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1、第十一章第十一章黄酮类化合物黄酮类化合物FlavonoidsOOOOHOHHOOHOOHOHOHOOH3CHOOHOHOHOHHO OOHOH2黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离原理：黄酮类化合物具有酸性、且不同数目和不同位置的酚羟基的酸性强弱不同适用范围： 适用于分离酸性强弱不同的黄酮苷元酸性： 7,4 -OH 7-或 4 -OH 一般酚 OH5-OH溶于 5%NaHCO3溶于 5%NaCO3溶于不同浓度NaOHpH梯度萃取法梯度萃取法3黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离乙醚液乙醚液（脂杂）（脂杂）乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液碱液碱液(7,4-二二OH黄酮
2、黄酮)碱液碱液(7或或4-OH黄酮黄酮)乙醚液乙醚液碱液碱液(3或或5-OH黄酮黄酮)碱液碱液(一般酚一般酚OH黄酮黄酮)5% NaHCO35% Na2CO30.2% NaOH4% NaOHpH梯度萃取法梯度萃取法4黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离原理：利用分子中某些特定官能团性质进行分离具有邻二酚羟基的成分，用醋酸铅沉淀不具有邻二酚羟基的成分，用碱式醋酸铅沉淀具有邻二酚羟基 的黄酮类化合物还可以与硼酸反应形成溶于水的硼酸络合物，可以与不具有邻二酚羟基的其它黄酮类化合物分离金属盐沉淀法金属盐沉淀法5从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分目的:使要得到的东西
3、溶解而使蛋白质,粘液质等形成沉淀除去水提取用500ml水溶解，过滤取179.37g水提取物(183g)浓缩至小体积，加三倍量EtOH，静置一夜过滤，滤液浓缩，冷冻干燥滤液搅碎成匀浆，热水浸取，过滤柠檬果皮2400g(相当于60个柠檬)目的：使要得到的目的：使要得到的化合物溶解，而使化合物溶解，而使蛋白质、黏液质等蛋白质、黏液质等大极性成分形成沉大极性成分形成沉淀除去淀除去水提醇沉法水提醇沉法实例实例16从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分PbCO3生成 硅胶层析凝胶层析铅盐沉淀法有机溶剂萃取223化合物L-1L-11分别反复进行SiO CC(Wakogel-C-300)
4、并用CHCl -MeOH-HOAc-H O(70:15:12:3)或(60:20:15:5)洗脱或反复重复结晶Fr. O-R(pH9的氨水洗脱部分)Fr. I-P(pH7的水洗脱部分)Fr. A-H(pH5的酸水洗脱部分)水层凝胶过滤(TSKgel-HW-40)n-BuOH提取物(4.26g, 粗黄酮类)6mol/LHCl调pH 5.3n-BuOH提取(500ml5)滤液3加20g NaHCO 饱和水溶液,搅拌1hr,静置,过滤黄色铅盐沉淀溶于1500ml水中，加220gPb(OH)Ac饱和水溶液水溶性部分(134.47g)n-BuOH提取物(38.55g)Hexane提取物(3.6g)依次用
5、Hexane, n-BuOH提取滤液溶剂萃取法溶剂萃取法溶剂萃取法铅盐沉淀法铅盐沉淀法铅盐沉淀法凝胶色谱法凝胶色谱法凝胶色谱法硅胶色谱法硅胶色谱法硅胶色谱法目的：目的：除去除去 Pb，生成，生成PbCO3实例实例17273, 338259, 277, 351216, 273, 335258, 274, 357L-4L-2L-3L-1OHOOH OOHCH3OOCH3OglcOCH3OHOOH OglcOrhaOHOHOOCH3OH OOglc rhaOCH3OHOHOglcOH OOHglc实例实例1从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分8284, 340270, 336
6、258, 27 , 344275, 330, 412270, 330271, 338282, 330L-10L-8L-6L-11L-9L-7L-5OHOOOHOHOCH3OOCH3glcOHOOOHglcOrhaOHOglcOOH OrhaOHOHOglcOOOHOHrhaOHOHOOOHOglc rhaOHOHOOOHOglcOCH3OglcOOH OrhaOHOH实例实例1从柠檬果皮中分离降血压有效成分从柠檬果皮中分离降血压有效成分9满山红化学成分的提取分离满山红化学成分的提取分离OHOOH OOHOHR1R2山柰酚: R1=R2=H槲皮素: R1=OH R2=H杨梅素: R1=R2=OH
7、主要成分：金丝桃甙： 槲皮素-3-O- -D-gal异金丝桃甙：槲皮素-3-O- -D-gal实例实例210聚酰胺层析沉淀(混合甙)EtOAc液山柰酚沉淀硼酸水层CHCl3溶于EtOAc中用饱和硼酸水溶液振摇提取液EtOAc提取混合物放置,析晶液不溶物回流聚酰胺层析1)水洗2)EtOH洗混合成分可增溶:增加不溶于水的成分在水中的溶解度浓缩至浸膏,用沸水提提取液适量,EtOH提取 目的:去除鞣质等,减少杂质满山红叶CaCO3EtOH水洗液 EtOH液(无机盐) 总黄酮Et2OEt2OHCl15% EtOH 2030% EtOH金丝桃甙 异金丝桃甙聚酰胺层析槲皮素 杨梅素回收EtOH水提液满山红化
8、学成分的提取分离满山红化学成分的提取分离实例实例2OHOOH OOHOHR1R2山柰酚: R1=R2=H槲皮素: R1=OH R2=H杨梅素: R1=R2=OH主要成分：金丝桃甙： 槲皮素-3-O-D-gal异金丝桃甙：槲皮素-3-O-D-gal11第十一章第十一章黄酮类化合物黄酮类化合物概概述述1黄酮类化合物的结构和分类黄酮类化合物的结构和分类2黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质3黄酮类化合物的提取和分离黄酮类化合物的提取和分离4黄酮类化合物的检识和结构鉴定黄酮类化合物的检识和结构鉴定512黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定一一色谱法的检识色谱法的检识二二紫外光谱紫外光谱
9、三三1H-NMR四四13C-NMR五五质谱质谱13颜色颜色：多呈黄色母核检识母核检识：盐酸-镁粉反应 黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇四氢硼钠反应 二氢黄酮（醇）类取代基团检识取代基团检识：锆盐-枸橼酸反应 3-OH、 5-OH黄酮鉴别氨性氯化锶反应 邻二酚羟基色谱检识色谱检识:硅胶 TLC 聚酰胺TLC 纸层析（PC ）理化检识理化检识黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定14硅胶硅胶TLC：用于分析与鉴定 弱极性黄酮类 化合物。展开剂：甲苯 -甲酸甲酯 -甲酸(5:4:1) ，苯 -甲醇，氯仿 -甲醇等。聚酰胺聚酰胺TLC：适合于含 游离酚 OH的黄酮及其苷类 的分析。聚酰胺对黄酮
10、类化合物吸附能力强，大多数展开剂中含有醇、酸或水。纸色谱（纸色谱（PC）：适用于各种黄酮类化合物及其苷类的分析色谱法色谱法黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定15第一相展开采用醇性展开剂如 : BAW n-BuOH: HOAc:H2O=4:1:5上层TBA t-BuOH: HOAc: H2O=3:1:1水饱和n-BuOH层析行为 : Rf值 : 苷元 单糖苷 双糖苷一般: 苷元在 0.70以上，而苷则小于 0.7。第一相展开采用醇性展开剂如 : BAW n-BuOH: HOAc:H2O=4:1:5上层TBA t-BuOH: HOAc: H2O=3:1:1水饱和n-BuOH层析行为 :
11、Rf值 : 苷元 单糖苷 双糖苷一般: 苷元在 0.70以上，而苷则小于 0.7。分配作用第二相展开采用水性展开剂如：26% HOAc 水溶液3% NaCl 水溶液HOAc:浓 HCl:H2O= 30: 3 : 10层析行为 : 连接糖链越长 , Rf 越大(0.5);苷元 Rf较小，有的留在原点。第二相展开采用水性展开剂第二相展开采用水性展开剂如：如： 26% HOAc水溶液水溶液3% NaCl 水溶液水溶液HOAc:浓浓 HCl:H2O= 30: 3 : 10层析行为层析行为 : 连接糖链越长连接糖链越长 , Rf 越大越大 (0.5);苷元苷元 Rf较小，有的留在原点。较小，有的留在原点
12、。吸吸附附作作用用ABCDABCD苷元苷元苷元苷元色谱法色谱法黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定日光下观察多数黄酮有黄色斑点16紫外光下观察 多数黄酮呈黄绿色荧光斑点氨蒸气熏 多数黄酮有颜色变化显色剂（ 2%AlCl3甲醇液） 多数黄酮黄色变深，荧光加强。色谱的检识顺序黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定OOOOHOHOOHOOHOHOOHOOHOHABCOGlcOOOOHOHORhamDOHOHGlcRham1. 极性 2. 酸性3. 硅胶 TLC，氯仿 -甲醇 4:1展开 ,Rf值5. 纸色谱PC, 8% 醋酸展开, Rf 值4. 聚酰胺TLC, 60% 甲醇展开, Rf
13、 值6. Sephadex LH20色谱甲醇水洗脱，流出先后7. 反相硅胶（C-18 ） TLC， 70% 甲醇展开, Rf 值比较18黄酮类化合物结构鉴定黄酮类化合物结构鉴定一般步骤 ：1 待测样品在甲醇中的UV光谱2 待测样品在甲醇中加入各种诊断试剂后的 UV光谱常用诊断试剂：诊断试剂：NaOCH3 ,NaOAc, NaOAc/H3BO3, AlCl3, AlCl3/HCl3 苷类水解后的 UV光谱。UV19黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定苯甲酰基苯甲酰基带带II：220280nm桂皮酰基桂皮酰基带带I：300400nmUV1、黄酮类化合物在甲醇中的 UV谱特征20两者UV光谱
14、图形相似，但带I位置不同。整个母核上氧取代程度越高，则带I将向长波方向位移（ 红移 ）。a. b. 黄酮黄酮醇黄酮类化合物结构鉴定黄酮类化合物结构鉴定21带带II吸收峰为吸收峰为主峰主峰，带带I很弱，常在主峰的长波方向有一肩峰。很弱，常在主峰的长波方向有一肩峰。c.d.245-270nm270-295nm异黄酮、二氢黄酮异黄酮、二氢黄酮二氢黄酮醇二氢黄酮醇黄酮类化合物结构鉴定黄酮类化合物结构鉴定22共同特征是 带I很强，为主峰而带II则较弱，为次强峰。带I的位置不同。e. f.查耳酮橙酮类黄酮类化合物结构鉴定黄酮类化合物结构鉴定 ：异黄酮，二氢黄酮（醇）异黄酮主峰在 245nm，二氢黄酮（醇）
15、在 270295。= ： 黄酮，黄酮醇 ：查耳酮，橙酮异黄酮二氢黄酮黄酮黄酮醇查尔酮橙酮花色素黄酮类化合物的结构鉴定黄酮类化合物的结构鉴定24、加入诊断试剂后的紫外光谱） -OHOOHO41、 MeOH+NaOMe:带I 红移 40-60nm2、 NaOAc（熔融） :带I 红移 40-65nm强度下降黄酮类化合物结构鉴定黄酮类化合物结构鉴定252) 7-OHOOHO71、 NaOAc（未熔融） : 带红移 5-20nm黄酮类化合物结构鉴定黄酮类化合物结构鉴定263) 有无邻二酚羟基OOOHOHOHHOOHOOOOOHHOOHBOHOHOH-H+醋酸钠+ 硼酸红移 1230nm(A环）红移 510nm（B环）A) 醋酸钠+ 硼酸黄酮类化合物结构鉴定黄酮类化合物结构鉴定OOHOOHHOOHOOOOHOO AlAlOOHOOHOOHAlA l C l3H C l / H2O2+紫移
