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1、微生物学实验微生物学实验实验五、消毒与灭菌实验五、消毒与灭菌生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验消毒与灭菌v消毒消毒是指采用物理、化学和生物的方法消是指采用物理、化学和生物的方法消除物体的表面病原菌和有害微生物的过程。除物体的表面病原菌和有害微生物的过程。v灭菌灭菌则是指采用物理、化学和生物的方法则是指采用物理、化学和生物的方法杀灭一切微生物的营养体，芽孢和孢子的杀灭一切微生物的营养体，芽孢和孢子的过程。过程。v在微生物实验中，需要进行纯培养，不能在微生物实验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，因此对所用器材、培养有任何杂菌污染，因此对所用器材
2、、培养基和工作场所都要进行严格的消毒和灭菌。基和工作场所都要进行严格的消毒和灭菌。生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验消毒与灭菌方法v加热灭菌加热灭菌干热灭菌干热灭菌湿热灭菌湿热灭菌v过滤除菌过滤除菌v辐射灭菌辐射灭菌放射线辐照灭菌放射线辐照灭菌紫外线灭菌紫外线灭菌v化学药品灭菌化学药品灭菌生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验干热灭菌v干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。凝固变性而达到灭菌的目的。v细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量
3、有关，细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固则蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。缓慢。v因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（高（160170），时间要长（），时间要长（12h），），但但干热灭菌温度不能超过干热灭菌温度不能超过180，否则，包器皿，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧燃烧。生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验生命科学学
4、院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于于100的温度。导致菌体蛋白质凝固变的
5、温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。性而达到灭菌的目的。生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：原因有三： 一一、湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二二、湿热的穿透力比干热大，三湿热的穿透力比干热大，三、湿热的蒸气湿热的蒸气有潜热存在。有潜热存在。1g水在水在100时，由气态变为液时，由气态变为液态时可放出态时可放出2.26kJ(千
6、焦千焦)的热量。这种潜热，的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。效力。生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。气的温度。生命科学学院微生物学教
7、研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验一般培养基用一般培养基用0.1Mpa，121.5,1530min可可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。例如含糖培养基用况而有所改变。例如含糖培养基用0.06Mpa,112.6灭菌，然后以无菌操作手灭菌，然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。又如盛于试管内的续加入灭菌的糖溶液。又如盛于试管内的培养基以培养基以0.1Mpa,121.5灭菌灭菌20min即可，即可，而盛于大瓶内的培养基最好以而盛于大瓶内的培养基最好以0.
8、1Mpa，122灭菌灭菌30min。生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验紫外线灭菌紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和理主要是因为它诱导
9、了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了链的交联，从而抑制了DNA的复制。另一方的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成面，由于辐射能使空气中的氧电离成O，再使再使O2氧化生成臭氧（氧化生成臭氧（O3）或使水（或使水（H2O）氧化生成过氧氧化生成过氧化氢（化氢（H2O2）。）。O3和和H2O2均有杀菌作用。紫外线均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室，接种箱，手穿透力不大，所以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过物以不超过1.2m为宜为宜。生命科学学院微生物学教研室生命科学学
10、院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯以前；可在无菌室内开紫外灯以前；可在无菌室内(或接种箱或接种箱内内)喷洒喷洒3%5%石炭酸溶液，一方面使石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面、凳子可用的桌面、凳子可用2%3%的来苏尔擦的来苏尔擦洗，然后再开紫外灯照射，即可增强杀洗，然后再开紫外灯照射，即可增强杀菌效果，达到菌效果，达到灭菌灭菌目的。目的。生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学
11、教研室YJH微生物学实验微生物学实验微孔滤膜过滤除菌过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的方法。根据不同的需要选用不同的滤器和滤板的方法。根据不同的需要选用不同的滤器和滤板材料。微孔滤膜过滤器是由上下二个分别具有出材料。微孔滤膜过滤器是由上下二个分别具有出口和入口连接装置的塑料盖盒组成，出口处可连口和入口连接装置的塑料盖盒组成，出口处可连接针头，入口处可连接针筒，使用时将滤膜装入接针头，入口处可连接针筒，使用时将滤膜装入两塑料盖盒之间，旋紧盖盒，当溶液从针筒注入两塑料盖盒之间，旋紧盖盒，当溶液从针筒注入滤器时，此滤器将各种微生物阻留在微孔滤膜上滤器时，此滤器将各种微生物阻留在微孔滤膜上面，从而达到除菌的目的。根据待除菌溶液量的面，从而达到除菌的目的。根据待除菌溶液量的多少，可选用不同大小的滤器。此法除菌的最大多少，可选用不同大小的滤器。此法除菌的最大优点是可以不破坏溶液中各种物质的化学成分，优点是可以不破坏溶液中各种物质的化学成分，但由于滤量有限，所以一般只适用于实验室中小但由于滤量有限，所以一般只适用于实验室中小量溶液的过滤除菌。量溶液的过滤除菌。生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH
