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1、实验动物饲养与管理,实验动物饲养管理内容,微生物控制及环境设施管理 饲料营养管理 育种繁殖管理 常用实验动物的日常管理,一微生物控制及环境设施管理,1、实验动物按微生物等级分类 2、普通动物的概念 3、清洁级动物的概念 4、无特定病原体动物的概念 5、无菌动物的概念 6、屏障环境的管理,1、实验动物按微生物等级分类,普通动物 清洁动物 无特定病原体动物(SPF动物) 无菌动物,2、普通级动物的概念,普通级动物 conventional (CV ) animal 是微生物和寄生虫控制级别最低的实验动物；要求不携带主要的人兽共患病病原、动物烈性传染病病原及人兽共患寄生虫，如沙门菌、结核分枝杆菌、狂
2、犬病病毒和兔出血症病毒等。 普通级动物有豚鼠、地鼠、兔、犬和猴等，普通级小鼠和大鼠等级被取消。,3、清洁级动物的概念,清洁动物 clean (CL) animal 是根据我国国情而设立的等级动物，除普通级动物应排除的病原和寄生虫外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原和寄生虫，如小鼠肝炎病毒、仙台病毒等。 清洁动物有小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔等动物。犬和猴没有清洁级。,4、无特定病原体动物的概念,无特定病原体动物（SPF动物） specific pathogen free (SPF) animal 通常被称为SPF动物，除清洁动物应排除的病原和寄生虫外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科
3、学实验干扰大的病原和寄生虫。如绿脓杆菌等。 SPF动物包括小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬和猴等。,5、无菌动物的概念,无菌动物germ free (GF) animal 指无可检出一切生命体的动物。其来源是普通动物经无菌剖腹产手术，幼子在无菌隔离器中人工哺育或由其他无菌动物代乳饲育而成。 “无菌”只是一个相对概念，仅仅指以目前的技术手段未能查出微生物。,6.屏障环境管理,严格规定人员、物品、动物的流向 合理选择消毒方法 积极开展各项指标的检测工作 认真做好屏障环境内外的清洁消毒工作 加强人员队伍建设和管理 有效的检测措施,严格规定人员、物品、动物的流向,人员流向:外环境第一更衣淋浴第二更衣洁净
4、走廊实验室次洁净走廊缓冲间外环境 动物流向:购买SPF 级动物检疫/ 观察室实验室 次洁净走廊缓冲间解剖室 物品流向:洗消间高压灭菌设备/ 渡槽/ 传递窗消毒物品储存室实验室次洁净走廊缓冲间外环境,合理选择消毒方法,饲养笼盒、饮水瓶、垫料、衣服和各种实验用具采用高压蒸汽灭菌器消毒; 动物食用饲料采用放射性照射(60Co ) 的消毒方法; 工作人员用的拖鞋等采用渡槽浸泡的方法(0.15 %灭菌净溶液) 消毒; 对于不耐热、不耐水、不耐酸碱和不能进行放射性照射的物品采用传递窗紫外线消毒。,积极开展各项指标的检测工作,经常对空调通风系统进行保养,每12 周更换排风口过滤膜,每两个月更换一次初效和中效
5、过滤袋,每年更换一次高效过滤膜; 每半年检测一次外购饲料的微生物指标和营养成分,每半年检测一次纯净水的微生物指标;每天对温湿度、压差等进行监测。,认真做好屏障环境内外的清洁消毒工作,保持屏障环境内的洁净度是SPF 级动物房正常运行的关键。 每天的实验和饲养工作完成后,对室内环境进行清洁,每周3 次用灭菌净消毒水对整个屏障系统的内环境和饲养笼架进行消毒。,屏障系统动物实验室的管理者 屏障系统动物实验室的使用者,屏障系统动物实验室的管理者,专职技术人员（包括实验管理人员,设施设备维护人员和试验操作人员） 既要掌握对屏障系统动物实验室生物安全性防护知识和维护、操作技术 又要有一种对屏障系统动物实验室
6、的高度责任心,随时关注系统的安全和正常运行,及时发现和解决问题。,屏障系统动物实验室的使用者,进行项目研究的科研人员 ： 必须接受专职的管人员对其进行培训 了解屏障系统的流程、路线,人员、物品和动物进出屏障系统动物实验室的方式方法,注意事项,有效的检测措施,环境设施的检测 日常消毒灭菌物品的检测,环境设施的检测,主要参数包括温度、湿度、噪音、光照、室内风速、氨浓度、室内换气次数、各区域压力差等。要根据检测的指标调整或适时更换维护系统的设备, 对多项环境参数的正常维持都有着重要的作用。 温、湿度和压差需每日记录,根据它们的变化,需要对风阀或空气过滤器进行更换处理。环境指标的全面系统检测一般一个季
7、度检测一次。,日常消毒灭菌物品的检测,双扉高压真空灭菌器,用于所有可经高压灭菌的物品; 消毒液渡槽,用于可浸泡消毒的物品; 紫外线灭菌渡舱,用于不能高压,又不能浸泡的物品。,加强人员队伍建设和管理,人员污染是洁净动物设施失败的重要原因。 人与动物直接接触之间的防护仅仅是洗澡和穿上灭菌衣、戴上手套和口罩。裸露部分很容易对环境造成污染。 工作人员容易出汗，偶尔也打喷嚏，但灭菌衣、口罩并不具备初、中、高效过滤功能，也容易对环境造成污染。,二.饲料营养管理,1、啮齿类实验动物的营养需要 2、实验动物饲料的质量标准 3、饲料的质量要求 4、饲料对实验结果的影响,实验动物的食性与营养需要,实验动物的食性与
8、营养需要： * 食性不同种动物摄取食物的习性。 * 依食性将动物分为三大类： 草食性动物：豚鼠、兔、羊； 肉食性动物：狗、猫； 杂食性动物：小鼠、大鼠、金黄地鼠、猴。 实验动物的基本营养需要实验动物对蛋白质、碳 水化合物、脂类、矿物质、维生素和水等营养素的日平均需求量。,1、啮齿类实验动物的营养需要 大鼠、小鼠 饲料蛋白质占18%-20%左右，粗纤维5%，粗脂肪4%。维生素A需求量为每公斤饲料含7000-14000IU，通常以加入1%的清鱼肝油来满足。应适当补充维生素E，每公斤饲料含60-120IU，以提高受孕率。 金黄地鼠 饲料蛋白质占21%24%，动物性蛋白尚应含相当比例，主要来源于鱼粉
9、和鸡蛋。植物性蛋白主要来源于黄 豆和豆粉。此外, 应喂饲一些白菜 、萝卜、黄瓜等青饲料。,豚鼠 饲料蛋白质占17%-20%左右，尤其对精氨酸的需要量较高。由于它的盲肠较发达，因而对纤维素亦有较高需要，应占饲料总量的10%-15%左右。豚鼠体内不能合成维生素C，因此要在饲料中添加。一般每公斤饲料含维生素C 1500mg，妊娠豚鼠每公斤饲料含维生素C 1800mg。实际喂养时，主要可喂饲苜蓿草粉、干草粉和(或)绿色蔬菜等。,兔 新生家兔一般要哺乳一个月左右才能开始吃饲料。家兔饲料中蛋白质应占14%-17%，粗脂肪占3%，粗纤维占10%-15%以上。饲料中应含大量干草,以补足其对粗纤维的基本需要量，
10、从而可防止家兔因粗纤维摄入不足而导致腹泻。,犬和猴的营养需要 犬 为肉食性动物，其饲料中应含2024%蛋白质，4.5%-6.5%粗脂肪，3%粗纤维。注意添加维生素A、D、B1、B2, 特别是维生素E。,猴 为杂食性动物，其饲料中的蛋白质应占16%21%，粗脂肪4% 5%。猴体内不能合成维生素C，其需求量为每公斤饲料含1700-2000mg，因而要注意补充。 在人工喂养时， 应以 面粉、鸡蛋、食盐、骨粉 制作的蛋糕或饼干作为 主食，此外还应有苹果、 香蕉、蔬菜等作为辅食。,2、实验动物饲料的质量标准 饲料的种类及营养特点 * 按来源-植物性和动物性饲料。 * 按物理性状-粉状饲料、颗粒饲料、膨化
11、饲料等。 * 按其营养特性-粗饲料、青绿和青贮饲料、能量饲料、蛋白质饲料、矿物质饲料、维生素饲料、添加剂。 * 粗饲料-干苜蓿、干青草粉、稻草等。 * 青绿和青贮饲料-天然牧草、树叶等。 * 能量饲料-玉米、高粱、大麦等。,苜蓿,苜蓿以“牧草之王”著称，不仅产量高，而且草质优良，各种畜禽均喜食。最适宜的条件是土质松软的沙质壤土,在陕西、河北、山西、山东、天津、北京地区，以秋播最好。,鼠料,兔料,犬膨化饲料,* 蛋白质饲料-植物性蛋白饲 料如大豆、黑豆等, 动物性蛋白 饲料有肉粉、鱼粉、骨粉等。 * 矿物质饲料-食盐、石灰石 、贝壳等。 * 维生素饲料-酵母、鱼肝油、 各种人工合成或提纯的单一维
12、生素 、复合维生素制剂等。 * 添加剂-防腐剂、抗氧化剂 、着色剂、激素等非营养性添加剂。,大豆,豆粕,鱼粉,3、饲料的质量要求 1. 原料来源清楚，应不含化学药品，无虫害、细菌及霉菌污染，不发生变质，农药残留不应超过国家规定的标准。 2. 对于SPF动物，饲料要求无菌：而无菌动物和悉生动物的饲料则要求完全无菌。 3. 选择品质新鲜的原料进行加工。 4. 贮存原料的仓库要保持通风、低温、干燥，以防霉变产生黄曲霉素。 5. 饲料经配制加工后，应严密包装，以防蝇、鼠、昆虫、细菌等污染。,4、饲料营养素对动物实验结果的影响,影响动物采食量而影响实验结果 实验动物的采食量，以其能达到对能量的需求量为标
13、准。饲料的原料组成影响饲料中能量的含量，必然影响动物的采食量，而动物采食量多少又对某些实验结果产生影响。例如：某些实验的药物是掺在饲料中给予的，如果动物采食量发生变化，动物摄人药物的量也就会发生变化，最终影响实验结果。,影响动物生长发育 在生物医学研究中，以动物生长发育(包括体重、体型和组织器官的发育等)为指标的实验是常见的。如果日粮中营养素含量水平过高或过低，势必影响以生长发育指标的实验结果。例如：SD大鼠日粮蛋白水平低于14时，极显著降低肝脏重量。,影响动物生理生化指标而影响实验 主要是实验动物饲料中所含的营养素经过动物的消化、吸收后对动物的生理状态产生影响。当饲料中某种营养素含量发生改变
14、时，必然导致动物血液及某些脏器、组织中改种营养素含量的改变，并对与之相关的生理生化指标造成影响。当这种改变加深或持续时间较长时，就会造成动物对该种营养索的缺乏或中毒。 影响动物营养而影响实验结果 与营养相关研究中动物日粮的控制问题日益受到重视，特别是营养与免疫，营养与美容，营养与衰老已成为研究热点。,三 .育 种 繁 殖管理,1、实验动物育种繁殖方法 2、近交系的育种保种繁殖方法 3、封闭群动物的育种繁殖方法,1、实验动物繁殖主要有三种方法 近亲繁殖 异系杂交 随机繁殖,近交系动物的育种繁殖,近交系(inbred strain)动物经至少连续20代的全同胞兄妹之间或亲代与子代之间交配培育而成的
15、动物。如BALB/c小鼠、C57BL/6J小鼠等。,近交系(inbred strain)动物育种原理是人为地使动物连续进行近亲交配，逐代提高基因纯合率并固定目标状，从而获得具有目标性状的纯系群体。,育种方法,1 、初始动物的选择 2 、育种代数及其调整 3 、系谱记录 4 、单个或多个近交系 一般来说，培育单个近交系可从初始动物中选择一个交配对始，而培育多个近交系则可选择多个独立的交配对。 5 、个体选择培育,6 、防止断种 近交常导致近交衰退(如不能生育)而断种。防止断种可采取以下措施 (1)保持多支繁殖谱系线，通常为34支。 (2)每支谱系线上保留多个繁殖对，通常为712对 (3)在动物没
16、有生育下一代时，不要完全淘汰其有生育能力的亲代，即随时都保持至少两代动物同时存在。 (4)选择生育能力较好的谱系线留种。,保种方法,单线法 从基础群中选择35对全同胞兄妹进行交配，再在子代中选择l对生育能力最好的同胞兄妹进行交配，以后每代都选留l对。这种方法有利于增进群体在遗传上的均一性，但却减少有效的遗传变异，且难以在同时期繁殖出众多子代，特别是容易断种。,平行线法 从基础群中选择35对全同胞兄妹进行交配，再在每对兄妹的子代中分别选留1对，以后每对兄妹每一后代都选留l对。这种方法保持的群体在遗传上的均一性比单线系统差，随着保种代数的不断增加，群体中个体间的性状差异逐渐明显，但有利于防止断种。,选优法 从基础群(foundation colony)中选择35对全同胞兄妹进行交配，再在各兄妹的子代
