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1、PDCD5PDCD5的发现和功能研究的发现和功能研究北京大学医学部北京大学医学部 马大龙马大龙1前言前言n“Life cannot exist without deathLife cannot exist without death”；每个人每天有每个人每天有5 5千万到千万到7 7千万个细胞死亡。千万个细胞死亡。n细胞凋亡（细胞凋亡（ApoptosisApoptosis）是程序化细胞死亡是程序化细胞死亡（Programmed cell death,PCDProgrammed cell death,PCD）的一种形式，的一种形式，在细胞分化、增殖、生长和疾病中起着重要的在细胞分化、增殖、生长和
2、疾病中起着重要的作用。如果机体缺乏凋亡，一个作用。如果机体缺乏凋亡，一个8080岁的老人将岁的老人将有有2 2吨重的骨髓和淋巴节，吨重的骨髓和淋巴节，1616公里长的肠道公里长的肠道（Nature,412:23,2001Nature,412:23,2001）. . 2n凋亡缺陷导致的疾病：凋亡缺陷导致的疾病： 肿瘤、SLE、多发性硬化症、糖尿病、类风湿关节炎等n凋亡过强导致的疾病：凋亡过强导致的疾病： AIDS、中风、神经退行性疾病、脊髓损伤等3提出思路提出思路n克隆化新的凋亡调控基因，将有助于阐克隆化新的凋亡调控基因，将有助于阐明凋亡机理，为凋亡异常疾病防治提供明凋亡机理，为凋亡异常疾病防治
3、提供基础。基础。n细胞凋亡过程中，将有一些基因表达改细胞凋亡过程中，将有一些基因表达改变，特别是上调表达基因，可能发挥重变，特别是上调表达基因，可能发挥重要的凋亡调节作用。要的凋亡调节作用。419991999年年, ,利用利用cDNAcDNA-RDA-RDA（Representative Representative Differences AnalysisDifferences Analysis）技术技术, ,本室从诱本室从诱导凋亡的导凋亡的TF-1TF-1细胞克隆了凋亡上调表达细胞克隆了凋亡上调表达的人类新基因的人类新基因, , 命名为命名为TFAR19 TFAR19 (TF-1 (TF-
4、1 apoptosis related gene), 2001apoptosis related gene), 2001年国际年国际基因命名委员会命名为基因命名委员会命名为PDCD5PDCD5 ( (Program Program Cell Death 5Cell Death 5) )5RDARDA技术路线图技术路线图6凋亡相关基因克隆化技术路线凋亡相关基因克隆化技术路线凋亡相关基因克隆化技术路线凋亡相关基因克隆化技术路线正常培养的TF-1细胞(Driver)进入凋亡的TF-1细胞(Tester)三轮cDNA-RDADNA测序和基因库检索用Slot Blots和Northern Blots检测
5、表达的差异RACE方法克隆PDCD5的全长序列PDCD5在E.coli中的表达、纯化PDCD5真核表达载体的构建PDCD5的胞内定位抗体制备和免疫检测PDCD5蛋白质的活性研究PDCD5转染的活性研究PDCD5在组织和细胞中表达检测7Result of Northern blots of PDCD5/TFAR19Left is RNA from normal-cultured TF-1 cellRight is RNA from TF-1 cell undergoing apoptosis8 Sequence of PDCD5 cDNA CTG CTC CAG CGC TGA CGC CGA
6、GCC ATG GCG GAC GAG GAG CTT GAG GCG CTG AGG AGA CAG AGG CTG GCC GAG CTG CAG GCC AAA CAC GGG 90 CTG CTC CAG CGC TGA CGC CGA GCC ATG GCG GAC GAG GAG CTT GAG GCG CTG AGG AGA CAG AGG CTG GCC GAG CTG CAG GCC AAA CAC GGG 90 MET Ala Asp MET Ala Asp GluGlu GluGlu LeuLeu GluGlu Ala Ala LeuLeu ArgArg ArgArg G
7、lnGln ArgArg LeuLeu Ala Ala GluGlu LeuLeu GlnGln Ala Ala LysLys His His GlyGly GAT CCT GGT GAT GCG GCC CAA CAG GAA GCA AAG CAC AGG GAA GCA GAA ATG AGA AAC AGT ATC TTA GCC CAA GTT CTG GAT CAG TCG GCC 180 GAT CCT GGT GAT GCG GCC CAA CAG GAA GCA AAG CAC AGG GAA GCA GAA ATG AGA AAC AGT ATC TTA GCC CAA G
8、TT CTG GAT CAG TCG GCC 180 Asp Pro Asp Pro GlyGly Asp Ala Ala Asp Ala Ala GlnGln GlnGln GluGlu Ala Ala LysLys His His ArgArg GluGlu Ala Ala GluGlu MET MET ArgArg AsnAsn Ser Ser IleIle LeuLeu Ala Ala GlnGln Val Val LeuLeu Asp Asp GlnGln Ser Ala Ser Ala CGG GCC AGG TTA AGT AAC TTA GCA CTT GTA AAG CCT
9、GAA AAA ACT AAA GCA GTA GAG AAT TAC CTT ATA CAG ATG GCA AGA TAT GGA CAA 270 CGG GCC AGG TTA AGT AAC TTA GCA CTT GTA AAG CCT GAA AAA ACT AAA GCA GTA GAG AAT TAC CTT ATA CAG ATG GCA AGA TAT GGA CAA 270 ArgArg Ala Ala ArgArg LeuLeu Ser Ser AsnAsn LeuLeu Ala Ala LeuLeu Val Val LysLys Pro Pro GluGlu LysL
10、ys ThrThr LysLys Ala Val Ala Val GluGlu AsnAsn TyrTyr LeuLeu IleIle GlnGln MET Ala MET Ala ArgArg TyrTyr GlyGly GlnGln CTA AGT GAG AAG GTA TCA GAA CAA GGT TTA ATA GAA ATC CTT AAA AAA GTA AGC CAA CAA ACA GAA AAG ACA ACA ACA GTG AAA TTC AAC 360 CTA AGT GAG AAG GTA TCA GAA CAA GGT TTA ATA GAA ATC CTT A
11、AA AAA GTA AGC CAA CAA ACA GAA AAG ACA ACA ACA GTG AAA TTC AAC 360 LeuLeu Ser Ser GluGlu LysLys Val Ser Val Ser GluGlu GlnGln GlyGly LeuLeu IleIle GluGlu IleIle LeuLeu LysLys LysLys Val Ser Val Ser GlnGln GlnGln ThrThr GluGlu LysLys ThrThr ThrThr ThrThr Val Val LysLys PhePhe AsnAsn AGA AGA AAA GTA A
12、TG GAC TCT GAT GAA GAT GAC GAT TAT TGA ACT ACA AGT GCT CAC AGA CTA GAA CTT AAC GGA ACA AGT CTA GGA CAG 450 AGA AGA AAA GTA ATG GAC TCT GAT GAA GAT GAC GAT TAT TGA ACT ACA AGT GCT CAC AGA CTA GAA CTT AAC GGA ACA AGT CTA GGA CAG 450 ArgArg ArgArg LysLys Val MET Asp Ser Asp Val MET Asp Ser Asp GluGlu A
13、sp Asp Asp Asp Asp Asp TyrTyr Stop Stop AAG TTA AGA TCT GAT TAT TTA CTT TGT TTA TTG TCT ATA GCC TTT TAA AAA AAT AAA CTT GTT ATG CAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 540 AAG TTA AGA TCT GAT TAT TTA CTT TGT TTA TTG TCT ATA GCC TTT TAA AAA AAT AAA CTT GTT ATG CAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 540 AAA AAA AAA
14、AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA PDCD5PDCD5PDCD5PDCD5编码蛋白结构比较简单编码蛋白结构比较简单编码蛋白结构比较简单编码蛋白结构比较简单, , , ,全长全长全长全长125125125125个氨基酸，不含二硫键，个氨基酸，不含二硫键，个氨基酸，不含二硫键，个氨基酸，不含二硫键， pIpIpIpI 5.65 5.65 5.65 5.65 ; ;无信号肽，无跨膜序列，与已知人类蛋白无同源性无信号肽，无跨膜序列，与已知人类蛋白无同源性;S118;S118可以被可以被CK2CK2磷酸化磷酸化 9PDCD5基因结构图基因结构图（染色体（染色体19q
15、12-q13.1）cDNA867bp2718bp804bp950bp323bpExon1(90bp)ATGTGAExon2(38bp)Exon3(62bp)Exon4(92bp)Exon5(72bp) Exon6(167bp)基因组基因组DNA558bp，编码编码125个氨基酸个氨基酸10PDCD5PDCD5蛋白在不同种属中序列高度保守蛋白在不同种属中序列高度保守11PDCD5 3-D modeling（根据（根据1EIJ模建）模建）12如何开展基因功能研究如何开展基因功能研究n1。构建真核表达质粒，转染细胞，通过基因过表达（Overexpression）研究基因功能。n2。构建绿色荧光蛋白表
16、达质粒，观察细胞定位。n3。表达重组蛋白，观察其对细胞的影响。13pGEM-TTFAR19EcoR IEcoR ILacZfi ori oriTFAR19AmpRCMVNeoRBGH poly AEcoRIpcDITFAR19(-)IntroEcoRIAmpRBgl II Pst IPst ISma IPst ITFAR19CMVNeoRBGH poly AEcoRIpcDITFAR19(+)IntroEcoRIAmpRBgl II Pst IPst ISma IPst ITFAR19EcoR ICMVNeoRBGH poly AEcoRISal IXhoIIL-6 cDNApcDI-IL-6
17、IntroNhe IEcoRIAmpRBgl II EcoR IT4 LigaseConstruction of pcDITFAR1914PDCD5PDCD5过表达促进过表达促进 HeLaHeLa和和 MGC-803 MGC-803 细胞撤除血清诱导的凋亡细胞撤除血清诱导的凋亡15Detection of apoptotic cells of stable transfectants of HeLa cell induced by withdrawal of serum using Annexin VpcDIpcDITFAR19(+)pcDITFAR19(-)(488nm, X400)16细胞
18、系胞系诱导凋亡因素凋亡因素TF-1GM-CSF withdrawalHL60Serum withdrawal JurkatSerum withdrawal, VP16, FAS Ab HeLaSerum withdrawal, TRAIL,Hec-1a TRAILSiHaIFN HEK293Serum withdrawalMGC-803Serum withdrawalSMMC-7721 CellsHydroxycamptothecinHaCaT UVMCF-7-rayU266 Solanum nigrum total extractionBGC823 Diallyl trisulfide (D
19、ATS)PDCD5PDCD5对各种细胞具有促凋亡效应对各种细胞具有促凋亡效应, ,但不能诱导凋亡但不能诱导凋亡17SV40 poly ApEGFP-C3CMV IENeoREGFP EcoR ISal IAmpRSma IBamH lSV40 poly ApEGFPC3PDCD5CMV IENeoREGFP BamH ITFAR19AmpRSma IBamH lSma IMCSTfar19 PCR ProductBamH ISma IXho IXho IKlenowSal IEcoR IKlenowT4 LigaseConstruction of expression vector of pE
20、GFPC3-TFAR1918Cellular localization of PDCD5 in nucleusGreen Fluorescein Protein staining (488nm)DAPI staining (DAPI wave length)19Nuclear translocation of PDCD5 in Hela cells treated with VP160 hour 30min2 hours 8 hours20Nuclear Translocation of PDCD5 in TF-1 Cells After GM-CSF deprivation.A: Cells
21、 were stained with FITC-labeled 3A3 antibody at different time points,and observed using CLSM. B: Cells were cultured in GM-CSF-free medium for 16h, then stainedwith FITC-3A3 and DAPI. Nuclear accumulation of PDCD5 and condensed nuclei were obviouslyobserved. Yingyu Chen et al:FEBS Letter，2001，509:
22、19121pLpMTY-4AmpRXho IStu IThrombin LinkerMS2EcoR IPst IPDCD5 ORF PCR Product (410bp)pLpMTY-TFAR19AmpRXho IThrombin LinkerMS2EcoR IPst ITRAF19Sma IBgl IXho IXho IStu IKlenowXho IT4 LigaseConstruction of E.coli expression vector of pMTY4-TFAR1922Expression and purification of PDCD5 in E. coliM. prote
23、in marker from Promega 1. uninduced whole bacteria 2. induced whole bacteria 3. cut after thrombin 4. purified PDCD5 protein23Western Blots to detect expression of PDCD5 protein in normal-cultured TF-1 cells and apoptotic TF-1 cellsLeft is protein from apoptotic TF-1 cellsRight is protein from norma
24、lly- cultured TF-1 cells24Purified protein of PDCD5 could promote the apoptosis of TF-1 cells induced by cytokine withdrawal25P0.002P0.004P0.004重组蛋白重组蛋白PDCD5能够明显抑制能够明显抑制IDR诱导的诱导的K562细胞的克隆形成数目细胞的克隆形成数目26人人PDCD5PDCD5蛋白的穿膜效应研究蛋白的穿膜效应研究（JBCJBC，20062006，281:24803281:24803 ）n本实验室证明人PDCD5蛋白可以通过clathrin非依赖的
25、途径从细胞外携带生物大分子到细胞内，109-115氨基酸是其活性功能区。通过细胞膜的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycan,HSPG)介导.nPDCD5的穿膜效应提示其可以作为重组蛋白药物发挥促进肿瘤治疗效应27Exogenous p53N-PDCD5 induces apoptosis 28如何封闭如何封闭PDCD5PDCD5的功能？的功能？nPDCD5单克隆抗体的细胞内导入nPDCD5反义寡核苷酸nPDCD5反义RNA表达质粒nPDCD5 RNA干扰29(Rui et al, Life Science，2002)Monoclonal antibody
26、 of PDCD5 can inhibit etoposide induced HeLa cells apoptosis 30A T GAS1(18 mer)AS2(17 mer)AS3(16 mer)Sense(18 mer)Sequence of oligonucleotides used in pilot experiment and diagram of corresponding regions to ORF of PDCD5 31FACS results of Jurkat cell apoptosis treated with oligonucleotideNo oligosen
27、seAS3AS2AS132Sequence of phosphorothioate oligonucleotides to PDCD5Antisense oligos 5-A A G C T C C T C G T C C G C C-3Control oligos 5-C A C C T A C C C A T C G G A C-3Sense oligos 5-A T G G C G G A C G A G G A G C-333Inhibition of human PDCD5 protein through antisense oligonucleotide treatment34In
28、hibition of Apoptosis triggered by VP16 in Jurkat cells by antisense oligonucleotide to PDCD5 2000020406080050010001500Oligo concentration(nM)apoptosis%sense oligoantisense oligocontrol oligo35MAIN APOPTOSIS PATHWAYS 36Caspase activation by proteolytic cleavage37Antisense oligonucleotide to PDCD5 in
29、hibit Caspase-3 Activity in dose-dependent mannerantisensesensecontrl0.000.400.801.20050010002000Oligo Concentration (nM)Activity %150038Antisense oligonucleotide to PDCD5 inhibit Caspase-3 Activation1. No oligo, VP16-2. No oligo, VP16+3.sense oligo, VP16+4. Control oligo, VP16+5. Antisense oligo, V
30、P16+39Antisense oligonucleotide to PDCD5 doesnt inhibit activation of pro-caspase-91. No oligo, VP16+ 2.sense oligo,VP16+3.antisense oligo, VP16+4. Control oligo, VP16+ 40The targeting sequences of PDCD5 siRNAs siPDCD5-1siPDCD5-2siPDCD5-3siPDCD5-441The effect of PDCD5 siRNA pGC-Non-silencingpGC-siPD
31、CD5A.Non-silencing siRNAsiPDCD5 B.C. 42siPDCD5 attenuates cell apoptosis induced by Bax overexpression43siPDCD5 reduces procaspase-3 cleavage and caspase-3 activityLinnan Chen et al:Apoptosis. 2006, 11(1):101-11144分子机制研究分子机制研究nPulldown 、Co-IP？、ELISA实验证明PDCD5结合Caspase-3，促进Caspase-3的稳定性.blank2136 prot
32、einCPP32-25CPP32-50CPP32-100CPP32-200CPP32-3000.000.100.200.300.400.50OD490PDCD5- PDCD5+ELISAforPDCD5-Caspase3interaction45PDCD5对对caspase-3 稳定性的影响稳定性的影响(in vitro)46n德国Stelzl等2005年利用规模化酵母双杂交发现PDCD5结合HTATIP（组蛋白乙酰转移酶, TIP60）、EEF1（翻译延伸因子）、RIF1（酵母端粒蛋白同源分子）、ACP5（酸性磷酸酶）n加拿大Ewing等2007年利用规模化质谱分析发现PDCD5结合VHL（
33、抑癌基因）和GC20（可能的翻译起始因子）47n本实验室利用多指标证明PDCD5结合TIP60，促进组蛋白乙酰化 （Xu LJ et al:Neoplasia, 2009, 4:345-354）48Possible mechanism for the Functions of PDCD5 in Apoptosis49PDCD5VHLActive caspase-3Nuclear translocationTIP60HistoneP53ApoptosisAcetylation?AcetylationPDCD5PDCD5可能的分子作用机制可能的分子作用机制50PDCD5PDCD5从基础到临床从基础
34、到临床n在疾病时情况下的是否表达异常？n遗传变异是否影响疾病易感性？n有无临床诊断价值？n是否有治疗价值？51Expression of PDCD5 mRNA in different human tissues52PDCD5PDCD5在肿瘤中的下调表达在肿瘤中的下调表达 1 1。肝癌（。肝癌（PNASPNAS，中国普通外科杂志中国普通外科杂志） 2 2。乳腺癌（乳腺癌（NEJMNEJM）3 3。白血病（北医学报，白血病（北医学报，Leukemia Leukemia ResRes）4 4。子宫颈癌（北医学报）子宫颈癌（北医学报）5 5。口腔鳞癌（北医学报）。口腔鳞癌（北医学报）6 6。卵巢上皮
35、癌（中国妇产科临床杂志）。卵巢上皮癌（中国妇产科临床杂志）7 7。甲状腺乳头状癌（中华内科杂志）。甲状腺乳头状癌（中华内科杂志）8 8。银屑病（中华皮肤科杂志）。银屑病（中华皮肤科杂志）9 9。胃癌，。胃癌，预后相关预后相关（ApoptosisApoptosis）1010。肺癌（肺癌（J J ClinClin OncolOncol ）11.11.肾透明细胞癌，肾透明细胞癌，预后相关预后相关（南方医科大学学报）（南方医科大学学报）1212。脑星型胶质瘤（。脑星型胶质瘤（OncolOncol Rep Rep）1313。多发性骨髓瘤（中南大学学报）。多发性骨髓瘤（中南大学学报）14.14.骨肉瘤（骨
36、肉瘤（ApoptosisApoptosis），），预后相关预后相关（J J SurgSurg OncolOncol）15.15.前列腺癌（前列腺癌（Chin Med Chin Med SciSci J J）53PDCD5PDCD5的表达与肾癌预后相关的表达与肾癌预后相关南方医科大学学报，南方医科大学学报，20062006，26(9)26(9)：1316-13181316-1318 54PDCD5PDCD5的表达与胃癌预后相关的表达与胃癌预后相关Apoptosis, 2006, 11(6):993-1001Apoptosis, 2006, 11(6):993-100155PDCD5PDCD5的表
37、达与骨肉瘤预后相关的表达与骨肉瘤预后相关(J (J SurgSurg OncolOncol. 2010 Sep 24. . 2010 Sep 24. EpubEpub ahead of print) ahead of print)56n上调表达上调表达1。系统性红斑狼疮（中华风湿病学杂志）2。老年性白内障（眼科研究）3。骨关节炎（Acta Pharmacol Sin）4。桥本病甲状腺（中华内分泌代谢杂志）5。多囊卵巢综合征（北医学报）57PDCD5 PDCD5 启动子区的功能性启动子区的功能性SNPSNP 本实验室首次发现在PDCD5启动子区存在2个连锁不平衡的SNP：n-11G/-27A o
38、r -11A/-27Gn前者比后者明显高表达PDCD5n白血病患者的杂合子频率明显高于正常人Xi Ma, et al:Clin.Cancer.Res. 2005, 11:859258PDCD5 5PDCD5 5调控区两个新调控区两个新SNPSNP的发现的发现nSNPs的筛选：45个样本直接测序（-11位和-27位同时出现SNP）59 PDCD5 SNPSNP在在HeLaHeLa细胞的启动子活性细胞的启动子活性60PDCD5 SNPSNP在在HeLaHeLa细胞凋亡的启动子活性细胞凋亡的启动子活性HeLa细胞细胞 撤血清诱导凋亡撤血清诱导凋亡61PDCD5PDCD5启动子区启动子区SNPSNP的
39、的CMLCML基因型频率基因型频率Heterozygous ratio: 25.58% 、11.8562PDCD5 SNPs PDCD5 SNPs 在在AMLAML患者中的研究患者中的研究63RQ-PCRRQ-PCR检测不同基因型检测不同基因型CMLCML患者患者PDCD5PDCD5的的mRNAmRNA水平水平6465nSpinola等通过SNPs全基因组扫描技术，发现PDCD5基因上游35kb处的SNP与肺癌发病相关，GG或CG基因型携带者肺癌发病风险升高；肺腺癌组织中PDCD5的mRNA比正常肺组织低2.4倍。超表达该基因的人NCI-H520细胞系克隆形成能力明显下降。作者认为PDCD5可
40、能是新的抑癌基因（J Clin Oncol，2006）66PDCD5PDCD5在肿瘤治疗中的应用在肿瘤治疗中的应用n根据肿瘤治疗现状来看，化学药物治疗仍然是目前主要的治疗手段之一，但由于化疗药的毒性作用，限制了化疗的应用。n化疗增敏剂可在亚适剂量化学药物剂量下，提高化学药物疗效，降低其对正常组织细胞毒性，产生抗肿瘤细胞的协同效应，具有重要的临床意义。67PDCD5PDCD5腺病毒在裸鼠体内对腺病毒在裸鼠体内对K562K562细胞的化疗增敏效应细胞的化疗增敏效应（Apoptosis. 2008, 13(5):641-648Apoptosis. 2008, 13(5):641-648 ）68裸鼠瘤
41、内注射裸鼠瘤内注射PDCD5重组蛋白重组蛋白增增增增加加加加K562K562细胞对细胞对细胞对细胞对IDRIDR的敏感性的敏感性的敏感性的敏感性。单纯化疗药单纯化疗药IDR的抑的抑瘤率达瘤率达60.27%时，时，IDR联合联合PDCD5抑抑瘤率可达瘤率可达92.03 (Lin Shi et al: BBRC, 2010, 396:224)69裸鼠腹腔注射裸鼠腹腔注射PDCD5重组蛋白增加重组蛋白增加K562细胞对细胞对IDR的敏感性：平均瘤块的敏感性：平均瘤块57.7mm3开始治疗开始治疗70重组重组PDCD5PDCD5腹腔注射联合腹腔注射联合IDRIDR治疗实验各组小鼠移植瘤重量治疗实验各组
42、小鼠移植瘤重量 *同单独化疗药相比，差异具有统计学意义，同单独化疗药相比，差异具有统计学意义， P0.05；*同单独化疗药相比，差异同单独化疗药相比，差异具有统计学意义，具有统计学意义， P0.001；同伊马替尼治疗相比，差异具有统计学意义，；同伊马替尼治疗相比，差异具有统计学意义，P0.05；同伊马替尼治疗相比，差异具有统计学意义，；同伊马替尼治疗相比，差异具有统计学意义，P0.01 （肿瘤平均体积达到（肿瘤平均体积达到140 mm140 mm3 3开始治疗）开始治疗） 71重组重组PDCD5PDCD5对骨肉瘤的化疗增敏作用研究对骨肉瘤的化疗增敏作用研究 *p0.01 vs. control
43、 *p0.001 vs. control #p0.01 vs. cisplatin Cisplatin: 2mg/kgPDCD5: 50mg/kgBALB/c nude mice established s.c. chondrosarcoma tumors (approximately 4mm2, day 3) were intraperitoneally treated with indicated reagents. (Chen C et al:Apoptosis. 2010 Jul;15(7):805-13)72PDCD5PDCD5作为重组蛋白药物开发的主要依据作为重组蛋白药物开发的主要
44、依据nPDCD5重组蛋白具有穿膜效应进入细胞内nPDCD5在大部分肿瘤中低表达nPDCD5可促进而不是诱导肿瘤细胞凋亡n裸鼠体内试验证明PDCD5重组蛋白的肿瘤化疗增敏效应nPDCD5的作用靶点是目前国际肿瘤治疗研究的热点之一nPDCD5蛋白结构简单,无二硫键,原核表达具备活性,适合大规模表达纯化 nPDCD5重组蛋白具有潜在药物基因组学应用价值 73PDCD5PDCD5原核表达原核表达真核基因转染真核基因转染抑制内源性表达抑制内源性表达反义寡核苷酸反义寡核苷酸RNAiRNAi单克隆抗体单克隆抗体重组蛋白功能重组蛋白功能基因调控研究基因调控研究细胞内定位细胞内定位结合蛋白结合蛋白超表达活性超表
45、达活性功能性功能性SNPSNPPTDPTD功能功能疾病易感性疾病易感性腺病毒表达腺病毒表达动物实验动物实验临床标本检测临床标本检测PDCD5PDCD5功能研究技术路线功能研究技术路线动物实验动物实验74nPDCD5PDCD5为具有自主知识产权的为具有自主知识产权的新结构、新机制、新结构、新机制、新靶点新靶点的候选基因工程药物。的候选基因工程药物。PDCD5PDCD5的基因克隆、的基因克隆、功能研究到发现新药开发用途，全部在国内实验功能研究到发现新药开发用途，全部在国内实验室完成。已申报专利室完成。已申报专利3项，其中项，其中2项已授权，申请项已授权，申请了了1项项PCTPCT国际专利。国际专利
46、。n本中心发表关于本中心发表关于PDCD5PDCD5的的SCISCI论文论文1313篇，包括篇，包括JBCJBC、JCSJCS、ClinClin Cancer Cancer ResRes、NeoplasiaNeoplasia等，他引的等，他引的SCISCI论文论文100100余篇，国内杂志有关余篇，国内杂志有关PDCD5PDCD5的论文的论文7070余篇。国际所有数据库关于余篇。国际所有数据库关于PDCD5PDCD5的介绍均引自的介绍均引自本中心原始论文。本中心原始论文。（http:/ 刘红涛，张颖妹，陈英玉，孙荣华，王莺、李现亭、陈丽娜、马曦、赵红珊、张培、阮国瑞、狄春辉，宋泉声，范慧，王玉刚，王应，韩文玲，王露、许兰俊、娄雅欣、史琳、王艳芳、克晓燕、陈长宝、马庆军等76下周三的分子免疫课考场安排事宜n今年选课学生共200人，基础医学院和北大医院的学生在9教，其他在4教；n考试时间为2010年10月29日下午2：30-4：3077
