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1、1肝癌患者腹水/血清 RANTES 的测定及意义陈国英 1 徐聪琴 2 郑翠萍 3 童向民 4【摘要】目的研究肝癌所致的胸水以及趋化因子调节活化正常 T 细胞表达和分泌因子(RANTES) 的表达水平及临床意义。 方法用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定 33例肝癌患者以及正常对照 20例血清中 RANTES 的水平。结果肝癌患者血清及胸水中 RANTES水平升高较对照组升高明显。结论趋化因子在肝癌中发挥的 T细胞免疫应答，为以后的临床应用奠定实验基础。【关键词】调节活化正常 T 细胞表达和分泌因子；肝癌Study on chemeokines and receptors of serum a
2、nd ascites in patients withhepatocellular carcinoma 【Abstract】Objective The expression of regulated on activation normal T cell expressed and secreted(RANTES), in patients with hepatocellular carcinomaSo that to find out the role of RANTES in the pathophysiologieal process of hepatocellular carcinom
3、a. Methods The concentration of RANTESin serum and ascites from 33 hepatocellular carcinoma patients was determined by enzyme-labeled immunerbent assay (ELISA) and were compared with healthy donors. Results The expression of RANTES was significantly higher in hepatocellular carcinoma than that of in
4、 healthy donors. Conclusions RANTES play a different role of T cells immune response in hepatocellular carcinoma【Key Words】activation normal T cell expressed and secreted, hepatocellular carcinoma 在各种原因引起的腹膜疾病中，由细胞因子介导的细胞免疫起到重要作用。调节活化正常T细胞表达和分泌因子(regulated on activation normal T cell expressed and s
5、ecreted，RANTES)为炎症性趋化因子，具有调节T淋巴细胞分化的功能。在炎症条件下，RANTES增多，能募集很多包括活化的效应T淋巴细胞进入组织的炎症损伤部位执行免疫应答功能 1 2。我们对肝癌腹水及血清中趋化因子含量进行检测，旨在探讨它们在肝癌中的作用及意义。1 材料和方法作者单位：1 宁波市第九医院；2 温州市永嘉县人民医院；3 温州市第二人民医院； 4 浙江大学医学院附属第一医院。第一作者简介：陈国英，女，主治医师，麻醉专业，联系电话：0574- 56803996 ,Email:. 浙江省卫生厅科研项目（2011KYA15，2011KYB111） 资助211 研究实验对象：本院收
6、治的 33肝癌患者。20 例正常对照组均为排除了重大疾病的健康成年人。各组的年龄性别无差异（数据未显示）。患者标本取自外周血和腹水，正常对照组取自外周血。12 标本收集：抽取空腹外周静脉血 5ml，或者胸水 5 ml。以 2500r/min 离心 15min，取上清，置于20备检。13 主要仪器和试剂：酶标仪(Bio-RAD Model 550，Biol-Tiok公司)、台式高速低温离心机(Avanti J-30I Centrifuge，美国Beckman公司)、振荡仪(WSZ-l00-A)、37孵箱、普通离心机、RANTES的ELISA试剂盒 (Catalog Number DSA00，美国
7、R&D 公司) 。14 RANTES 的检测方法： RANTES 的检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA） ，操作按照R&D 试剂盒( RNATES cat#DY278)说明书进行。其主要步骤为：分别向包被鼠抗人RANTES 单抗的微孔内加入 50l 的 RANTES 标准品或检测血清、按 1：3 稀释，将 96 孔板盖上薄膜置于室温中孵育 2 h，孵育后洗涤 3 次。分别加入 50l 酶联复合物，显色，全自动酶标仪分别读取 RANTES 浓度，标本均行复孔检测，均值为终浓度。15 统计学处理：数据以 s 表示，两组间比较采用 SPSS 11.0 统计软件作 t 检验。xP0.05 判断为有显
8、著性差异。2结果肝癌和正常人RANTES水平的比较肝癌外周血RANTES水平较正常人高，有统计学差异（ P0.05）。在同一个肝癌患者中，腹水的RANTES水平与同组的血清表达也明显增高（ P0.05）。具体见表1。表 1 血清及胸水 RANTES 的水平（ s）xRANTES (pg/ml) 组别 例数血清 腹水 肝癌组 33 411176 731117* 对照组 20 14943 注：* 同组内与血清水平比较，P 0.05。3 讨论在特异性趋化因子引导下，癌细胞从原发部位向特定器官转移。RANTES在人类乳腺3癌细胞，及远处转移灶均高度表达。T细胞应答的中心过程是T细胞向Th1型或Th2型
9、分化。T细胞致敏阶段细胞因子的不同组合决定了效应T细胞所产生的细胞因子的类型。作为Th1、Th2不同效应能力的一部分，它们可能表达不同的趋化因子受体，使得它们向不同组织趋化。而趋化因子正是一组具有趋化作用的细胞因子,能吸引免疫细胞到免疫应答局部,参与免疫调节和免疫病理反应。特异吸引CD4 + / CDRO45 + T 细胞进入某些特定部位，在腹水的发生形成中起着极为重要的作用 【3】 。在本文资料中，肝癌患者RANTES的表达较正常人高，证实了RANTES与肝癌也存在有密切的相关性。由于Th2细胞上选择性地表达CCR3，CCR3的T细胞产生Th2细胞因子，RANTES与受体CCR3相互作用，在
10、调节 Th2细胞因子方面发挥重要作用。肿瘤组织多分泌Th2类细胞因子，机体处于Th2细胞因子优势状态是肿瘤免疫逃逸的机制之一 【4】 。所以我们认为，RANTES的表达升高，可能与Th2细胞因子的升高以及肿瘤免疫逃逸有关。有报道认为，恶性胸腔积液Thl细胞因子水平低于结核性胸膜炎，表明恶性胸腔积液的局部Thl免疫应答比结核性胸腔积液低 【5】 。在恶性肿瘤患者体内，内源性的Thl细胞因子产生能力及肿瘤细胞对Thl细胞因子的反应能力常显著下降，是导致病情进一步恶化、浸润和转移的重要因素趋化因子在炎症中的研究比较深入，而在肝癌腹水中的研究国内尚未见报道。由于趋化因子在肿瘤发生中的重要作用，目前已经
11、有设想将趋化因子受体拮抗剂，包括单克隆抗体，趋化因子修饰物以及最近研制的小分子无机物用于肿瘤治疗。在未来的几年中，它们很可能成为治疗肿瘤和变态反应疾病的有效药物。我们的研究为以后趋化因子的应用奠定了实验基础。参考文献1 Klimiuk PA, Sierakowski S, Latosiewicz R, et al. Histological patterns of synovitis and serum chemokines in patients with rheumatoid arthritisJ. J Rheumatol, 2005, 32(9):1666-72.2 Hirokazu T
12、amamura，Miho Fujisawa，Kenichi Hiramatsu,et al.Identification of a CXCR4 antagonist, T140 analog, as an anti-rheumatoid arthritis agent. FEBS Letters 569 (2004) 99-104.3 Hosaka S, Akahoshi T, Wada C, et al . Expression of the chemokine superfamily inrheumatoid arthritisJ. Clin Exp Immunol ,1994 ,97(3
13、) :451-457.4 Matthias Mack, Hilke Bruhl, Rudi Gruber, et al. Predominance of mononuclear cells expressing the chemokine receptor CCR3 in synovial effusions of patients with different from of arthritisJ. Arthritis Rheum, 1999(5), 42:981-988.45 Okamoto M ，Kawabe T，1wasald Y ，et a1Evuatbn of interferongamma，interfemn-gamma-inclucing cytokines，and interferongammaindudblechnokines in tuberculous pleural effusionsJJ Lab Clin Med，2005，145(2) ：889
