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1、j 8 S6270 At h e s i ss u b m i t t e dt o Z h e n g z h o uU n i v e r s i t y f o rt h ed e g r e eo fM a s t e r T h q：h a n i so fLc a r n i t i n ethehem e c I I a n i s m- c a r n l t l n eo nt l l e m i c r o - - i n f l a m m a t o r ys t a t ei nm a i n t e n a n c e h e m o d i a l y s i s
2、p a t i e n t s B yY o n g h u aF e n g S u p e r v i s o r ：P r o f X i a n g u oZ h a o U r o l o g y T h eF i r s tA f f i l i a t e dH o s p i t a lo fZ h e n g z h o uU n i v e r s i t y M a y 2 0 1 0 io ，t J 原创性声明 I I I II II rlr lIl lIl lf il li Y 18 3 2 8 61 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研
3、究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者： 矽勿日期：厂年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发
4、表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 中文摘要 中文摘要 目的： 观察左旋肉碱对维持性血液透析( M H D ) 患者微炎症状态的影响，探讨左旋 肉碱对M H D 患者微炎症的作用机制。 方法： 选择我院血液净化中心常规接受血液透析治疗且时间在6 个月以上的患者 4 3 例，随机分为对照组2 1 例和治疗组2 2 例，对照组在每次透析治疗结束时从 透析通路静脉端注入生理盐水2 0 m l ；治疗组在每次透析治疗结束时从透析通路 静脉端推注左旋肉碱2 0 9 加生理盐水至2 0 m l 。2 组在
5、性别、年龄、原发病等方 面经统计学处理，无显著性差异( P o 0 5 ) ，观察时问均为3 个月。统计两组在治 疗过程中透析并发症的例数，并检测两组治疗前后微炎症指标：血清超敏c 反应 蛋白( h s C R P ) 、白细胞介素- 6 ( I L 6 ) 、肿瘤坏死因子吨( T N F a ) 的水平及参 与炎症反应的核因子k a p p a B ( N F KB ) 活性。 结果： 1 两组治疗前基线比较：炎症因子比较无显著性差异； 2 治疗前后相比较：治疗组治疗后C R P ，I L 6 ，T N F a 较治疗前下降有统计学 差异( P O 0 5 ) 3 治疗组同对照组相比较：治疗
6、组在降低C R P ，I L 6 ，T N F a 方面明显优于对 照组，差异有统计学意义( P O 0 5 ) 。 1 3 诊断标准 参照叶任高，路再英主编，内科学，第6 版n 田 患者有慢性肾衰竭( c h r o n i cr e n a lf a i l u r e ) 的临床症状和慢性肾脏病史，内生肌酐 清除率( C r e a t i n i n eC l e a r a n c e ，C c r ) 1 6 月 ( 3 ) 年龄2 0 7 5 岁之间。 ( 4 ) 血清谷丙转氨酶( A L T ) 、谷草转氨酶( A S T ) 均正常。 ( 5 ) 没有明显肺部感染，血管通路感
7、染 1 5 排除标准 ( 1 ) 不符合慢性肾衰竭诊断标准者。 ( 2 ) M H D 治疗时间不足3 个月。 ( 3 ) 精神病患者等无法合作者。 4 材料与方法 ( 4 ) 合并恶性肿瘤、胃肠道疾病、严重甲旁亢( P T H 6 0 0 p g m 1 ) 者、急或 慢性感染、病毒性肝炎等以及统性红斑狼疮、血管炎、自身免疫性疾病。过敏 体质或对多种药物过敏者。 ( 5 ) 用药期间同时服用其他抗生素者 ( 6 ) 符合入选标准，但依从性差，未按规定用药、无复查资料或临床资料不 完整而影响疗效或安全性判断者。 1 6 脱落病例标准 ( 1 ) 发生有严重并发症和特殊生理变化，不宜继续接受试验
8、者。 ( 2 ) 试验过程中自行退出者。 ( 3 ) 因其他各种原因疗程未结束退出试验、失访或死亡的病例。 ( 4 ) 疗程中更换血液透析方式或透析器类型。 2 透析方法 应用碳酸氢盐透析液，透析液流量5 0 0 m L m i n ，聚砜膜透析器，透析器膜 面积1 3 1 6 m 2 之间，重复使用不超过5 次，血流量2 0 0 - 2 8 0 m l m i n ，只进行H D 治疗，血管通路为自身动一静脉内瘘，每周透析3 次，每次4 5 小时。 3 给药方法 对照组在每次透析治疗结束时从透析通路静脉端注入生理盐水2 0 m l ，共3 个月。左旋肉碱组在每次透析结束时从透析通路静脉端推注
9、左旋肉碱2 0 9 加生 理盐水至2 0 m l ，共3 个月。在观察期间，患者常规用叶酸、铁剂、v i t B l 2 、E P O 等药物，E P O 剂量在血红蛋白达到目标值后可以减量维持，余剂量不变。 4 临床观察指标及检测方法 4 1 对症状、体征填表观察治疗前后症状、体征的变化，统计透析并发症发生 的例数。 4 2 观察指标 ( 1 ) 测定治疗前后血清C R P , I L 6 ，T N F 0 【水平的。 ( 2 ) 测定治疗前后参与炎症反应的核因子k a p p a B ( N F 1 cB ) 活性 4 3 实验方法 4 3 1 标本收集、分离和保存 用左卡尼丁治疗前患者于
10、血液透析前采取静脉血2 0 m l ，5 m l 当天送我院门 诊C R P 室测C R P 值1 5 m l 立即离心，提取血浆上清，放进2 0 低温冰箱里冻 存，2 天后采齐4 3 份M H D 患者的血标本，同时检测C R P 、I D - 6 、T N F a 、N F 5 材料与方法 1 cB 活性。左卡尼丁治疗3 月后用同样方法采集4 3 例M H D 病人标本检测C R P 、 I L 6 、T N F - a 、N F 吠B 活性。 4 3 2 检测指标及方法 4 3 2 1C R P 测定 采用免疫速率比浊法，使用上海西塘生物科技公司试剂盒，由我院门诊 C R P 室日立7
11、1 7 0 全自动生化分析仪检测。 、 4 3 2 2I L 6 测定：采用E L I S A 双抗体夹心法测定 实验原理：抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体 表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学 活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本( 测定其中的抗体或抗原) 与固 相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体 复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而 结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检
12、物 质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效 率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 试剂：I L 6 试剂盒，上海朗卡公司 实验过程：将3 0 m l 浓缩洗涤液倒入洗板机贮液瓶中，用l 升量简量取2 7 0 m l 双 蒸水倒入洗板机贮液瓶中，将浓缩洗涤液由l O X 稀释成l X 。然后稀释样品：取 5 9 l 样品加入2 5 0 1 上1 样品稀释液，混匀：然后从中取1 0 1 _ L 1 混合液加入2 0 0 1 x l 样品 稀释液中，混匀，即完成样品1 ：1 0 0 0 倍稀释。待试剂盒平衡至室温( 2 0 2 5 ) 后打开
13、密封袋，取出4 8 孔反应板，留下3 7 孔，余1 1 孔放入密封袋中，密封后 放回试剂盒中： 在前3 6 孔中依次加入3 0 例已稀释血清每孔1 0 9 l 和6 个标准品每孔1 0 9 l ，第 3 7 孔做空白对照： 每孔加入4 0 I t lA n t iI L 6B i o t i n 和4 0 1 t lA n t iI L 6P O D ，轻轻混匀3 0 秒。封住 板孔，室温温育4 5 分钟。 甩尽板内液体，放在自动洗板机上，设定程序，自动反复洗涤5 次，拿下反 应板在厚叠吸水纸上拍干； 每孔加入1 0 0 l a l 显色液，轻轻混匀1 0 秒，室温温育2 0 分钟； 每孔加入
14、l O O p I 终止液( S t o pS o l u t i o n ) 。轻轻混匀3 0 秒；1 分钟后在4 5 0 n m 波长酶标仪读取O D 值。以O D 值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制 标准曲线。根据血清样品的O D 值在标准曲线上查出其浓度。试验完成后将剩 余试剂及反应板立即放入普通冰箱4 “ C 冷藏，备用。 4 3 2 3T N F a 测定：采用E L I S A 双抗体夹心法测定 实验原理：同上。 试剂：T N F a 试剂盒：上海朗卡公司 实验过程：用移液器分别吸取5 m l 血清和5 0 0 m l 样品稀释液将样品稀释1 0 1 倍， 3 0 m l 浓
15、缩洗涤液倒入洗板机贮液瓶中，用l 升的量筒量取2 7 0 m l 双蒸水倒入洗 板机贮液瓶中，将浓缩洗涤液由l Ox 稀释成l X 。待试剂盒平衡至室温( 2 0 2 5 ) 后打开密封袋取出4 8 孔反应板，留下3 7 孔，余1 l 孔放回密封袋，密封后 放回试剂盒中： 在前3 6 孔中依次加入3 0 例已稀释血清每孔5 t t l 和6 个标准品每孔5 山，轻轻 混匀1 0 秒，第3 7 孔做空白对照； 每孔加入2 0 0 t dB i o t i na n t iT N F Q ，轻轻混匀3 0 秒。3 7 “ C 温育3 0 分钟； 甩尽板内液体，放在自动洗板机上，设定程序自动反复洗涤
16、5 次，拿下反 应板，在厚叠吸水纸上拍干； 每孔加入2 0 0 t t lH R P ，轻轻混匀l O 秒。3 7 。C 温育3 0 分钟： 重复步骤： 每孔加入1 0 0 t t lT M B 显色液，轻轻混匀1 0 秒钟，置暗处室温温育2 0 分钟。 每孔加入1 0 0 t t l 终止液( s t o ps o l u t i o n ) 。轻轻混匀3 0 秒；1 分钟后在4 5 0 n m 波长酶标仪读取O D 值。然后以O D 值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘 制标准曲线，根据血清样品的O D 值在标准曲线上查出其浓度。试验完成后将 剩余试剂及反应板立即放入普通冰箱4 。C 冷藏，备用。 4 3 2 4N F cB 活性测定：采用电泳迁移改变法( E M S A ) 测定 实验原理：将纯化的蛋白和细胞粗体液和3 2 P 同位素标记的D N A 探针一 同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳
