《每种免疫组织化学染色的操作规程》由会员分享，可在线阅读，更多相关《每种免疫组织化学染色的操作规程（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、每种免疫组织化学染色的操作规程1.ER免疫组织化学染色操作规程（1） 查对蜡块号码，标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。（2） 切片，切片刀应保持锋利，切片厚度：3-5m，切片保持完整，无皱褶及气泡，载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处，于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。（3） 63恒温箱烤片1.5-2小时。（4） 切片脱蜡，三级二甲苯，每级5分钟，三级酒精，每级5分钟。水洗两次，蒸馏水洗两次，PBS浸泡5分钟。（5） 抗原修复：柠檬酸盐缓冲液热修复，高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml，加热至沸腾，放入切片，盖上锅盖及减压阀，待减压阀喷气后计时2.5-3分钟，然
2、后将压力锅端离热源，流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后，PBS洗三次，每次2分钟。（6） 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次，每次2分钟。（7） 滴加一抗，室温或37孵育1-2小时或4过夜，PBS洗三次，每次2分钟。（8） 滴加试剂1，室温或37孵育20分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（9） 滴加试剂2，室温或37孵育20-30分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（10） 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制：蒸馏水1ml，试剂A（浓缩缓冲液）、试剂B（浓缩DAB溶液）、试剂C（浓缩过氧化氢溶液）各一滴，混匀。滴加于组织片上，镜下控制着色，显色完全后水洗终止着
3、色。（11） 自来水充分冲洗，苏木素复染5分钟，1%盐酸酒精分化，流动水冲洗返蓝。（12） 三级酒精，每级5分钟，三级二甲苯，每级5分钟。切片晾干后封片。2.c-erbB-2免疫组织化学染色操作规程（1） 查对蜡块号码，标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。（2） 切片，切片刀应保持锋利，切片厚度：3-5m，切片保持完整，无皱褶及气泡，载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处，于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。（3） 63恒温箱烤片1.5-2小时。（4） 切片脱蜡，三级二甲苯，每级5分钟，三级酒精，每级5分钟。水洗两次，蒸馏水洗两次，PBS浸泡5分钟。（5） 抗原修复：柠
4、檬酸盐缓冲液热修复，高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml，加热至沸腾，放入切片，盖上锅盖及减压阀，待减压阀喷气后计时2.5-3分钟，然后将压力锅端离热源，流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后，PBS洗三次，每次2分钟。（6） 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次，每次2分钟。（7） 滴加一抗，室温或37孵育1-2小时或4过夜，PBS洗三次，每次2分钟。（8） 滴加试剂1，室温或37孵育20分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（9） 滴加试剂2，室温或37孵育20-30分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（10） 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制：蒸馏水1ml，试
5、剂A（浓缩缓冲液）、试剂B（浓缩DAB溶液）、试剂C（浓缩过氧化氢溶液）各一滴，混匀。滴加于组织片上，镜下控制着色，显色完全后水洗终止着色。（11） 自来水充分冲洗，苏木素复染5分钟，1%盐酸酒精分化，流动水冲洗返蓝。（12） 三级酒精，每级5分钟，三级二甲苯，每级5分钟。切片晾干后封片。3.PR免疫组织化学染色操作规程（1） 查对蜡块号码，标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。（2） 切片，切片刀应保持锋利，切片厚度：3-5m，切片保持完整，无皱褶及气泡，载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处，于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。（3） 63恒温箱烤片1.5-2小时。（
6、4） 切片脱蜡，三级二甲苯，每级5分钟，三级酒精，每级5分钟。水洗两次，蒸馏水洗两次，PBS浸泡5分钟。（5） 抗原修复：柠檬酸盐缓冲液热修复，高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml，加热至沸腾，放入切片，盖上锅盖及减压阀，待减压阀喷气后计时2.5-3分钟，然后将压力锅端离热源，流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后，PBS洗三次，每次2分钟。（6） 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次，每次2分钟。（7） 滴加一抗，室温或37孵育1-2小时或4过夜，PBS洗三次，每次2分钟。（8） 滴加试剂1，室温或37孵育20分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（9） 滴加试剂
7、2，室温或37孵育20-30分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（10） 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制：蒸馏水1ml，试剂A（浓缩缓冲液）、试剂B（浓缩DAB溶液）、试剂C（浓缩过氧化氢溶液）各一滴，混匀。滴加于组织片上，镜下控制着色，显色完全后水洗终止着色。（11） 自来水充分冲洗，苏木素复染5分钟，1%盐酸酒精分化，流动水冲洗返蓝。（12） 三级酒精，每级5分钟，三级二甲苯，每级5分钟。切片晾干后封片。4.Ki67免疫组织化学染色操作规程（1） 查对蜡块号码，标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。（2） 切片，切片刀应保持锋利，切片厚度：3-5m，切片保持完整，无皱褶及气泡，载玻片采用免
8、疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处，于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。（3） 63恒温箱烤片1.5-2小时。（4） 切片脱蜡，三级二甲苯，每级5分钟，三级酒精，每级5分钟。水洗两次，蒸馏水洗两次，PBS浸泡5分钟。（5） 抗原修复：柠檬酸盐缓冲液热修复，高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml，加热至沸腾，放入切片，盖上锅盖及减压阀，待减压阀喷气后计时2.5-3分钟，然后将压力锅端离热源，流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后，PBS洗三次，每次2分钟。（6） 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次，每次2分钟。（7） 滴加一抗，室温或37孵育1-
9、2小时或4过夜，PBS洗三次，每次2分钟。（8） 滴加试剂1，室温或37孵育20分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（9） 滴加试剂2，室温或37孵育20-30分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（10） 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制：蒸馏水1ml，试剂A（浓缩缓冲液）、试剂B（浓缩DAB溶液）、试剂C（浓缩过氧化氢溶液）各一滴，混匀。滴加于组织片上，镜下控制着色，显色完全后水洗终止着色。（11） 自来水充分冲洗，苏木素复染5分钟，1%盐酸酒精分化，流动水冲洗返蓝。（12） 三级酒精，每级5分钟，三级二甲苯，每级5分钟。切片晾干后封片。5. S-100免疫组织化学染色操作规程（1） 查对蜡块号
10、码，标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。（2） 切片，切片刀应保持锋利，切片厚度：3-5m，切片保持完整，无皱褶及气泡，载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处，于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。（3） 63恒温箱烤片1.5-2小时。（4） 切片脱蜡，三级二甲苯，每级5分钟，三级酒精，每级5分钟。水洗两次，蒸馏水洗两次，PBS浸泡5分钟。（5） 抗原修复：柠檬酸盐缓冲液热修复，高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml，加热至沸腾，放入切片，盖上锅盖及减压阀，待减压阀喷气后计时2.5-3分钟，然后将压力锅端离热源，流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后，PBS洗三次，每次2分
11、钟。（6） 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次，每次2分钟。（7） 滴加一抗，室温或37孵育1-2小时或4过夜，PBS洗三次，每次2分钟。（8） 滴加试剂1，室温或37孵育20分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（9） 滴加试剂2，室温或37孵育20-30分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（10） 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制：蒸馏水1ml，试剂A（浓缩缓冲液）、试剂B（浓缩DAB溶液）、试剂C（浓缩过氧化氢溶液）各一滴，混匀。滴加于组织片上，镜下控制着色，显色完全后水洗终止着色。（11） 自来水充分冲洗，苏木素复染5分钟，1%盐酸酒精分化，流动水冲洗返蓝
12、。（12） 三级酒精，每级5分钟，三级二甲苯，每级5分钟。切片晾干后封片。6. P504S免疫组织化学染色操作规程（1） 查对蜡块号码，标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。（2） 切片，切片刀应保持锋利，切片厚度：3-5m，切片保持完整，无皱褶及气泡，载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处，于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。（3） 63恒温箱烤片1.5-2小时。（4） 切片脱蜡，三级二甲苯，每级5分钟，三级酒精，每级5分钟。水洗两次，蒸馏水洗两次，PBS浸泡5分钟。（5） 抗原修复：柠檬酸盐缓冲液热修复，高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml，加热至沸腾，放入切片，盖
13、上锅盖及减压阀，待减压阀喷气后计时2.5-3分钟，然后将压力锅端离热源，流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后，PBS洗三次，每次2分钟。（6） 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次，每次2分钟。（7） 滴加一抗，室温或37孵育1-2小时或4过夜，PBS洗三次，每次2分钟。（8） 滴加试剂1，室温或37孵育20分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（9） 滴加试剂2，室温或37孵育20-30分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（10） 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制：蒸馏水1ml，试剂A（浓缩缓冲液）、试剂B（浓缩DAB溶液）、试剂C（浓缩过氧化氢溶液）各一滴，混匀
14、。滴加于组织片上，镜下控制着色，显色完全后水洗终止着色。（11） 自来水充分冲洗，苏木素复染5分钟，1%盐酸酒精分化，流动水冲洗返蓝。（12） 三级酒精，每级5分钟，三级二甲苯，每级5分钟。切片晾干后封片。7. 34E12免疫组织化学染色操作规程（1） 查对蜡块号码，标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。（2） 切片，切片刀应保持锋利，切片厚度：3-5m，切片保持完整，无皱褶及气泡，载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处，于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。（3） 63恒温箱烤片1.5-2小时。（4） 切片脱蜡，三级二甲苯，每级5分钟，三级酒精，每级5分钟。水洗两次，蒸馏
15、水洗两次，PBS浸泡5分钟。（5） 抗原修复：柠檬酸盐缓冲液热修复，高压锅内加入柠檬酸盐缓冲液1000ml，加热至沸腾，放入切片，盖上锅盖及减压阀，待减压阀喷气后计时2.5-3分钟，然后将压力锅端离热源，流动自来水冲洗冷却至室温。蒸馏水洗后，PBS洗三次，每次2分钟。（6） 3%过氧化氢去离子水孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次，每次2分钟。（7） 滴加一抗，室温或37孵育1-2小时或4过夜，PBS洗三次，每次2分钟。（8） 滴加试剂1，室温或37孵育20分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（9） 滴加试剂2，室温或37孵育20-30分钟，PBS洗三次，每次2分钟。（10） 应用DAB溶液显色。DAB显色液配制：蒸馏水1ml，试剂A（浓缩缓冲液）、试剂B（浓缩DAB溶液）、试剂C（浓缩过氧化氢溶液）各一滴，混匀。滴加于组织片上，镜下控制着色，显色完全后水洗终止着色。（11） 自来水充分冲洗，苏木素复染5分钟，1%盐酸酒精分化，流动水冲洗返蓝。（12） 三级酒精，每级5分钟，三级二甲苯，每级5分钟。切片晾干后封片。8. P63免疫组织化学染色操作规程（1） 查对蜡块号码，标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。（2） 切片，切片刀应保持锋利，切片厚度：3-5m，切片保持完整，无皱褶及气泡，载玻片采用免疫组织化
