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1、福建医科大学 硕士学位论文 喉鳞癌VEGF的表达与肿瘤微环境中DC分布和T细胞免疫的相关性 研究 姓名：许元腾 申请学位级别：硕士 专业：耳鼻咽喉科学 指导教师：杨劲松;张榕 20040401 喉鳞癌V E G F 的表达与肿瘤微环境中D c 分布和T 细胞免疫 的相关性研究 研究生：许元腾 导师：杨劲松教授 张榕教授 中文摘要 目的探讨血管内皮生长因子( V E G F ) 在喉鳞癌中的表达与肿瘤微环境 中树突状细胞( D C ) 分布和T 细胞免疫之间的相关性。 方法本研究应用免疫组化染色( S P 法) ，分别用抗V E G F 抗体、抗S 1 0 0 抗体、抗C D 3 抗体，对6 7
2、 例L S C C 组织进行免疫组化染色。观察L S C C 组织 中V E G F 的表达强度、S 1 0 0 阳性D c 的分布密度、C D 3 阳性T 细胞的分布情况， 分析他们之间的相关性。 结果随着肿瘤期次的提高，L S C C 组织中V E G F 的表达强度显著提高，D C 、 T I L 的分布密度显著降低。V E G F 的表达强度与S 1 0 0 阳性细胞分布密度具有 明显的负相关。 结论喉鳞癌过度分泌的Y E G F 一方面能促进肿瘤的血管生成、使肿瘤不 断生长和转移，另一方面显著抑制D C 的分化与成熟，抑制机体的抗肿瘤T 细胞免疫应答而逃避免疫监视。 关健词 ：喉肿瘤
3、：癌，鳞状细胞血管内皮生长因子树突状细胞 肿瘤浸润T 淋巴细胞免疫组化肿瘤微环境S 1 0 0 C D 3 R e l a t i o n s h i p b e t w e e nt h e e x p r e s s i o n o fV E G Fa n dt h e d e n s i t yo f d e n d r i t i cc e l l s ，Tl y m p h o c y t e sI m m u n i t yi nt u m o r m i c r o i n v i r o m e n to f l a r y n g e a ls q u a m o u s c
4、 e l lc a r c i n o m a P o s t g r a d u a t e ：X uY u a n t e n g D i r e c t o r ：P r o f P r o f Y a n gJ i n s o n g Z h a n gR o n g A b s t r a c t O b j e c t i v e ：T oe l u c i d a t et h eR e l a t i o n s h i p b e t w e e nt h ee x p r e s s i o n o fV a s c u l a re n d o t h e l i a l
5、g r o w t hf a c t o r ( V E 6 F ) a n dt h ed e n s i t yo f d e n d r i t i cc e l l s ( D C s ) ，Tl y m p h o c y t e sI m m u n i t yi nt u m o r m i c r o i n v i r o m e n to fl a r y n g e a ls q u a m o u se e l le a r c i n o m a ( L S C C ) M e t h o d s ：6 7L S C Cw e r ei n v e s t i g a
6、 t e db yi m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t u d i e s w i t ha n t i - V E G F ，a n t i s 1 0 0 ，a n t i C D 3a n t i b o d i e s R e s u l t ：A ni n t e n s i v eV E G Fe x p r e s s i o nw a sa s s o t i a t e dw i t hh i g h e r e li n i c a ls t a g ea n dl o w e rd e n s i t yo fD C Tl y
7、m p h o c y t e s T h e r ew a sa s i g n i f i c a n tn e g a t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e nt h ed e n s i t yo fD C sa n dt h e e x p r e s s i o no fV E G Fi nL S C C C o n c l u s i o n ：L S C Cc a r lo v e r e x p r e s sV E G F V E G Fi sn o to n l f o rt u m o rv a s c u l a r i z
8、a t i o n ，g r o w t ha n dm e t a s t a s i s ，b u ti s f a c t o rt oi n h i b i tD Cd i f f e r e n t i a t i o na n dm a t u r a t i o nt o i 脚u n es u r v e i l l a n c e K e yW o r d s L a r y n g e a ln e o p l a s m siC a r c i n o m a ，s q u a m o u sc e l l ：V a s c u l a r g r o w t hf a
9、c t o r ：D e n d r i t i c c e l l s ：T u m o r i n f i I t r a t i n g I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ：T u m o rm i e r o i n v i r o m e n t ；S 1 0 0 ；C D 3 Yi m p o r t a n t a l s oak e y e v a d eh o s t e n d o t h e li a l l y m p h o c y t e ： 2 前言 喉癌是耳鼻咽喉科常见的一种恶性肿瘤，近年来发病率有逐渐上升趋 势。目
10、前喉癌的主要治疗方法有手术、放射和化疗。但对晚期、术后复发患 者治疗较为棘手。临床上我们可以发现进展期的恶性肿瘤患者，一方面肿瘤 获得丰富的血液供应而迅速增长，另一方面患者的机体免疫抑制或清除肿瘤 细胞的能力明显下降。随着针对抗肿瘤血管生成的生物治疗，以及树突状细 胞疫苗为基础的免疫治疗在临床上的应用，有望成为治疗肿瘤的有效手段。 7 0 年代初，F o l k m a n 针对实体肿瘤的生长完全依赖于丰富的血液供应， 只有血管化的肿瘤才能生长到具有临床意义的大小，提出特异性针对血管生 长过程或抗肿瘤血管生成治疗应该是有效的。近3 0 年来的抗血管生成研究 表明，单独应用新生血管抑制剂能抑制实
11、体瘤的生长。新生血管抑制剂可防 止微小肿瘤和微小转移瘤从无血管期过度到血管期，还能使大的实体瘤消 退，使肿瘤细胞长期处于凋亡和增殖相平衡的状态，防止其发展成有临床体 征及威胁生命的癌灶。有的称为“肿瘤饥饿疗法”。血管内皮生长因子 ( V a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o rV E G F ) 是迄今鉴定出来的最重要 的血管生成因子，绝大多数实体瘤均有高表达，可作为肿瘤代谢及转移的标 记。近年来针对V E G F 展开的抗血管治疗已取得巨大的成果，人们已用V E G F 单抗、 V E G F 无活性交异体、利用V E
12、G F 片段进行抑制、反义基因技术、以 及针对V E G F 受体的治疗来进行肿瘤抗血管治疗的研究并取得了丰富的成 果。 现代肿瘤免疫学认为，人体每天都有大量细胞发生突变。但只有极少数 的细胞能够继续分裂生长，并且逃脱机体免疫系统的监视和攻击而形成肿 瘤。人们已发现了各种各样影响肿瘤免疫的因素。机体有多种抗肿瘤免疫机 制。其中包括细胞免疫和体液免疫，又可分为特异性免疫和非特异性免疫。 抗肿瘤免疫是以细胞免疫为主，其中具有免疫记忆功能和特异性的主要是T 细胞，因此，一直受到人们的重视，T 细胞主要有两类，C D 4 + T 辅助细胞 和C D 8 + 细胞毒性T 细胞。C D 4 + 和C D
13、8 + T 细胞均表达C D 3 标志，主要产生特 异性免疫。树突状细胞( D e n d r i t i cc e l l sD C s ) 是近几年研究的热点。D c 是一种重要的免疫辅佐细胞，是体内最有效的专职抗原提呈细胞( A P C ) ，具 有强大的激活静息T 细胞、激发免疫应答的功能。是机体免疫应答的始动者， 特别在抗肿瘤免疫中具有核心地位诱导T 细胞抗肿瘤免疫它是最强的A P C 。 未成熟的D c 可以通过吞噬颗粒物质，胞饮可溶性物质，以及借助受体内吞 来捕捉抗原。然而尽管9 0 9 5 的肿瘤细胞表面表达了特异的肿瘤抗原却不 能诱导特异的免疫应答。说明肿瘤抗原的加工、处理和
14、提呈障碍，使肿瘤细 胞逃逸机体免疫机制的攻击，是荷瘤机体免疫力下降的重要原因。其中树突 状细胞的功能缺陷是最为关键的因素之一。在体内外通过刺激扩增和激活 D C ，提高其抗原提呈功能，以诱导特异性的细胞免疫反应等一系列以D c 为 手段的抗肿瘤免疫成为近年来的一大研究热点。如以肿瘤细胞、肿瘤多肽抗 原、肿瘤m R N A 作为抗原体外冲击致敏D c ，然后回输体内可以诱导机体产生 抗原特异性细胞毒淋巴细胞，产生保护性免疫反应。 那么是什么原因导致D C 的抗原提呈能力下降，继而引起机体抗肿瘤T 细 胞免疫能力下降? 其中肿瘤产生的血管内皮生长因子( V E G F ) 起着重要作用。 近年来国
15、内外有关V E G F 对D c 系统抑制作用的体外和动物实验研究表明： V E G F 一方面能促进肿瘤的血管生成，另一方面显著抑制D c 的分化与成熟， 从而抑制机体的抗肿瘤T 细胞免疫应答，使肿瘤细胞逃避免疫监视。 喉鳞癌患者高水平表达的V E G F 是否影响D c 的分化成熟，目前尚少见报 道。随着肿瘤免疫学的深入研究，提出了“肿瘤微环境”( T u m o r M i c r o i n v i r o m e n t ) 的概念，肿瘤微环境存在着导致免疫不应答或免疫应答低 下的多种因素，研究肿瘤微环境免疫状态比外周血免疫状态能更准确地反映 宿主的抗肿瘤免疫反应。为此我们运用免疫组
16、化染色观察喉癌组织中免疫细 胞( 树突状细胞和T 淋巴细胞) 的分布与相应组织中V E G F 的表达，并分析 它们之间的相关性，以观察V E G F 的表达对D C 分化成熟的影响以及对肿瘤T 细胞免疫的影响。 材料与方法 一、研究对象： 标本收集： 选取本院自1 9 9 8 年2 月一2 0 0 3 年1 2 月的原发喉鳞状细胞癌手术切除标 本共6 7 例，手术前均未进行放、化疗。标本经1 0 福尔马林固定，常规石 蜡切片染色，经病理诊断为喉鳞状细胞癌。其中男性5 9 例，女性8 例，年 龄4 0 一7 5 岁，平均年龄5 8 1 2 + 9 2 8 岁。其中有颈淋巴结转移的占1 9 例( N 1 - - 3 ) ，无淋巴结转移的4 8 例( N O ) 。肿瘤分化程度：高分化4 l 例，中分化 1 9 例，低分化7 例。 喉癌的临床分型、T 分级：按U I C C l 9 9 2 年T N M 标准分为：声门上型1 9 例，声门型4 4 例，声门下型4 例。T 分级：T 。1 0 例，T 2 2 8 例，T , 3 2 1 例，L 8 例。
