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1、临床常用免疫学检查,血清免疫球蛋白检测 血清补体检测 细胞免疫的检测 肿瘤标志物的检测 自身抗体检测 其他免疫检测,卢葵花二0一一,概述：,随着社会进步和医学科学发展，临床免疫学检查在实验诊断中的比重越来越大，是迄今最特异、最灵敏的检测方法，已被广泛用于医学临床与实验研究的各个领域，成为医学检验中的一个重要组成部分。,概述：,免疫学检验的检测对象是具有免疫活性的物质，抗原和抗体是免疫学检验的两个重要因素，也是免疫学反应的基本条件，利用其不同的反应类型，建立了各种不同的免疫学技术。,免疫学技术简介,方法： 散射比浊法、免疫电泳法、标记免疫法,免疫电泳法,是将免疫扩散和电泳相结合的一种免疫学分析法
2、，是免疫学基本技术之一。样品中的各种蛋白质成分可被分成肉眼不可见的若干区带。当停止电泳后，在与电泳方向平行的抗体槽中注入抗体，进行扩散反应，当相应的抗原抗体结合后，形成肉眼可见的沉淀弧。常见用于分析许多疾病中出现的异常免疫球蛋白及片段。,标记免疫,是免疫技术和标记技术相结合的一门检测技术。 免疫技术：利用Ag+Ab=AgAb，以Ag或Ab作试剂，检测对应的Ab或Ag。 标记技术：利用可提供探测信号的标记（如放射性核素、酶、荧光素），标记Ag或Ab，抗原抗体反应后探测标记信号，反映受检Ag或Ab行为。 特点：高度特异性（免疫技术），高度敏感性（标记技术）。,标记免疫,按标记不同，标记免疫分析可分
3、为： 放射免疫分析（RIA），用放射性核素作标记； 酶免疫分析（EIA），用酶作标记； 荧光免疫分析（FIA），用荧光物作标记； 发光免疫分析（LIA），发光物作标记。,本章就临床常用的免疫学检查,包括血清免疫球蛋白检测、血清补体检测、细胞免疫的检测、肿瘤标志物监测、自身抗体检测、流式细胞术检测等作一简介。,免疫球蛋白检测 (immunoglobulin,Ig),免疫球蛋白是一组具有抗体活性或抗体样结构的球蛋白，由浆细胞所合成与分泌，广泛地存在于机体的血液、体液、外分泌液和 B淋巴细胞膜的表面。可分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五类。,分子量较大的一对肽链称为重链（Heavy cha
4、in，H链），不同的重链由于氨基酸残基的排列顺序、二硫键的数目和位置、含糖的种类及数量不同，其抗原性也不同。根据H链抗原性的差异可将其分为5类：链、链、链、链和链，每个Ig分子的两条重链亦完全相同。,L链共有两型，Kappa(）与Lambda（）。同一个免疫球蛋白单体分子上的L链型别完全相同。,分类 百分比 参考值 IgG 70%-80% 7.0-16.6g/L IgA 10%-15% 0.7-3. 5g/L IgM 5%-10% 0.5-2.6g/L IgD 0.02%-1% 0.6-2.0mg/L IgE 0.002% 0.1-0.9mg/L,正常人群各年龄段个体中血清IgG、IgA、Ig
5、M的含量有很大差异,测定方法,血清中含量较高的 IgG、IgA、IgM多采用单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法和免疫比浊法，而标本中含量极微的IgD和IgE则采用敏感度较高的放射免疫法和酶免疫法等进行定量测定。,IgG 占总Ig的70%80%,是血清中的主要抗体，主要由脾脏和淋巴结合成，在机体的免疫防御中起重要作用，抗细菌、病毒和寄生虫等，还具抗毒素作用，为不完全抗体，分子量小（150000），唯一能自由地通过胎盘。,半衰期约为23天，故临床上使用丙球作治疗时以23周注射一次,IgA 约占血清总Ig 10%15%,分为血清型与分泌型两种，具有抗细菌、抗病毒、抗毒素作用，其中的分泌型（SIgA）在局
6、部与抗呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染、炎症或肿瘤等病变密切相关,是抗过敏的重要免疫屏障。,SIgA唾液平均为0.3g/L, 初乳平均为5.06g/L,粪便平均为1.3g/L。,IgM 约占血清总Ig的5%10%,分子量最大（900000），由五个IgM单体连接而成，故又称巨球蛋白。 脾脏是它的主要合成部位，IgM主要分布于血液中，防止发生菌血症方面起重要作用，半衰期5天左右。,天然同族凝集素抗A抗B、冷凝集素及伤寒沙门菌的抗体均属此类。,IgM在个体发育过程中，最先出现的球蛋白，当机体受抗原刺激后，也是最早出现的抗体，在补体和吞噬细胞参与下，其杀菌、溶菌、激活补体和促进吞噬等作用均显著强于Ig
7、G几百倍。在机体的早期免疫防御中占有重要地位。,临床意义 ：,IgG、IgA、IgM在参与机体的特异性体液免疫反应中担负了重要的作用,维持人体内的生理性动态平衡,对抗外来病原微生物的侵袭有保护功能,常规检测了解Ig水平,可作为反映人体体液免疫状况的指标.,1、IgG是主要的抗感染抗体 抗菌性抗体 抗毒素性抗体 保护性抗体 抗病毒性抗体 抗自身组织或细胞成分的抗体 损伤性抗体,2、IgM 是病原体感染或人工免疫后最先出现的抗体,针对变性自身蛋白成份时,对机体有病理性损伤.,在临床上许多疾病都可出现Ig水平的高度异常,这些指标的变化有助于临床诊断和判断预后,也可作为考核疗效的指标.,高Ig血症,慢
8、性细菌感染:肺结核,麻风,慢性支气管炎,感染早期IgM显著升高，以后IgG升高，IgA也可升高。 自身免疫性疾病：SLE患者多有血清IgG、IgA、IgM的升高，血清Ig升高的程度与疾病的活动程度明显相关，RA患者也有血清Ig的升高，但以IgM升高更为明显。,慢性肝脏疾病：慢性活动性肝炎，肝硬化，肝癌等患者血清Ig都有不同程度的升高，胆道阻塞时，血清IgA可升高。 浆细胞病变：淋巴瘤、浆细胞恶性病变，MM，巨球蛋白血症等患者血清中可有异常升高Ig和轻链的片段，但以单克隆升高为主。,低Ig血症,先天性低 Ig血症：主要见于先天性体液免疫缺陷或 体液免疫与细胞免疫的联合缺陷， IgG1g/L， I
9、gA和IgM为正常人的1%。 IgG缺陷患者常易有反复发生的化脓性感染。 IgA缺乏者极易有反复呼吸道感染， IgM缺乏者易患革兰氏阴性菌败血症。,获得性低Ig血症：主要见于某些病毒感染后对机体免疫功能的破坏，患者在感染前体液免疫指标正常，以后血清Ig水平降低。 因疾病丢失的低Ig血症：最常见肾病综合征患者，终末期尿毒症患者，因大量蛋白从尿中丢失。严重胃肠疾患因合成，代谢增加。,3、IgE增高：见于IgE型多发性骨髓瘤、重链病、肝脏病、结节病、RA和各种过敏性疾病。 IgE降低：见于丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期用免疫抑制剂者和共济失调性毛细血管扩张症等。,检测到 M蛋白，提示单克隆免疫球蛋
10、白增殖性疾病。见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、轻链病和半分子病等。,血清补体的检测,补体（complement,C）是存在于正常人和动物血清中的一组与免疫有关的具有酶活性的球蛋白，不稳定，加热5630分钟即被灭活。补体成分有C1(C1q、C1r C1s)C2C9等9个成份(11种球蛋白)，各成分通常以非活性状态存在于血清和体液中，需经激活才能表现出生物学活性。,补体：是一组具有酶原活性的糖蛋白，由传统途径的 9种成分C 3 - C 9 、旁路途径的3种成分及其衍生物组成，参与灭活病原体的免疫反应，也参与破坏自身组织和自身细胞而造成的免疫损伤。,正常人血清中的补体含量相对稳定。只有在患病
11、时补体含量才会发生变化，因此测定补体的含量对于诊断自身免疫性疾病、免疫复合物引起的变态反应性疾病、补体缺陷病等都有一定的意义。,总补体溶血活性检测,总补体溶血活性（CH 50）以溶血素（抗体）致敏的绵羊红细胞（抗原抗体复合物）激活待测血清中的C1 ，进而引起补体活化的连锁反映，在绵羊红细胞上形成多分子的聚合物，影响其膜表面的结构与功能，最终导致绵羊红细胞溶解。溶血程度与补体量呈正相关，为S形曲线。故一般以50%溶血作为检测终点。,【参考值】 试管法 50100kU/L 主要检测补体传统途径活化的活性程度。反映的是补体9种成分的综合水平。 1、CH 50 增高见于急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤
12、；,2、CH 50 降低见于严重反复的细菌感染,各种免疫复合物性的疾病，如肾小球肾炎、RA、 SLE 、强直性脊柱炎等自身免疫性疾病的活动期。补体活化过度，血清补体水平下降。大S烧伤，大出血及肾病综合征等大量补体蛋白丢失。急、慢性肝炎、肝硬化或肝癌患者，血浆蛋白合成不足。,补体C3检测,是一种由肝脏合成的2-球蛋白，由和两条多肽链组成。是传统途径和旁路途径被激活的关键物质。 参考值 0.81.5g/L,临床意义 正常人血清中补体组分的含量相对稳定，患病时，补体在体内合成降低，活化代谢增强和消耗异常或先天性缺陷可引起血清中各补体组分水平的变化。,增高：由于急性期反应使补体合成增多，它可与其它血浆
13、蛋白的改变相伴随，如CRP的增多和TRF（转铁蛋白）降低。总补体活性以及C3和C4的含量增多，见于所有风湿性疾病的急性期，如RA（伴有关节外表现时可），风湿热，强直性脊柱炎,其它疾患如急性病毒性肝炎，急性心梗，癌，糖尿病，妊娠，结节病淀粉样变性，甲状腺炎，伤寒，大叶性肺炎和小肠炎性病等补体值,减低： 分解增加，任何与循环复合物有关的疾病如： 大多数急性肾小球肾炎、链球菌感染后肾炎、狼疮性肾炎患者。还见于活动性SLE和类风湿关节炎等。,合成如严重肝脏疾患 先天性缺陷（仅有一种补体） 其它：肝素、人造肾的透析膜（使活化）,细胞免疫的检测,淋巴细胞（lymphocyte）是体内分布广泛、种类繁多且功
14、能各异的细胞群体。 可分为T、B和NK等细胞群，它们又可分为若干亚群，各有其特异的表面标志和功能。各种淋巴细胞形态相似，在一般光镜下不易区分。,T细胞花结形成试验,用于检测T细胞的数量。 T细胞表面有绵羊红细胞（SRBC）受体，可与SRBC结合形成花结样细胞，称为红细胞玫瑰花结形成试验或E玫瑰花结形成试验（ERFT）。显微镜下计数花结形成细胞占淋巴细胞的比例，以每个淋巴细胞黏附3个或3个以上羊红细胞者为花结形成细胞。,【参考值】 EtRFC为64.46.7% 【临床意义】 降低；见于免疫缺陷性疾病，如恶性肿瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大面积烧伤、多发性神经炎等。 升高：见于甲亢、甲状腺炎、重
15、症肌无力、慢性活动性肝炎、SLE活动期和器官移植排斥反应等。,肿瘤标志物检查,是由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤反应而产生的一类物质，主要包括蛋白质类、糖类物质和酶类肿瘤标志物。,甲胎蛋白测定(由胎肝和卵黄囊合成的特殊蛋白质，电泳时位于白蛋白和球蛋白之间，胎儿出生后一到两周即消失） 癌胚抗原测定（CEA） 胚胎期主要存在于胎儿的胃肠管、胰腺和肝脏，出生后含量极低。胃肠道恶性肿瘤时，是一种广谱肿瘤标志物。,甲胎蛋白测定,定性 阴性 定量 25g/L 升高见于：原发性肝癌、消化道肿瘤、支气管肿瘤、生殖腺胚胎瘤、病毒性肝炎及肝硬化等。生理性见于孕妇。,原发性肝癌阳性率可达75%80%以上，
16、其值可达300g/L以上,癌胚抗原测定（CEA）,胎儿早期的消化管及某些组织合成，孕六个月后含量逐渐减少，出生后含量极低，对肿瘤的诊断、预后、复发判断有意义。 正常 低于15g/L。 见于90%的胰腺癌、74%的结肠癌、60%的乳腺癌，常高于60g/L。,结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病、肺气肿及支气管哮喘也可升高。 胃癌病人胃液和唾液中可检测出CEA。,自身抗体的检测,某些原因削弱或破坏健康人的自身免疫耐受，使得自身免疫系统对自身组织或成分产生免疫应答，称为自身免疫。由此所产生的疾病称为自身免疫病，诊断方法是作自身抗体免疫检测。,类风湿因子RF,RF最初由Rose(1948)在类风湿性关节炎患者血清中发现的 。RF与天然IgG结合的能力较差，最易与免疫复合物中的IgG或聚合的IgG结合，活化补体，或被吞噬C吞噬，后者释放的溶酶体酶、活性肽、胶原酶、前列腺素E2等，可造
