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1、 硕硕 士士 学学 位位 论论 文文 白斑综合症病毒囊膜蛋白基因 vp26 在大肠 杆菌杆菌和毕赤酵母的表达及纯化 白斑综合症病毒囊膜蛋白基因 vp26 在大肠 杆菌杆菌和毕赤酵母的表达及纯化 作 者 姓 名作 者 姓 名 沈沈 坚坚 指 导 教 师 指 导 教 师 许梓荣许梓荣 教授教授 学科、专业学科、专业 动物营养与饲料科学动物营养与饲料科学 所 在 学 院所 在 学 院 动物科学学院动物科学学院 提 交 日 期提 交 日 期 二二 O O 五年五月五年五月 中 国 杭 州 单 位 代 码：1 0 3 3 5 研究生学号：20217025 白斑综合症病毒囊膜蛋白基因 vp26 在大肠杆菌
2、杆菌和毕赤酵母的 表达及纯化 白斑综合症病毒囊膜蛋白基因 vp26 在大肠杆菌杆菌和毕赤酵母的 表达及纯化 论 文 评 阅 人： 答辩委员会主席： 答辩委员会成员： 论文答辩日期： ZHEJIANG UNIVERSITY A Dissertation Submitted for MD Degree Expression and purification of envelop protein gene vp26 of White Spot Syndrome virus in E.coli and pichia pastoris Jian Shen Supervisor: Professor Zi
3、-Rong Xu College of Animal Science May, 2005 硕士学位论文 摘要 硕士学位论文 摘要 目录目录 中文摘要I 英文摘要 III 主要英文缩写- V 第一章第一章 前言前言 1. 白斑综合症（白斑综合症（WSS）的病症）的病症 -1 1.1. 白斑综合症（WSS）外表特征-1 1.2. 白斑综合症（WSS）病理特征-1 2. 白斑综合症（白斑综合症（WSS）的病原）的病原 -2 2.1. 命名-2 2.2. 分类地位-2 3. WSSV 的宿主和传播途径的宿主和传播途径 -3 3.1. 宿主种类-3 3.2. 传播途径-3 4. WSS 的诊断的诊断 -
4、4 4.1. 传统诊断法-4 4.2. 酶联免疫吸附试验（ELISA） -5 4.3. 核酸探针技术-5 4.4. 聚合酶链式反应（PCR） -6 5. 白斑综合症病毒（白斑综合症病毒（WSSV）的分子生物学特性）的分子生物学特性-6 5.1. 白斑综合症病毒（WSSV）的形态结构-6 5.2. 白斑综合症病毒（WSSV）的理化特性-7 5.3. 白斑综合症病毒（WSSV）的基因组-7 5.4. 结构蛋白-8 5.5. 病毒自身编码的酶-10 5.6. 同源重复区域-12 5.7. 其它基因-12 6. 致病机理致病机理 -12 硕士学位论文 摘要 7. 疾病防治疾病防治 -13 7.1. 培
5、育健康的虾苗-13 7.2. 改善养殖环境-13 7.3. 药物防治-14 第二章第二章 白斑综合症病毒囊膜蛋白基因白斑综合症病毒囊膜蛋白基因 vp26 的克隆及序列分析的克隆及序列分析 1. 基因克隆策略基因克隆策略 -16 2. 实验材料实验材料 -17 3. 试验方法试验方法 -18 3.1. 白斑综合症病毒（WSSV）的分离纯化与模板的制备-18 3.2. 白斑综合症病毒囊膜蛋白基因 vp26 的克隆 -19 3.3. PCR 产物的凝胶电泳 -20 3.4. 目的片断的割胶回收（采用 QIAquick 试剂盒）-20 3.5. DNA 片断的连接-20 3.6. TOP 10F 感受
6、态细胞的制备与转化-21 3.7. 重组质粒的提取与鉴定-21 3.8. 测序-22 4. 试验结果试验结果 -22 4.1. 白斑综合症病毒（WSSV）的分离纯化-22 4.2. 基因组 DNA 提取-22 4.3. 白斑综合症病毒囊膜蛋白基因 vp26 的 PCR 扩增结果 -23 4.4. 阳性克隆子的筛选和鉴定-23 4.5. 核苷酸序列分析-23 第三章第三章 白斑综合症病毒囊膜蛋白基因白斑综合症病毒囊膜蛋白基因 vp26 在大肠杆菌中的表达在大肠杆菌中的表达 1. 表达策略表达策略 -30 2. 实验材料实验材料 -31 3. 试验方法试验方法 -33 3.1. vp26 基因的克隆-
