自身免疫性疾病的实验室检测陈永红

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1、 信阳市中心医院检验科信阳市中心医院检验科 陈永红陈永红 自身免疫性疾病的实验室诊断自身免疫性疾病的实验室诊断 临床上有些疾病可明确诊断（如肺炎、肝炎、结 核病、艾滋病、肿瘤），还有许多疾病难以诊断 或治疗效果差，常常让临床医生感到棘手和困惑， 这就是自身免疫性疾病。 自身免疫性疾病自身免疫性疾病(AID)(AID): : 因自身免疫反应因自身免疫反应 导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。 由于人类对AID 认识的提高，加之临床经验的积 累和实验室诊断技术的进步，AID 发病率明显上 升，其总体发病率占世界人口的3%-5%。 自身免疫性疾病自身免疫性疾病 自

2、身免疫性疾病自身免疫性疾病 自身免疫耐受（自身免疫耐受（autoimmuneautoimmune- -tolerancetolerance）: :正常正常 情况下，机体免疫系统能识别情况下，机体免疫系统能识别“自我自我”，对自，对自 身组织成分不发生免疫应答反应，或仅产生微身组织成分不发生免疫应答反应，或仅产生微 弱的免疫应答，此为自身免疫耐受。弱的免疫应答，此为自身免疫耐受。 自身免疫自身免疫( (autoimmunity):autoimmunity):是指机体免疫系统针是指机体免疫系统针 对自身成分发生免疫应答反应，出现自身抗体对自身成分发生免疫应答反应，出现自身抗体 或致敏淋巴细胞的现象

3、。或致敏淋巴细胞的现象。 自身抗体自身抗体( (autoantibody):autoantibody):针对自身组织器官、针对自身组织器官、 细胞及细胞内成分产生的免疫球蛋白（抗体）。细胞及细胞内成分产生的免疫球蛋白（抗体）。 系统性自身免疫病系统性自身免疫病 (systemic autoimmune (systemic autoimmune disease)disease)或器官非特异性或全身性自身免疫病或器官非特异性或全身性自身免疫病 器官特异性自身免疫病器官特异性自身免疫病 (organ(organ- -specific specific autoimmune disease)autoi

4、mmune disease)或局限性自身免疫病或局限性自身免疫病 按疾病累及的系统区分按疾病累及的系统区分 按器官特异性分为两类按器官特异性分为两类 结缔组织疾病结缔组织疾病 神经肌肉疾病神经肌肉疾病 内分泌性疾病内分泌性疾病 消化系统疾病消化系统疾病 泌尿系统疾病泌尿系统疾病 血液系统疾病血液系统疾病 生殖系统疾病生殖系统疾病 皮肤组织疾病皮肤组织疾病 循环系统疾病循环系统疾病 1. 1. 多数病因不明多数病因不明 2. 2. 患者以女性居多，并随年龄增加发病率有患者以女性居多，并随年龄增加发病率有 所增加所增加 3. 3. 有遗传倾向有遗传倾向 4. 4. 患者血清中有多种自身抗体或自身反

5、应性患者血清中有多种自身抗体或自身反应性 致敏淋巴细胞存在致敏淋巴细胞存在 自身免疫性疾病的共同特征自身免疫性疾病的共同特征 5. 5. 疾病有重叠现象，即一个病人可同时患一疾病有重叠现象，即一个病人可同时患一 种以上自身免疫病种以上自身免疫病 6. 6. 病程一般较长，多迁延为慢性病程一般较长，多迁延为慢性 7. 7. 病损局部可发现淋巴细胞、浆细胞、中性病损局部可发现淋巴细胞、浆细胞、中性 粒细胞等浸润粒细胞等浸润 8. 8. 免疫抑制剂治疗可取得一定疗效免疫抑制剂治疗可取得一定疗效 自身免疫性疾病的共同特征自身免疫性疾病的共同特征 自身免疫性疾病的发病机制自身免疫性疾病的发病机制 1、遗

6、传因素遗传因素 2、环境因素、环境因素 感染、药物、过敏原、压力感染、药物、过敏原、压力 3、自身抗原、自身抗原 遗传因素遗传因素 自身免疫性疾病常有自身免疫性疾病常有家族遗传倾向家族遗传倾向。 重症肌无力、系统性红斑狼疮、胰岛素依赖性糖尿病重症肌无力、系统性红斑狼疮、胰岛素依赖性糖尿病 类风湿性关节炎、寻常性天庖疮、桥本氏甲状腺炎类风湿性关节炎、寻常性天庖疮、桥本氏甲状腺炎 强直性脊柱炎强直性脊柱炎 1 1、 隐蔽抗原的释放隐蔽抗原的释放 2 2、 抗原引发的交叉反应抗原引发的交叉反应 3 3、 自身成分的改变自身成分的改变 自身抗原自身抗原 自身抗原自身抗原 1 1、 隐蔽抗原的释放隐蔽抗

7、原的释放 隐蔽抗原隐蔽抗原是指体内某些是指体内某些组织成分组织成分（精子、眼内（精子、眼内 容物、脑等），一旦手术、外伤、感染等原因破容物、脑等），一旦手术、外伤、感染等原因破 坏隔绝屏障，免疫系统将其误识为坏隔绝屏障，免疫系统将其误识为“异物异物”，引，引 发自身免疫应答，导致自身免疫病的发生。发自身免疫应答，导致自身免疫病的发生。 2 2、共同抗原引发的交叉反应、共同抗原引发的交叉反应 某些细菌、病毒与正常人体组织细胞上有某些细菌、病毒与正常人体组织细胞上有相相 类似的抗原决定簇类似的抗原决定簇。如大肠杆菌。如大肠杆菌O:14O:14与人肠与人肠 粘膜有嗜异性抗原。粘膜有嗜异性抗原。 针对

8、这些细菌、病毒抗原决定簇产生的自身针对这些细菌、病毒抗原决定簇产生的自身 抗体和致敏淋巴细胞可与自身组织细胞发生抗体和致敏淋巴细胞可与自身组织细胞发生 交叉反应，引起自身免疫性疾病。交叉反应，引起自身免疫性疾病。 自身抗原自身抗原 3 3、自身成分的改变、自身成分的改变 类风湿疾病：正常类风湿疾病：正常IgGIgG发生变性形成靶抗原，发生变性形成靶抗原， 引发自身免疫性疾病的发生。引发自身免疫性疾病的发生。 自身抗原自身抗原 自身抗体自身抗体 免疫球蛋白免疫球蛋白 补体补体 淋巴细胞淋巴细胞 细胞因子细胞因子 循环免疫复合物循环免疫复合物 常规检查常规检查 自身免疫性疾病的主要实验室检测项目自

9、身免疫性疾病的主要实验室检测项目 自身免疫性疾病的自身抗体检测自身免疫性疾病的自身抗体检测 自身抗体（自身抗体（autoantibodyautoantibody） 是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗 原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重 要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自 身抗体谱身抗体谱 19481948年年 HaragravesHaragraves等发现等发现 LE LE 细胞现象细胞现象 19571957年年 HolborowHolborow等应用等应用IIFI

10、IF检测检测ANAANA 19611961年年 BeckBeck等发现等发现ANAANA不同荧光染色模型不同荧光染色模型 60607070年代年代 新的自身抗体不断发现新的自身抗体不断发现 19791979年年 应用免疫印迹技术检测自身抗体应用免疫印迹技术检测自身抗体 8080- -9090年代年代 蛋白多肽水平认识自身抗原蛋白多肽水平认识自身抗原 9090年代年代-至今至今 基因重组和分子生物学技术技术开始应用基因重组和分子生物学技术技术开始应用 自身抗体研究和检测自身抗体研究和检测 自身抗体研究发展简史自身抗体研究发展简史 1、疾病标志性自身抗体：此类自身抗体只出现 于某种AID中，诊断价

11、值大，如系统性红斑狼 疮的抗SM 抗体 2、疾病特异性自身抗体：此类自身抗体在某种 AID中敏感性高；在其他疾病也可出现，但敏 感性低，如系统性红斑狼疮的抗dsDNA 3、疾病相关性自身抗体：此类自身抗体与某种 AID密切相关，但在其他疾病也可出现，且有 一定的敏感性，如原发性干燥综合征中的抗 SSA抗体和抗SSB抗体 自身抗体的分类自身抗体的分类 4、疾病非特异性自身抗体：此类自身抗体可在 多种AID中出现，不具疾病诊断特异性，如抗 核抗体（ANA），可见于多种结缔组织病 5、生理性自身抗体：在正常人中常存在针对自 身抗原的自身抗体，此类自身抗体效价低，不 足以引起自身组织的破坏，但可协助清

12、除衰老 蜕变的自身成分，起免疫自稳效应，其出现的 频率和滴度随年龄增长而增高，常见的自身抗 体有抗核抗体（ANA）、类风湿因子RF 自身抗体的分类自身抗体的分类 自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体（谱）自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体（谱） 是自身免疫性疾病的重要标志是自身免疫性疾病的重要标志 与疾病的活动性相关与疾病的活动性相关 参与免疫病理性损伤参与免疫病理性损伤。 自身抗体的特性自身抗体的特性 AID诊断与鉴别诊断诊断与鉴别诊断 AID 病情评估与治疗监测病情评估与治疗监测 AID病程转归与预后判断病程转归与预后判断 AID致病机制的研究致病机制的研究 自身抗体的临床意义自身抗体的

13、临床意义 抗核抗体（抗核抗体（ANAANA） 抗可提取性核抗原抗体（抗可提取性核抗原抗体（ENAENA） 抗中性粒细胞胞浆抗体（抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAANCA） 类风湿因子（类风湿因子（RFRF） 抗角蛋白抗体（抗角蛋白抗体（AKAAKA） 抗环瓜氨酸肽抗体（抗抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCPCCP抗体）抗体） 抗心磷脂抗体（抗心磷脂抗体（ACLAACLA） 常检测的自身抗体常检测的自身抗体 标志抗体标志抗体 相关疾病相关疾病 dsDNA 、SmSm 系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮SLE SSB 干燥综合症干燥综合症SS 着丝点抗体着丝点抗体 进行性系统硬化症进行性系统硬化症PSS（局限型局限

14、型） Scl-70 抗体抗体 进行性系统硬化症进行性系统硬化症PSS（弥漫型弥漫型） AKA、抗抗CCP 抗体抗体 类风湿性关节炎类风湿性关节炎RA Jo-1 抗体抗体 多发性肌炎多发性肌炎、皮肌炎皮肌炎PM/DM RNP 抗体抗体 混合结缔组织病混合结缔组织病MCTD 肝肾微粒体抗体肝肾微粒体抗体（LKM-1） 型型自身免疫性肝炎自身免疫性肝炎 平滑肌抗体平滑肌抗体（SMA） 型型自身免疫性肝炎自身免疫性肝炎 AMA（M2） 原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化PBC 常见自身免疫性疾病的标志抗体常见自身免疫性疾病的标志抗体 间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IIFIIF） 酶联免疫吸附实验酶

15、联免疫吸附实验(ELISAELISA) ) 免疫印迹法（免疫印迹法（WesternWestern- -blotblot） 酶免疫斑点法酶免疫斑点法 化学发光或电化学发光化学发光或电化学发光 生物芯片技术生物芯片技术 检测自身抗体的方法检测自身抗体的方法 间接免疫荧光法示意图间接免疫荧光法示意图 HEpHEp- -2 2细胞细胞 肝组织切片肝组织切片 荧光标记抗体荧光标记抗体 病人血清（待检抗体）病人血清（待检抗体） 均质型均质型 自身抗体荧光图片自身抗体荧光图片 着丝点型着丝点型 核仁型核仁型 斑点型斑点型 自身抗体荧光图片自身抗体荧光图片 抗核糖体抗核糖体P蛋白蛋白（rib-P）抗体抗体 抗线粒体抗体抗线粒体抗体（AMA） SLESLE标志抗体标志抗体 原发性胆汁性肝硬化标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体 免疫印迹技术(immunoblotting) 属于膜载体酶免疫技术，其固相载体为吸附有抗 原的硝酸纤膜。 是从小牛或兔胸腺提取的ENA抗原，经SDS聚丙 烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)，按分子量大小分 离成区带。 将各抗原区带转印至硝酸纤维膜上制成抗原吸附 载体膜。 将待检血清加在已切成细条的硝酸纤维膜上，待 检血清中存在的抗ENA抗体分别与硝酸纤维膜上 的相应抗原区带结合，当再加入酶标记抗人IgG 抗体后形成抗原-抗体-酶标