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1、实验十实验十微生物对不含氮有机物和微生物对不含氮有机物和含氮化合物的转化作用含氮化合物的转化作用微生物对不含氮有机物和微生物对不含氮有机物和含氮化合物的转化作用含氮化合物的转化作用n目的要求目的要求n实验程序实验程序n思考题思考题目的要求目的要求n了解几种物质的转化作用及其检了解几种物质的转化作用及其检查方法查方法实验程序实验程序n中温性纤维素分解微生物对纤维素的分解（好气性、厌气性）n蛋白质的氨化作用n硝化作用n反硝化作用 实验程序实验程序1 1 （中温性纤维素分解微生物对纤维素的分解）n材料：材料： 维素分解细菌琼脂培养基和深层培养液。维素分解细菌琼脂培养基和深层培养液。 菜园土、镊子、无
2、菌培养皿、直径菜园土、镊子、无菌培养皿、直径9 9cmcm的无菌的无菌滤纸、尼龙绳、橡皮圈、染色液等。滤纸、尼龙绳、橡皮圈、染色液等。n好气性纤维素分解菌对纤维素的分解好气性纤维素分解菌对纤维素的分解n厌气性纤维素分解菌对纤维素的分解厌气性纤维素分解菌对纤维素的分解 实验程序实验程序2 2 （好气性纤维素分解菌对纤维素的分解）好气性纤维素分解菌对纤维素的分解）n方法：土粒法方法：土粒法 取已融化的纤维素分解细菌琼脂培养基取已融化的纤维素分解细菌琼脂培养基1 1管管, ,倒入无菌培倒入无菌培养皿中，制成平板。养皿中，制成平板。 用镊子取无菌滤纸用镊子取无菌滤纸1 1张，放入已凝固的琼脂平板上，使
3、张，放入已凝固的琼脂平板上，使之紧贴，以使滤纸表面湿润。之紧贴，以使滤纸表面湿润。 用镊子取肥沃菜园土用镊子取肥沃菜园土1010余粒，均匀放在滤纸表面，进行余粒，均匀放在滤纸表面，进行接种（见图）。接种（见图）。 放入放入282830300 0C C条件下培养条件下培养710710d d。 结果检查：先观察土粒周围有无黄色、桔黄色、棕色等结果检查：先观察土粒周围有无黄色、桔黄色、棕色等色斑出现。土粒周围滤纸有无破碎变薄现象。而后挑取少色斑出现。土粒周围滤纸有无破碎变薄现象。而后挑取少许菌体进行涂片、固定、染色，干燥后，油镜观察并绘图。许菌体进行涂片、固定、染色，干燥后，油镜观察并绘图。 实验程
4、序实验程序3 3 （好气性纤维素分解菌对纤维素的分好气性纤维素分解菌对纤维素的分解）解） 实验程序实验程序4 4 （厌气性纤维素分解菌对纤维素的分解）厌气性纤维素分解菌对纤维素的分解）n以以接种匙取水稻土少量接种匙取水稻土少量,接种在装有滤纸条纤维素深层培接种在装有滤纸条纤维素深层培养液中养液中,套上试管套套上试管套,再用尼龙纸及橡皮筋将管口扎紧再用尼龙纸及橡皮筋将管口扎紧.n放入放入35370C条件下培养条件下培养1015d。n取出试管，观察培养液中滤纸条有无被分解而透空的地方，取出试管，观察培养液中滤纸条有无被分解而透空的地方，如有空洞或滤纸边缘有破碎现象，表示厌氧纤维素分解细如有空洞或滤
5、纸边缘有破碎现象，表示厌氧纤维素分解细菌已大量繁殖，否则继续培养。菌已大量繁殖，否则继续培养。n用接种环自发酵液滤纸破碎处取菌液一环在载玻片上涂片、用接种环自发酵液滤纸破碎处取菌液一环在载玻片上涂片、固定、染色、镜检并绘图表示观察到的细菌形态。固定、染色、镜检并绘图表示观察到的细菌形态。实验程序实验程序5 5 （蛋白质的氨化作用）（蛋白质的氨化作用）n材料：材料： 1.牛肉膏蛋白胨培养液一管（牛肉膏蛋白胨培养液一管（5mL）。）。 2.石蕊试纸（红色）、土壤样品、比色碟、奈氏石蕊试纸（红色）、土壤样品、比色碟、奈氏（Nessler）试剂。试剂。n方法：方法： 1.放放1小匙土粒于牛肉膏蛋白胨培
6、养液的试管中。小匙土粒于牛肉膏蛋白胨培养液的试管中。 2.在管口内壁悬挂湿红色石蕊试纸在管口内壁悬挂湿红色石蕊试纸1条（见图），然后条（见图），然后塞好棉塞，放入塞好棉塞，放入28300C的温箱中培养的温箱中培养23d。实验程序实验程序6 6 （蛋白质的氨化作用）（蛋白质的氨化作用）实验程序实验程序7 7 （蛋白质的氨化作用）（蛋白质的氨化作用）n检查结果：检查结果： 1.观察试纸颜色有无变化，培养液是否浑浊或产观察试纸颜色有无变化，培养液是否浑浊或产膜。如试纸变蓝，说明有氨生成；如培养液浑浊膜。如试纸变蓝，说明有氨生成；如培养液浑浊或产膜，则说明有大量氨化细菌聚集。或产膜，则说明有大量氨化细
7、菌聚集。 2.取培养液两滴于比色碟中，加入奈氏试剂取培养液两滴于比色碟中，加入奈氏试剂1滴，滴，如有棕色或黄棕褐色出现，也说明有氨生成。如有棕色或黄棕褐色出现，也说明有氨生成。 3.取培养液取培养液1环环,制成涂片、染色，油镜下观察氨制成涂片、染色，油镜下观察氨化细菌的形态，并绘图。化细菌的形态，并绘图。实验程序实验程序8 8 （硝化作用）（硝化作用）n材料：材料： 1. 100mL三角瓶，内装硝化细菌培养液三角瓶，内装硝化细菌培养液30mL，硝化作用培养基。硝化作用培养基。 2. 格利斯（格利斯（Griess）试剂试剂、，二苯胺试剂，二苯胺试剂，土壤等。土壤等。n方法方法： 1.取菜园土取菜
8、园土1g左右接种于盛有铵盐培养液的三角左右接种于盛有铵盐培养液的三角瓶中。瓶中。 2.放入放入28300C培养培养714d。实验程序实验程序9 9 （硝化作用）（硝化作用）n检查结果：检查结果： 取培养液两滴于比色碟中，加格利斯试剂取培养液两滴于比色碟中，加格利斯试剂及及各各1滴，如出现绛红色，则证明硝化作用第一阶段正滴，如出现绛红色，则证明硝化作用第一阶段正在进行，即有在进行，即有HNO2产生。另取培养液产生。另取培养液2滴于比色滴于比色碟中，加二苯胺试剂碟中，加二苯胺试剂12滴，观察有无蓝色出现，滴，观察有无蓝色出现，如有蓝色出现，说明硝化作用第二阶段也正在进行，如有蓝色出现，说明硝化作用
9、第二阶段也正在进行，即有硝酸存在。以上结果表明硝化作用的两个阶段即有硝酸存在。以上结果表明硝化作用的两个阶段都在进行中，若只有红色出现，说明只有硝化作用都在进行中，若只有红色出现，说明只有硝化作用第一阶段存在，若有蓝色出现，则说明硝化作用已第一阶段存在，若有蓝色出现，则说明硝化作用已彻底完成。彻底完成。实验程序实验程序1010（反硝化作用）（反硝化作用）n材料：材料： 1.1.内有杜氏小管的反硝化作用培养基。内有杜氏小管的反硝化作用培养基。 2.2.格利斯试剂格利斯试剂及及，水稻土、比色碟等。，水稻土、比色碟等。n方法：方法： 取反硝化作用培养基取反硝化作用培养基1 1管，放入土壤少许，塞上管
10、，放入土壤少许，塞上棉塞，于棉塞，于283028300 0C C培养培养1 1周。周。 n检查结果：检查结果： 1.1.分子态氮：在培养过程中如有氮气产生，则培养液表分子态氮：在培养过程中如有氮气产生，则培养液表面有气泡层，或小支管中有气体聚集。面有气泡层，或小支管中有气体聚集。 2.2.取培养液两滴于比色碟中，加格利斯试剂取培养液两滴于比色碟中，加格利斯试剂及及各各1滴，如出现红色则证明有反硝化作用产生的亚硝酸。滴，如出现红色则证明有反硝化作用产生的亚硝酸。思思 考考 题题n纤维素培养基中加滤纸的作用是什么？纤维素培养基中加滤纸的作用是什么？n土壤中主要的蛋白质分解细菌有那几种土壤中主要的蛋白质分解细菌有那几种？n硝化细菌培养基中为什么不加有机成分硝化细菌培养基中为什么不加有机成分？硝化细菌从那里获得碳素营养？硝化细菌从那里获得碳素营养？n进行反硝化作用的必要条件是什么？进行反硝化作用的必要条件是什么？实验二十二实验二十二结结 束束
