量( ) 2 3 3 0 6 4 5 3 0 8 1 9 5 5 5 6 0 8 4 8 8 2第七眉海峡雨岸真菌罩擘衍研封舍输文集 矗草粉中水溶性多醣含量1 7 5 9 2m g g ， 由牛乳糖、甘露糖和葡萄糖和粗成。近年 r 来，由杪多醣具有清除自由基、抗氧化、抗 病毒、保肝和抗撇稚化、抗糖尿病以及降低 赡固醇之功能而受到人们的阏注。矗草粉舍 有17 5 9 2m g g 多醣，高方八蘑菇菌糸糸中3 0 8 2 4 6m g g 的含量。矗草粉中的多醣粗成成 分舆矗草多醋的粗成相同，由牛乳糖，甘露 糖和葡萄糖粗成。 蛊革粉中的套角固醇的含量篇1 3 8
16、m g g ，其中游雕娈角固醇的含量霜0 5 4 m g go 套角固醇是真菌生物膜特有的成分。 因此，食品榆赊中用套角固醇的含量作属生 物量指檩。不同瞑菌，其套角固醇的含量不 同，一般1 0 - 6 7 5m g go 套角固醇是V D 2 的前髓物耍，具有重要的檠用俱值。矗草粉 中套角固醇的含量1 3 8m g g ，接近已耀赧 喾的鑫革菌棘髓中娈角固醇的合量的最高 值：1 4 4m g g ，但低方八冬盎夏草和蛹鑫草子 表3 氨基酸租成 寅髓中娈角固醇的含量1 0 6 8 和6 9 2m g g 。 氨基酸的分析 氨基酸的分析秸果兄表3o 矗草粉的1 7 桓氨基酸稳量属2 1 5 9 ，谷氨酸、天门冬 氨酸及苯丙氨酸是三槿主要氨基酸，合量分 别霭3 5 5 、2 4 7 和1 8 4 。人髓所需的 7
