《反义葡萄糖转运蛋白1对喉癌hep2细胞放射增敏作用及机制的体外研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《反义葡萄糖转运蛋白1对喉癌hep2细胞放射增敏作用及机制的体外研究（132页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、反义葡萄糖转运蛋白1 对喉癌H e p 2 细胞 放射增敏作用及机制的体外研究 论文作者签名： 指导教师签名： ，一上 l7 呸 祝 l 万 f 论文评阅人l ：邱丞正簋昱教援主任医娅虫直太堂湘雅医院 评阅人2 ：菹国鏖亟昱圭任医! ! 巫浙江太堂附属箍三医院一 评阅人3 ：胡孙宏副主任医匝逝江太堂邵逸去医院 评阅人4 ： 评阅人5 ： 答辩委员会主席：汪宣渲逝昱主任医! ! 巫逝江太堂隘届箍二医院 娈员l ：赵苤荏硒昱主任医! ! 巫浙江省虫医院 委员2 ：汤建国亟昱圭任匡娅逝江太堂邵逸去医院 委员3 ：挞出亟昱主任医娅浙江太堂附届箍二医瞳 委员4 ：蒸童主廷医垣浙江省厶民医院 委员5 ：
2、答辩日期：2 0 1 2 年2 月2 8 日 1111】1 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘茔或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 学位论文版权使用授权书 签字日期： 加f 年弓月砂日 本学位论文作者完全了解逝婆盘鲎有权保留并向国家有关部门或机 构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝至三
3、盘堂可 以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 签字日期：胁年；月日 导师签名： 签字日期：殳- 乒了月之日 浙江大学硕士学位论文 致谢 致谢 寒来暑往，转眼间2 年半的时间已经过去，值此论文完成之际，衷心感谢我敬 爱的导师周水洪教授两年来给予我悉心的指导和无尽的关怀。周老师在我课题的 设计、实验工作的开展、论文的撰写中给予了认真的指导，并且以身作则，培养 我严谨的科学精神、求实的工作作风、认真的学习态度、科学的思维方式。导师 严谨的治学态度，孜孜不倦的敬业
4、精神，渊博的学识、丰富临床经验、一丝不苟 的工作作风让我永铭心间。导师正直无私的做人准则和宽仁厚爱的医者之道，令 我由衷的敬佩，鞭策我前进，激励我奋进。 衷心感谢浙江大学附属第一医院传染科实验室范骏老师对我实验的全面指导 和帮助，感谢他在我思路上的出谋划策，在我困扰时的指点迷津，感谢实验室技 术员黄雅萍对实验的技术指导和帮助。 衷心感谢浙江大学附属医院放疗科陆中杰老师对实验的大力支持，感谢他在 细胞x 线照射中付出的辛苦劳动，感谢放疗科全体技术人员对实验的热情帮助。 感谢所有关心和帮助过我的人。 再次致以深深的谢意! 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 反义葡萄糖转运蛋白1 对喉癌H e p 2
5、细胞放射增敏作用 及机制的体外研究 浙江大学医学院 硕士研究生 导师 耳鼻咽喉科学 雒星梅 周水洪教授 中文摘要 背景和目的：喉癌是放射治疗效果不佳的常见头颈部恶性肿瘤，通过增强放射治 疗效果，避免手术、保留该器官的完整功能是科技工作者面临的难题。放射抵抗 往往导致喉功能的丧失或影响患者生命。但放射抵抗的真正机制尚不十分清楚， 随着分子生物技术的发展，发现肿瘤内乏氧细胞的存在是肿瘤对射线产生抵抗性 的重要原因之一，恶性细胞所处的生理环境能量相对匮乏，呈现局部缺氧状态，并 引起肿瘤细胞因子的过度表达。恶性肿瘤细胞的葡萄糖代谢率较高，这种现象已 被正电子发射计算机断层( P o s i t r o
6、 ne m i s s i o nt o m o g r a p h y ，P E T ) 检查所证实。恶性 肿瘤细胞对葡萄糖的代谢率增高与葡萄糖转运蛋白( G l u c o s et r a n s p o n e rp r o t e i n ， G L U T ) 及基因的异常表达有关，其中葡萄糖转运蛋白1 ( GL U T - 1 ) 在恶性肿瘤细 胞的葡萄糖吸收和转运中起主导作用。 国内外研究发现G L U T 1 的表达异常与肿瘤的生物学行为有关我们的前期研 究已经发现，G L U T - 1 的异常表达与头颈部癌的生物学行为有关，与头颈部癌的 预后差有关，可以作为靶向治疗的新方
7、法之一，并且我们已通过反义寡脱氧核苷 酸技术阻断喉癌H e p 2 细胞G L U T - 1 的表达，能抑制喉癌细胞的葡萄糖吸收的影 响及H e p 2 细胞增殖，可能是喉癌治疗的一种理想靶标。尽管G L U T 1 的异常表 达不能作为肿瘤放射抵抗的唯一解释，但它在肿瘤放射生物学中的意义已越来越 n 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 受重视。抑制G L U T 1 表达以提高放射敏感性，成为恶性肿瘤靶向治疗的热点之 一。在国内外文献中，未见通过靶向抑制G L u T - 1 的表达提高喉癌的放射敏感性。 本研究采用反义核苷酸技术抑制G L U T - l 的表达，阐明GL U T 1 表达改
8、变影 响喉癌细胞能量供应及增强喉癌细胞对放射敏感性的机制，进一步揭示喉癌细胞 对放射抵抗的机理，为喉癌患者功能性治疗和改善预后提供一定的理论基础。 方法： 喉癌H e p 2 细胞，转染反义G L u T - 1 前后，用不同剂量o G y ( 对照组) 、2 G y 、 4 G y 、8 G y 、1 2 G y 的X 线照射，照射后继续培养2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 后，M T s 的方法 检测各组H e p 2 细胞的存活率，I m P C R 的方法分别检测各组H e p 2 细胞 G L U T - 1 m R N A 的表达，流式细胞仪检测H e p 2 细胞细胞的周期
9、及凋亡。 结果： 1 转染前，M T S 结果显示照射2 4 h 后x 射线照射没有表现出明显的细胞损 伤作用，反而出现了4 G y 剂量H e p 一2 细胞存活率的增高( p o 0 5 ) ，4 9 y 和8 9 y 在照 射后2 4 h 出现存活率增高，之后随着剂量增高和培养时间延长存活率下降； l m P c R 结果显示x 线照射组较对照组出现G L u T - lm R N A 的表达增高( p 、lh oo 。oN 4 8 h h h o o IN 占J 占I 占l 占lc ； 兽I 高导f 赛I 寓 H 7 2 h 图2 2 5 转染前后细胞x 线照射后细胞凋亡率比较 7 2
10、 在转染后，H e p 2 细胞凋亡率在2 4 h 时，4 G y 、8 G y 、1 2 G y 照射组与 照射前相比，细胞凋亡率增高，有显著性差异( p = 0 0 4 9 ，p = O 0 0 3 ，p = 0 0 0 0 ) ，1 2 G y 照射组与2 G y 相比，细胞凋亡率增高，有显著性差异( p = 0 0 1 3 ) ，其余各组之间 无差异( p 0 0 5 ) ；H e p 一2 细胞凋亡率在4 8 h 时，4 G y 、8 G y 、1 2 G y 照射组与照射 前、2 G y 照射组相比，细胞凋亡率增高，有显著性差异( p 值均为O 0 0 0 ) ，1 2 G y 照
11、射组与4 G y 、8 G y 照射组相比，细胞凋亡率增高，有显著性差异( p 值均为O 0 0 0 ) ； H e p 2 细胞凋亡率在4 8 h 时，2 G y 、4 G y 、8 G y 、1 2 G y 照射组与照射前相比，细 胞凋亡率增高，有显著性差异( p = 0 0 1 2 ，p = 0 0 0 0 ，p = o o o O ，p = 0 0 0 0 ) ，8 G y 、 5 2 占寸占N占。 浙江人学硕上学位论文 正文第一二部分 1 2 G y 照射组与2 G y 、4 G y 照射组相比，细胞凋亡率增高，有显著性差异( p 值 均为0 o o O ) ，1 2 G y 照射组
12、与，8 G y 照射组相比，细胞凋亡率增高，有显著性差异 ( p = 0 o o o ) ( 表2 5 ，图2 2 6 2 3 1 ) 。说明转染后，细胞凋亡照射后培养的同一 时间内，随照射剂量的增加H e p 一2 细胞凋亡增加。分别用2 G y 、4 G y 、8 G y 、1 2 G y 照射后，7 2 h 后H e p 2 细胞凋亡增加，与2 4 h 、4 8 h 后相比，有显著性差异( p 值 均大于o 0 5 ) ( 图2 2 6 ) ，说明转染后细胞凋亡在一定剂量照射，随培养时间的延 长H 印2 细胞凋亡增加。 表2 5转染G L u T - l A s o D N 后H e p
13、 2 细胞照射后凋亡率( ) 1 2 1 0 细 胞8 蒯 塞6 4 2 O _ d 一 r _ ，一 一【a 浙江大学硕十学位论文 正文第一二部分 2 4 h 4 8 h7 2 h 图2 2 7 未照射转染H e p 2 细胞不同时间的细胞凋亡流式图 2 4 h ：女毒鬣菇j Q t诼 ： ：键，_ F 眦罐 4 8 h 7 2 h 图2 2 8 2 G y 照射转染H e p 2 细胞不同时间的细胞凋亡流式图 2 4 h4 8 h 7 2 h 图2 2 9 4 G y 照射转染H e p 2 细胞不同时间的细胞凋亡流式图 浙江人学硕十学位论文正文第一二部分 2 4 h j ：? ：；誊。，
14、1 Q l 魁。 I 石。 ，萨 F 丌“ 4 8 h ： 鼍遴；! ，_， ? 冀。： 馘。：- 0 霉 聪? F r r C - 7 2 h 图2 3 0 8 G y 照射转染H 印一2 细胞不同时间的细胞凋亡流式图 2 4 h4 8 h7 2 h 囹2 3 1 1 2 G y 照射转染H e p 2 细胞不同时间的细胞凋亡流式图 5 5 浙江大学硕士学位论文 正文第二部分 三、小结 l 转染G L u T - lA S - O D N 后，H e p 一2 细胞，分别在2 G y 、4 G y 、8 G y 、1 2 G y 剂量照 射后，随着时间的延长，H e p 2 细胞细胞存活率逐
15、渐下降，有显著性差异；在 同一时间，随着照射剂量增高，细胞存活率降低，差异有显著性。转染前细胞 在4 9 y 出现存活率反而增高，出现放疗抵抗；转染后细胞4 9 y 未出现存活率增 高，提示G L U T - lA S 0 D N 或许可以降低H e p 2 细胞的放疗抵抗。 2l m P C R 结果显示转染G L U T - lA S 一0 D N 前后，G L u T - lA S O D N 能抑制H e p 2 细胞G L u T - l m R N A 的表达。但H e p 2 细胞转染G L u T - 1A S O D N 进行x 线照 射后，各组间比较，这种抑制作用不是十分明
16、显。因此G L U T - lA S O D N 在放 射增敏作用，是否通过抑制H 印一2 细胞G L u T - l m I A 的表达有待进一步研究。 3 转染G L u T - lA S O D N 后的H e p 2 细胞照射后，经流式细胞仪检测发现出现了 G 2 M 期阻滞，但G 2 M 期阻滞与转染前变化不大，因此转染反义G L u T - l 对喉癌H e p 一2 细胞的放射增敏作用需进一步研究。 4 转染组均较未转染组细胞凋亡率增高，这种转染随着时问延长、照射剂量增大 而增高，说明转染G L u T 1A S 0 D N 能增强x 线照射对喉癌H e p 2 细胞凋亡率。 G L u T 1A S O D N 增强喉癌H e p 2 细胞的放射敏感性可能主要是通过增加细胞 凋
