《依折麦布预防饮食诱导的c57bl6鼠胆囊胆固醇结石形成的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《依折麦布预防饮食诱导的c57bl6鼠胆囊胆固醇结石形成的实验研究（102页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名：递煎日期： 2 0 1 0 了J l 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位
2、属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 塑塑 指导教师签名： 主圣兰垒 日 期：型! 竺箜 目录 一、摘要 中文论著摘要l 英文论著摘要7 二、英文缩略语1 4 三、论文 论文一 前言1 5 一日U 舌。 实验材料与方法l5 实验结果( 附彩图) 2 0 讨论2 9 结论3 1 论文二 前言3 2
3、日O 舌3 2 实验材料与方法3 3 实验结果( 附彩图) 3 9 讨论4 6 结论4 8 论文三 前言4 9 实验材料方法4 9 实验结果( 附彩图) 5 5 讨论6 3 结论6 5 论文四 前言6 6日U 舌“? 。6 6 实验材料方法6 6 实验结果( 附彩图) 7 4 讨论8 0 结论8 3 四、本研究创新性的自我评价8 4 五、参考文献8 5 六、附录 综述8 9 在学期间科研成绩9 7 致谢”9 8 个人简历9 9 中文论著摘要 依折麦布预防饮食诱导的C 5 7 B L 6 鼠胆囊胆固醇结石 形成的实验研究 目的 胆囊结石病是由于胆囊胆汁生化学失衡引发的临床疾病，8 0 以上为胆固
4、醇 结石病( C G D ) 。目前公认的C G D 治疗方法是胆囊切除术，但该种治疗方法具 有创伤性，存在发生胆管损伤等严重并发症的风险，治疗费用较高。因此，更加 透彻地认识C G D 的发病机制，寻找有效的、无创的预防和治疗C G D 的方法越来 越必要。 关于C G D 发病机制的研究已从A d m i r a n d 和S m a l l 基于热力学的生物化学理 论解释转移到多种因素综合作用的学说，如胆固醇过量分泌及所伴随的胆汁非生 理性过饱和、胆囊的运动功能下降及所伴随的胆汁淤积、胆汁中胆固醇结晶形成 及促成核因子和抗成核因子作用的失衡等，而且与C G D 发病有关的脏器研究也扩 展
5、到肝脏、胆囊和肠道。虽然C G D 这种受环境和遗传因素交互影响的多因素疾病 的发病机制迄今还不十分明晰，但公认的是胆汁中胆固醇的非生理性过饱和是 C G D 发病的标志性病理生理改变。然而，胆汁胆固醇的过量分泌、小肠胆固醇的 吸收、胆固醇的逆向转运和体内胆固醇的合成这些胆固醇代谢过程中的重要环节 在C G D 发病中的作用和相互影响机制还有许多研究的空白领域。 研究表明肠腔中饮食来源和胆汁来源的胆固醇的获得和小肠固醇吸收的效能 与结石易感群体的成石状态密切相关，因此抑制了胆固醇小肠吸收这一过程就可 能对C G D 的预防和治疗起到有益作用。 依折麦布( E Z E T ) 是美国先灵葆雅公司
6、新近研发并获得美国F D A 批准上市 的一种口服、强效的降脂药物。E Z E T 选择性抑N d , 肠粘膜细胞刷状缘对胆固醇的 摄取和吸收，将胆固醇限制在肠腔内随粪便排出体外，从而降低血循环中胆固醇 的水平，进而降低小肠中的胆固醇向肝脏中的转运。已经证实N i e m a n n P i c kC 1l i k e l 蛋I 刍( n p c l l l ) 是E Z E T 的作用靶点。 本研究旨在建立致石饮食诱发的C 5 7 B L 6 鼠胆囊胆固醇结石动物模型，并在 此基础上观察E Z E T 对致石饮食诱发的C 5 7 B L 6 鼠胆囊胆固醇结石形成、胆囊运 动功能和肝脏脂质代谢
7、的影响。 实验方法 一、动物模型的建立 雄性C 5 7 B L 6 鼠，8 1 0 周龄，体质量l l - 1 6 9 ，对照组( 2 0 只) 饲以普通饲 料( 胆固醇含量0 0 2 ( w t w t ) ) ；致石组( 2 0 只) 饲以高胆固醇高脂肪胆酸致 石饲料( 含2 胆固醇、0 5 胆酸和1 5 脂肪) 。喂饲8 周后取材。 二、实验对象分组和给药 1 、E Z E T 对胆囊胆固醇结石形成影响实验 随机分为4 组：( 1 ) 致石饮食+ 蒸馏水组( E Z E T - 0 ) ：2 0 只；( 2 ) 致石饮食 + E Z E T ( 1 m g k g d ) 组( E Z
8、E T - 1 ) ：2 0 只；( 3 ) 致石饮食+ E Z E T ( 5 m g k g d ) 组( E Z E T - 2 ) 2 0 只；( 4 ) 致石饮食+ E Z E T ( 1 0 m g k g d ) 组( E Z E T - 3 ) ：2 0 只。 2 、E Z E T 对胆囊运动功能影响实验 随机分为5 组：( 1 ) 普通饮食+ 蒸馏水组( C O N ) ：5 只；( 2 ) 致石饮食+ 蒸馏 水组( E Z E T - 0 ) ：5 只；( 3 ) 致石饮食+ E Z E T ( 1 m g k g d ) 组( E Z E T - 1 ) ：5 只；( 4
9、 ) 致石饮食+ E Z E T ( 5 m g k g d ) 组( E Z E T - 2 ) - 5 只；( 5 ) 致石饮食+ E Z E T ( 1 0 m g k g d ) 组( E Z E T - 3 ) ：5 只。 一 3 、E Z E T 对肝脏脂质代谢影响实验 随机分为3 组：( 1 ) 普通饮食+ 蒸馏水组( C O N ) ：2 0 只；( 2 ) 致石饮食+ 蒸 馏水组( L I T H ) - 2 0 只；( 3 ) 致石饮食+ E Z E T ( 5 m g k g d ) 组( E Z E T ) “ 2 0 只。 三、标本采集和实验方法 1 、1 0 水合氯
10、醛腹腔注射麻醉后，取腹部正中切口，记录成石情况，测量胆 囊长径和宽径，收集胆囊胆汁，胆总管置P E 管收集肝胆汁并计量，切取胆囊组织、 全部肝脏( 称重) 、空肠起始段l c m ，下腔静脉穿刺取血。 2 、按椭圆形公式计算胆囊体积，计算肝胆汁分泌速率。 2 3 、红外光谱溴化钾压片法，对采集的结石成分进行定性分析。 4 、胆囊胆汁涂片后于偏光显微镜下观察。 5 、采用全自动生化分析仪检测胆汁中胆固醇、磷脂和胆汁酸的浓度并计算胆 固醇饱和指数( C S I ) 。 6 、透射电镜下观察肝脏细胞超微结构。 7 、颈静脉置管后以1 7 n m o l K g 体重给予外源性C C K - 8 ，收
11、集每1 0 m i n 肝胆汁 计量统计。 8 、胆囊组织H E 染色和饱和苦味酸天狼猩红染色，光镜下和偏光显微镜下观 察组织学改变和胆囊壁胶原沉积。 9 、采用全自动生化分析仪检测血清中胆固醇、甘油三酯、胆汁酸和谷丙转氨 酶的含量。 1 0 、肝脏组织油红O 染色，光镜下观察肝脏脂质沉积情况。 1 1 、肝脏组织H E 染色和脂肪浸润评分。 1 2 、采用W e s t e r nb l o t 方法检测肝脏组织主要肝胆转运蛋白a b c b l l 、a b c 9 5 、a b c 9 8 和a b e b 4 蛋白的表达；检测空肠粘膜上皮n p c l l l 蛋白的表达。 实验结果
12、一、C 5 7 B L 6 鼠胆囊胆固醇结石动物模型的建立 肉眼观察：对照组小鼠成石率为0 ( 0 1 9 ) 。致石组成石率为1 0 0 ( 1 8 1 8 ) 。 结石经溴化钾压片红外光谱检测证实为胆固醇结石。 对照组小鼠胆囊体积为( 2 2 6 - a ：8 3 5 ) 山，致石组胆囊体积为( 6 3 2 + 1 0 6 ) 山， 二者相比具有统计学差异( t = 1 2 9 8 ，p I ，为 胆固醇过饱和胆汁；偏光显微镜下的观察结果也提示胆汁中明显的胆固醇性结石 形成，这些结果提示C 5 7 B L 6 小鼠胆囊胆固醇结石模型构模的病理生理学基础是 胆囊胆汁中胆固醇的非生理性过饱和。
13、 此外，我们在构建该模型时还发现小鼠胆囊的容积明显增大、肝胆汁分泌速 率加快，这提示我们胆囊胆固醇结石C 5 7 B L 6 小鼠的胆囊运动功能和胆汁流量发 生了明显的变化，这可能也是该模型构模的病理生理学基础之一。我们通过透射 电镜观察小鼠肝脏的超微结构，发现高脂饮食诱导的C 5 7 B L 6 小鼠胆囊胆固醇结 石模型的肝脏呈现脂肪性肝病的典型表现，这提示该小鼠可兼做非酒精性脂肪肝 的动物模型。 由于人体胆囊功能复杂和实验动物不敏感等多种因素，任何一种实验动物模 型都不能全面、准确地反映胆石病的本质，满足所有科研的需要。因此，建立一 个能完全反映人类胆石病的动物模型比较困难。随着对胆石病研究的深入，相应 动物模型的建立势在必行，
