急性毒性试验-LD50的测定

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1、开放性实验总结报告 学生姓名 班级 学号 所在院系 专业 开放实验室名称 日期 2013-5-5 北京理工大学实验室设备处 制一、实验项目概况开放实验题目: 实验动物的基本操作及其相关技术实验题目类型: 参与科研 科技活动 自选实验 素质培养指导教师及实验技术人员姓名: 李岩实验项目起止日期:2013-4-5至2013-5-5 利用何种时间段开展实验:课余时间开展实验的累计总学时数:32学时实验项目基本原理:急性毒性试验是临床前新药安全性评价的第一步,与其它毒性实验相比具有简单、经济、易行等特点。因此新药研究开发时往往通过该项试验,尽可能多的了解一些新药的毒理学特点,为早期判断侯选新药是否具有

2、研究开发价值提供毒性强度资料。通常测定药物ED50及LD50以初步估计药物毒性大小。 实验项目的实验方法概述:给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠,并观察记录各组别小鼠的行为变化,通过比较不同组别小鼠出现死亡的数量来计算LD50。实验项目的仪器设备组成情况:天平,1000ul的移液枪,200l移液枪,2ml离心管,1ml注射器,手术器械(包括剪刀、镊子等) ,鼠笼,离心管架 实验项目的消耗材料明细:乳胶手套,KM小鼠,封口膜 实验项目的主要结论:戊巴比妥钠的半数致死量为134.32mg/kg 用 Bliss 法计算半数致死量,回归方程 y(Probit)=-24.916+14.058L

3、og(D) 半数致死量 LD50=134.32mg/kg LD50(Feiller校正)95%的可信限=92.405-205.57mg/kg LD5=102.59mg/kg LD95=175.85mg/kg二、实验项目技术报告1实验原理戊巴比妥钠属于巴比妥类镇静催眠药,对中枢神经系统有普遍性抑制作用,可起到镇静、催眠、抗惊厥作用。一定剂量的戊巴比妥钠引起一般实验动物死亡。半数致死量(LD50),即在一群实验动物中,能使实验动物一半死亡的药量,其值越大越好。2实验内容(1) 探测戊巴比妥钠LD50的剂量范围。(2) 确定组数并计算各组剂量。(3)正式实验:给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比

4、妥钠,并观察记录各组别小鼠的行为变化及死亡情况。(4)记录实验结果,并计算LD50。3实验方法: 1、预试溶液配制和样品处理(预实验)(1)探索剂量范围:取小鼠9到12只,以3只为一组,分成3到4组,包括组距较大的一系列剂量,按组分别腹腔注射戊巴比妥钠溶液,观察出现的症状并记录动物死亡数,找出引起0及100%有效剂量的所在范围,此即上下限剂量Dn和Dm。(2):确定组数并计算各组剂量确定组数G:根据适宜的组距确定组数,一般分为5到8个剂量,这里我们分为5组,按等比级数增减计算各组剂量:在找出Dm、Dn和确定组数后,课按下列公式求出公比r.再按公比计算各组剂量Dl-Dm,其中D1=Dn=最小剂量

5、。配置等比药液系列,让每只小鼠给药量相等,一般为0.1ml/10g体重经过预实验的五个剂量浓度分别是77、96、120、150、190mg/kg,相应浓度:0.77、 0.96、1.2、1.5、1.9%,在随后的急性毒实验中对这些剂量进行验证2、急性毒性试验:昆明种小鼠共15只,实验前一天晚禁食不禁水,实验当天称重,标记,随机分组。给5组小鼠分别按77、96、120、150、190mg/kg,腹腔注射,给药后观察动物死亡情况。记录小鼠死亡时间,死亡数目。利用Bliss法计算LD50。分组动物数(N)剂量(mg/kg)对数剂量(X)动物死亡数(n)死亡率(P=n/N)12345333337796

6、1201501901.891.982.082.182.28001230033.366.7100表1 药物对小白鼠产生效应情况【实验结果】:LD50的测定 依据药物剂量依次给药。利用Bliss法计算LD50样品名称戊巴比妥钠 实验动物昆明小鼠 给药途径腹腔注射 实验日期2013.5.5 用 Bliss 法计算半数致死量 - 剂量 对数剂量 动物数 死亡数 死亡百分率 实验机率单位 回归机率单位 (x) (只) (只) (%) (Y) (Y) - 77 1.8865 3 0 0.00 - 1.6031 96 1.9823 3 0 0.00 - 2.9495 120 2.0792 3 1 33.00

7、 4.5697 4.3119 150 2.1761 3 2 67.00 5.4303 5.6742 190 2.2788 3 3 1E2 - 7.1173 - 回归方程 y(Probit)=-24.916+14.058Log(D) 半数致死量 LD50=134.32mg/kg LD50(Feiller校正)95%的可信限=92.405-205.57mg/kg LD5=102.59mg/kg LD95=175.85mg/kg三、参加开放性实验的体会与建议四、评价与认定指导教师评价意见与成绩评定: 实验态度积极认真,并且能够较好的完成实验包含的内容。试验后积极思考老师提出的问题。 成绩:指导教师签字: 年 月 日院系主管领导审核与学分评定意见:同意核准该生选修学分数 分。 院系主管签字: 年 月 日学校主管部门审批意见: 部门签章: 年 月 日备注:

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