植物细胞的大规模培养

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1、植物细胞的大规模培养,植物细胞大规模培养方法,悬浮培养 固体化培养,悬浮培养,是一种使组织培养物分离成单细胞接种于液体培养基中，在保持良好的分散状态下培养并不断扩增的方法。 在进行细胞培养时，需要提供容易破裂的愈伤组织进行液体振荡培养，愈伤组织经过悬浮培养可以产生比较纯一的单细胞,而紧密不易碎的愈伤组织就不能达到上述目的。,悬浮培养,悬浮培养优点：,增加培养细胞与培养液的接触面积，改善营养供应 避免细胞代谢产生的有害物质在局部积累而对细胞自身产生毒害 保证氧气的充分供应等。,悬浮细胞培养的类型有：,成批培养：只有一定的气体交换，营养物质耗尽，细胞和产物一次性收获。 连续培养：新鲜培养液连续添加

2、，用过的培养液平衡排出，营养物质不断补充，细胞保持在增值最快的对数生长期 封闭式：回收流出的细胞于培养系统中，细胞数目增加 开放式：流出的细胞不回收于培养系统中，但进行细胞收获 半连续培养：新鲜培养液每隔一段时间添加，用过的培养液平衡排出，营养物质不断补充,细胞培养同步化：,1、物理法 1）体积分选 2）冷处理法 2、化学法 1）饥饿法 2）抑制法,影响悬浮细胞生长的因素：,起始愈伤组织的质量 接种细胞密度 培养条件：方式、温度 继代周期,细胞生长情况分析测定方法：,1、细胞计数：单位体积细胞浓度； 2、细胞体积：培养物离心后测定细胞层所占的体积； 3、细胞鲜重或干重：过滤或干燥后称重 4、有

3、丝分裂指数：有丝分裂细胞占总细胞的百分数,细胞活力测定,1、相差显微镜观察法 细胞质环流，正常细胞核 2、FDA（荧光素双乙酸酯）染色法 由于荧光素不能自由的穿越细胞质膜，而能在活细胞中积累，但死细胞、破损细胞不能积累。 3、伊凡蓝染色法 不被染色的为活细胞,固定化培养：,将游离的细胞包埋在多糖或多聚化合物制备成的网状支持物中，培养液呈流动状态，进行无菌培养的一种技术。 特点：细胞固定，而培养液循环流动,细胞固定化意义（优点）：,1）细胞生长较慢，有利于次生代谢物的积累。 2）易控制化学环境、收获次生代谢产物。 3）细胞经包埋后受剪切力损伤小。 4）有利于进行连续培养和生物转化。,植物细胞培养的应用,植物细胞含有人类所需的成分，包括初生代谢物（蛋白质、碳水化合物、脂肪等）和次生代谢物（多酚类、香精油、生物碱、树脂等），传统提取分离这些物质由于资源短缺和需求量的加大，难以满足需求，通过细胞培养生产植物产品成为解决的有效途径。,植物细胞固定化的技术,按其支持物可分为两大类： 1.包埋式： 琼脂、琼脂糖、藻酸盐、聚丙烯酰胺 2.吸附式： 尼龙网、聚氨酯泡沫、中空纤维,