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1、每种免疫组织化学染色的操作规程1.ER免疫组织化学染色操作规程(1) 查对蜡块号码,标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。(2) 切片,切片刀应保持锋利,切片厚度:3-5m,切片保持完整,无皱褶及气泡,载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处,于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。(3) 63恒温箱烤片1.5-2小时。(4) 切片脱蜡,三级二甲苯,每级5分钟,三级酒精,每级5分钟。水洗两次,蒸馏水洗两次,PBS浸泡5分钟。(5) 抗原修复:柠檬酸盐缓冲液热修复,高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml,加热至沸腾,放入切片,盖上锅盖及减压阀,待减压阀喷气后计时2.5-3分钟,然
2、后将压力锅端离热源,流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后,PBS洗三次,每次2分钟。(6) 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次,每次2分钟。(7) 滴加一抗,室温或37孵育1-2小时或4过夜,PBS洗三次,每次2分钟。(8) 滴加试剂1,室温或37孵育20分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(9) 滴加试剂2,室温或37孵育20-30分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(10) 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制:蒸馏水1ml,试剂A(浓缩缓冲液)、试剂B(浓缩DAB溶液)、试剂C(浓缩过氧化氢溶液)各一滴,混匀。滴加于组织片上,镜下控制着色,显色完全后水洗终止着
3、色。(11) 自来水充分冲洗,苏木素复染5分钟,1%盐酸酒精分化,流动水冲洗返蓝。(12) 三级酒精,每级5分钟,三级二甲苯,每级5分钟。切片晾干后封片。2.c-erbB-2免疫组织化学染色操作规程(1) 查对蜡块号码,标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。(2) 切片,切片刀应保持锋利,切片厚度:3-5m,切片保持完整,无皱褶及气泡,载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处,于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。(3) 63恒温箱烤片1.5-2小时。(4) 切片脱蜡,三级二甲苯,每级5分钟,三级酒精,每级5分钟。水洗两次,蒸馏水洗两次,PBS浸泡5分钟。(5) 抗原修复:柠
4、檬酸盐缓冲液热修复,高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml,加热至沸腾,放入切片,盖上锅盖及减压阀,待减压阀喷气后计时2.5-3分钟,然后将压力锅端离热源,流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后,PBS洗三次,每次2分钟。(6) 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次,每次2分钟。(7) 滴加一抗,室温或37孵育1-2小时或4过夜,PBS洗三次,每次2分钟。(8) 滴加试剂1,室温或37孵育20分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(9) 滴加试剂2,室温或37孵育20-30分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(10) 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制:蒸馏水1ml,试
5、剂A(浓缩缓冲液)、试剂B(浓缩DAB溶液)、试剂C(浓缩过氧化氢溶液)各一滴,混匀。滴加于组织片上,镜下控制着色,显色完全后水洗终止着色。(11) 自来水充分冲洗,苏木素复染5分钟,1%盐酸酒精分化,流动水冲洗返蓝。(12) 三级酒精,每级5分钟,三级二甲苯,每级5分钟。切片晾干后封片。3.PR免疫组织化学染色操作规程(1) 查对蜡块号码,标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。(2) 切片,切片刀应保持锋利,切片厚度:3-5m,切片保持完整,无皱褶及气泡,载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处,于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。(3) 63恒温箱烤片1.5-2小时。(
6、4) 切片脱蜡,三级二甲苯,每级5分钟,三级酒精,每级5分钟。水洗两次,蒸馏水洗两次,PBS浸泡5分钟。(5) 抗原修复:柠檬酸盐缓冲液热修复,高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml,加热至沸腾,放入切片,盖上锅盖及减压阀,待减压阀喷气后计时2.5-3分钟,然后将压力锅端离热源,流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后,PBS洗三次,每次2分钟。(6) 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次,每次2分钟。(7) 滴加一抗,室温或37孵育1-2小时或4过夜,PBS洗三次,每次2分钟。(8) 滴加试剂1,室温或37孵育20分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(9) 滴加试剂
7、2,室温或37孵育20-30分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(10) 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制:蒸馏水1ml,试剂A(浓缩缓冲液)、试剂B(浓缩DAB溶液)、试剂C(浓缩过氧化氢溶液)各一滴,混匀。滴加于组织片上,镜下控制着色,显色完全后水洗终止着色。(11) 自来水充分冲洗,苏木素复染5分钟,1%盐酸酒精分化,流动水冲洗返蓝。(12) 三级酒精,每级5分钟,三级二甲苯,每级5分钟。切片晾干后封片。4.Ki67免疫组织化学染色操作规程(1) 查对蜡块号码,标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。(2) 切片,切片刀应保持锋利,切片厚度:3-5m,切片保持完整,无皱褶及气泡,载玻片采用免
8、疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处,于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。(3) 63恒温箱烤片1.5-2小时。(4) 切片脱蜡,三级二甲苯,每级5分钟,三级酒精,每级5分钟。水洗两次,蒸馏水洗两次,PBS浸泡5分钟。(5) 抗原修复:柠檬酸盐缓冲液热修复,高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml,加热至沸腾,放入切片,盖上锅盖及减压阀,待减压阀喷气后计时2.5-3分钟,然后将压力锅端离热源,流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后,PBS洗三次,每次2分钟。(6) 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次,每次2分钟。(7) 滴加一抗,室温或37孵育1-
9、2小时或4过夜,PBS洗三次,每次2分钟。(8) 滴加试剂1,室温或37孵育20分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(9) 滴加试剂2,室温或37孵育20-30分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(10) 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制:蒸馏水1ml,试剂A(浓缩缓冲液)、试剂B(浓缩DAB溶液)、试剂C(浓缩过氧化氢溶液)各一滴,混匀。滴加于组织片上,镜下控制着色,显色完全后水洗终止着色。(11) 自来水充分冲洗,苏木素复染5分钟,1%盐酸酒精分化,流动水冲洗返蓝。(12) 三级酒精,每级5分钟,三级二甲苯,每级5分钟。切片晾干后封片。5. S-100免疫组织化学染色操作规程(1) 查对蜡块号
10、码,标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。(2) 切片,切片刀应保持锋利,切片厚度:3-5m,切片保持完整,无皱褶及气泡,载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处,于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。(3) 63恒温箱烤片1.5-2小时。(4) 切片脱蜡,三级二甲苯,每级5分钟,三级酒精,每级5分钟。水洗两次,蒸馏水洗两次,PBS浸泡5分钟。(5) 抗原修复:柠檬酸盐缓冲液热修复,高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml,加热至沸腾,放入切片,盖上锅盖及减压阀,待减压阀喷气后计时2.5-3分钟,然后将压力锅端离热源,流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后,PBS洗三次,每次2分
11、钟。(6) 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次,每次2分钟。(7) 滴加一抗,室温或37孵育1-2小时或4过夜,PBS洗三次,每次2分钟。(8) 滴加试剂1,室温或37孵育20分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(9) 滴加试剂2,室温或37孵育20-30分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(10) 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制:蒸馏水1ml,试剂A(浓缩缓冲液)、试剂B(浓缩DAB溶液)、试剂C(浓缩过氧化氢溶液)各一滴,混匀。滴加于组织片上,镜下控制着色,显色完全后水洗终止着色。(11) 自来水充分冲洗,苏木素复染5分钟,1%盐酸酒精分化,流动水冲洗返蓝
12、。(12) 三级酒精,每级5分钟,三级二甲苯,每级5分钟。切片晾干后封片。6. P504S免疫组织化学染色操作规程(1) 查对蜡块号码,标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。(2) 切片,切片刀应保持锋利,切片厚度:3-5m,切片保持完整,无皱褶及气泡,载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处,于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。(3) 63恒温箱烤片1.5-2小时。(4) 切片脱蜡,三级二甲苯,每级5分钟,三级酒精,每级5分钟。水洗两次,蒸馏水洗两次,PBS浸泡5分钟。(5) 抗原修复:柠檬酸盐缓冲液热修复,高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml,加热至沸腾,放入切片,盖
13、上锅盖及减压阀,待减压阀喷气后计时2.5-3分钟,然后将压力锅端离热源,流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后,PBS洗三次,每次2分钟。(6) 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次,每次2分钟。(7) 滴加一抗,室温或37孵育1-2小时或4过夜,PBS洗三次,每次2分钟。(8) 滴加试剂1,室温或37孵育20分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(9) 滴加试剂2,室温或37孵育20-30分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(10) 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制:蒸馏水1ml,试剂A(浓缩缓冲液)、试剂B(浓缩DAB溶液)、试剂C(浓缩过氧化氢溶液)各一滴,混匀
14、。滴加于组织片上,镜下控制着色,显色完全后水洗终止着色。(11) 自来水充分冲洗,苏木素复染5分钟,1%盐酸酒精分化,流动水冲洗返蓝。(12) 三级酒精,每级5分钟,三级二甲苯,每级5分钟。切片晾干后封片。7. 34E12免疫组织化学染色操作规程(1) 查对蜡块号码,标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。(2) 切片,切片刀应保持锋利,切片厚度:3-5m,切片保持完整,无皱褶及气泡,载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处,于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。(3) 63恒温箱烤片1.5-2小时。(4) 切片脱蜡,三级二甲苯,每级5分钟,三级酒精,每级5分钟。水洗两次,蒸馏
15、水洗两次,PBS浸泡5分钟。(5) 抗原修复:柠檬酸盐缓冲液热修复,高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml,加热至沸腾,放入切片,盖上锅盖及减压阀,待减压阀喷气后计时2.5-3分钟,然后将压力锅端离热源,流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后,PBS洗三次,每次2分钟。(6) 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次,每次2分钟。(7) 滴加一抗,室温或37孵育1-2小时或4过夜,PBS洗三次,每次2分钟。(8) 滴加试剂1,室温或37孵育20分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(9) 滴加试剂2,室温或37孵育20-30分钟,PBS洗三次,每次2分钟。(10) 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制:蒸馏水1ml,试剂A(浓缩缓冲液)、试剂B(浓缩DAB溶液)、试剂C(浓缩过氧化氢溶液)各一滴,混匀。滴加于组织片上,镜下控制着色,显色完全后水洗终止着色。(11) 自来水充分冲洗,苏木素复染5分钟,1%盐酸酒精分化,流动水冲洗返蓝。(12) 三级酒精,每级5分钟,三级二甲苯,每级5分钟。切片晾干后封片。8. P63免疫组织化学染色操作规程(1) 查对蜡块号码,标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。(2) 切片,切片刀应保持锋利,切片厚度:3-5m,切片保持完整,无皱褶及气泡,载玻片采用免疫组织化