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1、是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。,一、微生物,微生物,病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。,一、微生物,1.分类,特点：小 简 低,微生物,病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。,1.分类,一、微生物,2.病毒,病毒的结构,SARS冠状病毒、 禽流感病毒,病毒的增殖,细菌的外形与大小,3.细菌,A. 球菌 B. 杆菌 C. 弧菌 常见的细菌三种典型形态,A,B,C,细菌的结构,芽孢：细菌形成的椭圆形的休眠体,芽孢的壁很
2、厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。 芽孢又小又轻，可以随风飘散。 当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。,异养菌： 腐生菌 寄生菌 大部分病原菌,细菌的营养类型,根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。 自养菌：,异养菌： 腐生菌 寄生菌 大部分病原菌,光能自养型：光合细菌,细菌的营养类型,根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。 自养菌：,异养菌： 腐生菌 寄生菌 大部分病原菌,光能自养型：光合细菌 化能自养型：硝化细菌，铁细菌，硫细菌,细菌的营养类型,根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。
3、 自养菌：,菌 落,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的 重要依据。,细菌的菌落特征因种而异,菌落,4.放线菌,结构： 单细胞原核生物 分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）,（2）繁殖,孢子丝 | 孢子,链霉素、土霉素、四环素、 氯霉素、红霉素、庆大霉素,微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是由放线菌产生的,应用:,5.真菌,酵母菌,酵母菌和霉菌,青霉,生 殖,腐生生活,孢子生殖,6.营养及功能,微生物化学元素组成：,6.营养及功能,微生物化学元素组成：,C、H、O、N、P、S,6.营养及功能,C、H、O、N
4、、P、S,五大营养物质,碳源,氮源,生长因子,水,无机盐,微生物化学元素组成：,二、培养基,培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。,（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、半固体培养基。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分分：天然培养基和合成培养基。,1.培养基的类型,固体培养基：菌落,液体培养基：,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,半固体培养基：,2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方,2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方,3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对
5、pH、特殊营养物质以及氧气的要求。,1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成,4.培养基的用途,4.培养基的用途,液体培养基：增菌、工业生产 固体培养基：纯化（分离）， 鉴定、活菌计数、 保藏菌种 半固体培养基：动力检测,三、无菌技术,三、无菌技术,1.无菌技术的概念,无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。,1.无菌技术的概念,无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。,成功地培养微生物的关键。,三、无菌技术,（1）消毒定义：,2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,（2）灭菌的定义：,微生物实验室培养的基本操作程序,1. 器具的灭菌 2. 培养基的配制 3. 培
6、养基的灭菌 4. 倒平板 5. 微生物接种 6. 恒温箱中培养 7. 菌种的保存,四、实验操作,(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌),倒平板操作,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,关于倒平板操作的问题讨论：,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,关于倒平板操作的问题讨论：,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生
7、物污染培养基。,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,（二）纯化大肠杆菌,接种方法有： 平板划线法
8、和稀释涂布平板法,微生物的接种技术：,平板划线的操作方法,问题讨论,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,答：第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线
9、？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。,稀释涂布平板法,注意： 移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰12cm处.,涂布平板的所有操
10、作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,问题讨论,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,问题讨论,微生物的恒温培养,微生物的恒温培养,微生物的恒温培养,菌种的保存,1.临时保藏： 接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。 2.长期保存： 甘油冷冻管藏法,微生物的实验室培养.DAT,四、实验操作成果评价,（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。,（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。,（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。,
