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1、流式细胞术的原理及应用 Science is hard. FCM should be easy. BD Introduction FCM Principles FCM Applications BD Accuri C6 BD Introduction BD是由Maxwell W. Becton和Fairleigh S. Dickinson 于 1897年在纽约创立的，总部设在新泽西州。 经过一百多年的发展，BD已成为世界上最大的医疗技术及医 疗设备公司之一，它以领先的技术、卓越的产品质量和诚实可 信的服务赢得了全球用户及合作伙伴的广泛赞誉。 Fairlegh S. Dickinson Maxw
2、ell W. Becton BD生物科学作为BD的一个业务组成，一直致力于为生命 科学研究者和临床医生提供创新的临床和科研工具。其主要 产品包括流式细胞仪；细胞图象分析系统；单克隆抗体和试 剂盒；药物研发产品及临床诊断试剂等。 1973年世界第一台商品化的流式细胞仪FACS I BD Introduction BD HLA-B27 Kit Stem Cells T Cells Research BD Introduction BD Introduction BD Introduction 流式专业论坛 BD Introduction BD Introduction FCM Principles
3、 FCM Applications BD Accuri C6 流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种快速、准确、客观 的同时检测直线流动状态中单个细胞多项物理及生物学特性，加以分析定 量的技术。 检测速度快，分析样本量大在极短时间内可分析大量细胞，这 是流式不同于其他细胞分析仪器的主要特点，可以每秒钟上万个细胞的速 率进行测量。 可检测的样本种类多样各种细胞（如外周血，骨髓，实体组织， 悬浮或贴壁培养的细胞），微生物，人工合成微球。 Flow Cytometry Principles Flow Cytometry Principles 液流系统 液流系统将样本悬液聚焦在
4、光源的中心处 Injector Tip Fluorescence signals Focused laser beam Sheath fluid 鞘液作用 1.避免堵塞管道 2.约束样本位于中心、提高测量精度 光学系统 激发光学系统 激光器（C6：488nm & 640nm） 透镜和反射镜 接收光学系统 滤光片 电子系统 Laser Laser Laser Time Voltage Time Voltage Time Voltage -将模拟信号转化为数字信号 -计算每个脉冲峰的高度H，宽度W和面积A -和计算机连接以传出数据 散射光信号，散点图 (Dot Plot)(Dot Plot) 流式
5、细胞仪的工作原理 荧光信号 某些物质在特定波长范围内的光线照射下，可发出波长比 照射光波长长的光线-即荧光。而这些受激发后能产生荧 光的物质称为荧光素 单参数荧光直方图 双参数荧光散点图 样本收集及处理 流式细胞术操作流程 免疫荧光染色 上机检测 数据分析 制备单细胞悬液 BD Introduction FCM Principles FCM Applications BD Accuri C6 细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面积 核浆比例 DNA含量与细胞周 期 RNA含量 蛋白质含量 细胞功能 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 细胞活性 细胞内/外的细胞因子 激素结合位点、细胞受体 蛋白
6、磷酸化 pH值 钙离子浓度 细胞膜电位、线粒体膜电位 Flow Cytometry Applications Flow Cytometry Applications G2 M G0 G1 s Journal of Molecular Signaling 2011, 6:13 细胞周期 & 倍体分析 Flow Cytometry Applications Annexin V，PI双染法检测细胞凋亡 细胞凋亡分析 Flow Cytometry Applications Channels (CFSE-A) 050100150200250 Number 0100200300400500600 Chan
7、nels (CFSE-A) 04080120160200 Number 04080120160 细胞增殖分析 - CFSE标记法 Flow Cytometry Applications 免疫学研究 Flow Cytometry Applications Flow Cytometry Applications 根据功能，淋巴细胞主要分为 T淋巴细胞（CD3+），与细 胞免疫有关总T和总B可以用来 判断某些免疫缺陷和自身免疫 性疾病 B淋巴细胞（CD19+）与体液 免疫有关 NK细胞（CD3-CD16+56+） ，行使免疫监控功能， 能够介 导对某些肿瘤细胞和病毒感染 细胞的细胞毒性作用。 淋巴细
8、胞亚群分析 Flow Cytometry Applications 调节性T细胞（Tregs） Tregs在抑制重要的病理性的免疫反应中，如：过敏反应、 自身免疫病、免疫-炎症状况等有重要影响。 表面标志：CD4，CD25，CD127，FOXp3 Flow Cytometry Applications 北京时间10月8日，2012年诺贝尔生理学或医学奖揭晓，约翰 戈登（John B. Gurdon）和山中伸弥（Shinya Yamanaka） 获奖，获奖理由为“发现成熟细胞可被重编程变为多能性”。 干细胞研究 c-Myc Oct3/4 Klf4 Sox2 Flow Cytometry Appl
9、ications 干细胞研究方法-FCM FCM应用 胞内 胞外 上清 细胞培养 分化 寻找生物标记 Stem Cells定性 Side Population 分析 Stem Cells分离 Flow Cytometry Applications 毒理药理实验 微核分析 正在复制的细胞由于出现染色体断裂或者纺锤装置功能异 常而导致有丝分裂染色体分布紊乱，分裂后期这些染色体 碎片或整条染色体遗留在细胞液中，即所谓微核 (micronucleus，MN) 传统的微核计数方法枯燥、耗时，而且易受操作者主观因 素影响，流式细胞术(flow cytometry，FCM)计数是一种 高通量、客观、灵敏和自
10、动化的替代方法。微核具有边缘 清晰和特异染色的特征，尤其适用于FCM技术进行自动化 计数。 Flow Cytometry Applications 超冷甲醛固定 洗去超冷甲醛或 LTSS 将细胞与RNase, anti-CD71-FITC 和 anti- Platelet-PE共同孵育 加入碘化丙啶溶液 用生物标准样品校准流式细胞仪 （488nm 激发光） 分析实验用血样 将固定后的样本置于长期 保存溶液(LTSS)中。若储 存恰当，可至少保存3年。 血液样本处理 Flow Cytometry Applications 流式检测微核实验结果 Flow Cytometry Application
11、s FCM与常规方法相比的优势 首先，在数小时内FCM可以分析30个动物血样，而在相同的时间内常规显 微镜阅片只能完成5张左右。 此外，使用FCM每个血样至少分析20 000个RET，是常规骨髓阅片的10 倍，大大增加了MN检测的准确性和统计能力， 也可基本满足目前分子生 物学大量候选化合物的高通量毒性筛选要求； 除速度和通量提高以外，FCM亦能得出MN大小和分布的资 料，即PI相关 的荧光数值的大小(如DNA含量)，这也有利于MN形成机制的研究，区分 该遗传毒性化合物是DNA断裂剂还是非整倍体诱导剂 Flow Cytometry Applications BD Introduction FC
12、M Principles FCM Applications BD Accuri C6 BD Flow Cytometers 所有接收器环绕流动室排 列，信号直接被检测器接 收，大幅提升接收效率 滤光片可以根据需要更换 ，满足不同检测需求 专利环形光路 Existing System 24-bit Accuri C6 就好比为流式技术装上了超宽屏幕！ 跨越107.2的超高动态范围，免调电压 BD Flow Cytometers FL3 = 670LP FL1 = 530/30 FL2 = 585/40 FL4 = 675/25 Pre-Optimized Detectors - Adjust V
13、iew with Zoom 高灵敏度，低CV，更适合细胞周期等实验 BD Flow Cytometers CFlow软件，简单易用，30 min时间即可操作 免调电压，脱机补偿 软件无加密，可安装到用户个人电脑上进行分析 图和统计数据可直接导出为PPT或Excel，或拖至Word分析 关机自动清洗，节省您的宝贵时间 BD Flow Cytometers C6软件，简单即用,30分钟即可掌握，支持彩色显示，单界面涵盖所有主要功能 BD Flow Cytometers Simple 使用简单 Multiplex 多重功能 Accurate 结果精确 Receptible price 价格合理 Transportable 便携性强 SMART Choice BD Flow Cytometers BD流式细胞术培训中心COE（上海，北京） BD每年开展巡回学术讲座（全国各大城市） BD编撰Flow Cytometry刊物，不断向客 户传达更多、 更新的流式资讯 BD Be With You ! BD为您提供专业流式服务 Thanks!
