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1、化学发光免疫测定技术化学发光免疫测定技术(CLIA)(CLIA)简介简介2009年年8月月13日日 国内外研究、使用现状国内外研究、使用现状临床检测主要是采用免疫学方法。临床免疫检测技术是利用抗临床检测主要是采用免疫学方法。临床免疫检测技术是利用抗临床检测主要是采用免疫学方法。临床免疫检测技术是利用抗临床检测主要是采用免疫学方法。临床免疫检测技术是利用抗原抗体反应原理检测生物体内物质的技术，该技术的引入使临床化学原抗体反应原理检测生物体内物质的技术，该技术的引入使临床化学原抗体反应原理检测生物体内物质的技术，该技术的引入使临床化学原抗体反应原理检测生物体内物质的技术，该技术的引入使临床化学检验
2、发生了革命性的变化：检测项目不断增加，方法的灵敏度更高、检验发生了革命性的变化：检测项目不断增加，方法的灵敏度更高、检验发生了革命性的变化：检测项目不断增加，方法的灵敏度更高、检验发生了革命性的变化：检测项目不断增加，方法的灵敏度更高、特异性更强，自动化程度更高。自上世纪特异性更强，自动化程度更高。自上世纪特异性更强，自动化程度更高。自上世纪特异性更强，自动化程度更高。自上世纪8080年代以后，免疫学检测技年代以后，免疫学检测技年代以后，免疫学检测技年代以后，免疫学检测技术随着单克隆抗体、人工合成多肽、基因工程表达抗原及各种标记技术随着单克隆抗体、人工合成多肽、基因工程表达抗原及各种标记技术随
3、着单克隆抗体、人工合成多肽、基因工程表达抗原及各种标记技术随着单克隆抗体、人工合成多肽、基因工程表达抗原及各种标记技术的成熟而迅速发展，放射免疫测定术的成熟而迅速发展，放射免疫测定术的成熟而迅速发展，放射免疫测定术的成熟而迅速发展，放射免疫测定(RIA)(RIA)和酶免疫测定和酶免疫测定和酶免疫测定和酶免疫测定(EIA)(EIA)逐渐取逐渐取逐渐取逐渐取代传统的免疫沉淀和免疫凝聚，使检测的敏感性、特异性都大大提高，代传统的免疫沉淀和免疫凝聚，使检测的敏感性、特异性都大大提高，代传统的免疫沉淀和免疫凝聚，使检测的敏感性、特异性都大大提高，代传统的免疫沉淀和免疫凝聚，使检测的敏感性、特异性都大大提
4、高，随后化学发光技术的应用使免疫学检测的敏感性和线性范围得到进一随后化学发光技术的应用使免疫学检测的敏感性和线性范围得到进一随后化学发光技术的应用使免疫学检测的敏感性和线性范围得到进一随后化学发光技术的应用使免疫学检测的敏感性和线性范围得到进一步的提高。这些技术在临床检验中的应用为疾病的诊断、疗效观察及步的提高。这些技术在临床检验中的应用为疾病的诊断、疗效观察及步的提高。这些技术在临床检验中的应用为疾病的诊断、疗效观察及步的提高。这些技术在临床检验中的应用为疾病的诊断、疗效观察及病因探讨提供了更直接和客观的资料。病因探讨提供了更直接和客观的资料。病因探讨提供了更直接和客观的资料。病因探讨提供了
5、更直接和客观的资料。2血液中各种标志性蛋白的含量变化对辅助诊断及判断预后、转归、血液中各种标志性蛋白的含量变化对辅助诊断及判断预后、转归、血液中各种标志性蛋白的含量变化对辅助诊断及判断预后、转归、血液中各种标志性蛋白的含量变化对辅助诊断及判断预后、转归、评价疗效等具有重要的临床意义，临床检验中需要定量检测的情况较多，评价疗效等具有重要的临床意义，临床检验中需要定量检测的情况较多，评价疗效等具有重要的临床意义，临床检验中需要定量检测的情况较多，评价疗效等具有重要的临床意义，临床检验中需要定量检测的情况较多，因此临床上使用的相关产品多为定量产品，采用的方法有放射免疫、酶联因此临床上使用的相关产品多
6、为定量产品，采用的方法有放射免疫、酶联因此临床上使用的相关产品多为定量产品，采用的方法有放射免疫、酶联因此临床上使用的相关产品多为定量产品，采用的方法有放射免疫、酶联免疫、荧光免疫、化学发光、电化学发光等。其中进口试剂有贝克曼、雅免疫、荧光免疫、化学发光、电化学发光等。其中进口试剂有贝克曼、雅免疫、荧光免疫、化学发光、电化学发光等。其中进口试剂有贝克曼、雅免疫、荧光免疫、化学发光、电化学发光等。其中进口试剂有贝克曼、雅培、德普、罗氏等跨国诊断公司的产品，采用的方法学多为化学发光，其培、德普、罗氏等跨国诊断公司的产品，采用的方法学多为化学发光，其培、德普、罗氏等跨国诊断公司的产品，采用的方法学多
7、为化学发光，其培、德普、罗氏等跨国诊断公司的产品，采用的方法学多为化学发光，其中罗氏产品为电化学发光法；而国产试剂中采用的方法学多数为放免法，中罗氏产品为电化学发光法；而国产试剂中采用的方法学多数为放免法，中罗氏产品为电化学发光法；而国产试剂中采用的方法学多数为放免法，中罗氏产品为电化学发光法；而国产试剂中采用的方法学多数为放免法，部分为酶免，近两年开始出现化学发光类产品。部分为酶免，近两年开始出现化学发光类产品。部分为酶免，近两年开始出现化学发光类产品。部分为酶免，近两年开始出现化学发光类产品。3化学发光原理化学发光原理A+BI产物产物+光光 反应试剂反应试剂反应试剂反应试剂A A和和和和B
8、 B反应生成的激发态产物，处于激发态的物质不稳定，反应生成的激发态产物，处于激发态的物质不稳定，反应生成的激发态产物，处于激发态的物质不稳定，反应生成的激发态产物，处于激发态的物质不稳定，很快跃迁到较低的能量状态（例如基态），同时将能量以光（通常为可很快跃迁到较低的能量状态（例如基态），同时将能量以光（通常为可很快跃迁到较低的能量状态（例如基态），同时将能量以光（通常为可很快跃迁到较低的能量状态（例如基态），同时将能量以光（通常为可见光）的形式发射出来。见光）的形式发射出来。见光）的形式发射出来。见光）的形式发射出来。根据激发态物质产生的方式可以将化学发光反应分为两类：一种根据激发态物质产生的
9、方式可以将化学发光反应分为两类：一种根据激发态物质产生的方式可以将化学发光反应分为两类：一种根据激发态物质产生的方式可以将化学发光反应分为两类：一种是有体系中的反应物发生化学反应直接生成激发态的产物；另一种则是是有体系中的反应物发生化学反应直接生成激发态的产物；另一种则是是有体系中的反应物发生化学反应直接生成激发态的产物；另一种则是是有体系中的反应物发生化学反应直接生成激发态的产物；另一种则是由体系内存在的易于接受能量的荧光物质，获得化学反应释放的能量后由体系内存在的易于接受能量的荧光物质，获得化学反应释放的能量后由体系内存在的易于接受能量的荧光物质，获得化学反应释放的能量后由体系内存在的易于
10、接受能量的荧光物质，获得化学反应释放的能量后转变成激发态。转变成激发态。转变成激发态。转变成激发态。4化学发光化学发光-夹心法夹心法FITCFITC标记的抗体与酶标抗体均和待测抗原不同表位结标记的抗体与酶标抗体均和待测抗原不同表位结合，形成合，形成“三明治三明治”复合结构。通过磁固相上的复合结构。通过磁固相上的FITCFITC抗体捕获分离抗体捕获分离“三明治三明治”复合物，加入发光底物，底复合物，加入发光底物，底物在酶的作用下的被催化裂解，形成不稳定的激发态物在酶的作用下的被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子，形中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子，形
11、成发光反应。成发光反应。5Y YY YY Y被测抗原被测抗原+FITCFITC标记标记抗体抗体Y Y Y Y酶标抗体酶标抗体Y Y化学发光化学发光-夹心法夹心法磁微粒磁微粒抗体抗体Y YY YY YY YY YY Y6化学发光化学发光间接法间接法间接法适用于检测对象是自身抗体的情况间接法适用于检测对象是自身抗体的情况,比如比如人甲状腺球蛋白抗体（人甲状腺球蛋白抗体（TGAB）和甲状腺过氧化）和甲状腺过氧化物酶抗体（物酶抗体（TPOAB）。）。由于抗体是由于抗体是IgG，引入酶标二抗捕获，引入酶标二抗捕获IgG。为了。为了消除样品中其它消除样品中其它IgG对实验结果的影响。先用磁对实验结果的影响
12、。先用磁珠将待测样品中待测物分离，通过洗涤后消除珠将待测样品中待测物分离，通过洗涤后消除影响，再用标记的二抗对待测物进行结合完成影响，再用标记的二抗对待测物进行结合完成化学发光。化学发光。7化学发光化学发光间接法间接法P PY YY Y待测血清待测血清Y YY YP PY YY YY YY YY YY YY YY YP PY YY YP PY YY YY YY YP PY YY YY Y待测抗体待测抗体Y Y抗抗FITC抗体抗体P PFITC标记抗原标记抗原Y Y酶标抗体酶标抗体磁珠磁珠8化学发光化学发光竞争法竞争法待测抗原属于小分子，没有足够的抗原决定簇。用已知量待测抗原属于小分子，没有足够
13、的抗原决定簇。用已知量的标记抗原，对比竞争酶标抗体。的标记抗原，对比竞争酶标抗体。若待测物浓度高若待测物浓度高, ,与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待测物结合量则多，反应发光信号值低；若待测物浓度低，测物结合量则多，反应发光信号值低；若待测物浓度低，与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待测物结合量则少，与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待测物结合量则少，反应发光信号值高。反应发光信号值高。9Y Y化学发光化学发光竞争法竞争法待测样品待测样品Y YY YY YY YY Y待测抗原待测抗原FITC标记标记的抗原衍的抗原衍生物生物Y Y酶标抗体酶标抗体Y YY YY Y待测样品和衍生物跟抗待测样品和衍生物跟抗体的竞争结合体的竞争结合Y Y用磁珠筛选和抗原衍生用磁珠筛选和抗原衍生物，通过发光计算浓度物，通过发光计算浓度10Thanks!11
