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1、第一节第一节 菌种概述菌种概述第二节第二节 菌种生产设备菌种生产设备 第三节第三节 菌种培养基菌种培养基第四节第四节 接种接种 第五节第五节 菌种培养与质量鉴定菌种培养与质量鉴定第六节第六节 菌种保藏与复壮菌种保藏与复壮 第四章第四章 食用菌菌种生产食用菌菌种生产一、菌种概念菌种概念二、菌种类型菌种类型三、菌种生产程序菌种生产程序返回本章第一节第一节 菌种概述菌种概述一一、菌种概念菌种概念菌种担孢子或子囊孢子担孢子或子囊孢子野生扩大繁殖后的扩大繁殖后的纯次生菌丝体纯次生菌丝体栽培来历野生菌驯化野生菌驯化原菌株改良原菌株改良生物技术创生物技术创新新优良菌株扩大繁殖用于生产实行纯培养实行纯培养不含
2、任何杂菌不含任何杂菌基要本求返回本节二、菌种类型二、菌种类型一级菌种一级菌种二级菌种二级菌种三级菌种三级菌种级别按按保藏用种实验用种生产用种目的状态：状态：固体菌种、液体菌种固体菌种、液体菌种返回本节（一）级别不同的菌种（一）级别不同的菌种1.一级种（母种）一级种（母种）用分离法首次得到的用分离法首次得到的纯次生纯次生菌丝体菌丝体 概念概况培养环境 试管、斜面培养基试管、斜面培养基用途 再生母种再生母种繁殖原种保藏用种菌丝弱而少、不可直接栽培特点返回本节返回本节2.二级种（原种）二级种（原种）将母种扩大至粗放培养基上将母种扩大至粗放培养基上形成的菌种形成的菌种概念概况培养环境菌丝较多而壮、适应
3、性较强特点用途 扩大栽培种扩大栽培种大口瓶、较粗放的大口瓶、较粗放的液体或固体培养基液体或固体培养基返回本节返回本节3.三级种（栽培种）三级种（栽培种）将原种扩大至粗放培养基上将原种扩大至粗放培养基上形成的菌种形成的菌种概念概况培养环境菌丝多而壮、适应性强菌丝多而壮、适应性强特点用途栽培生产栽培生产菌种袋、较粗放菌种袋、较粗放固体培养基固体培养基返回本节返回本节生产总过程生产总过程母种母种栽培种栽培种栽培栽培原种原种子实体子实体返回本节返回本节（二）状态不同的菌种（二）状态不同的菌种用固体基质培养的菌种用固体基质培养的菌种1.固体固体 菌种菌种概念概念特点特点设备、工艺简单设备、工艺简单菌龄长
4、而不一菌龄长而不一发酵率较低发酵率较低用液体基质培养的菌种用液体基质培养的菌种2.液体液体 菌种菌种概念概念特点特点设备、工艺较复杂设备、工艺较复杂菌龄短而一致菌龄短而一致发酵率高发酵率高易老化和自溶易老化和自溶返回本节生长势的区别液体菌种固体菌种返回本节返回本节三、菌种生产程序三、菌种生产程序四大步骤四大步骤制培养基制培养基灭菌灭菌培养培养接种接种返回本节一、制培养基设备一、制培养基设备二、灭菌设备二、灭菌设备三、接种设备三、接种设备四、培养设备四、培养设备五、保藏设备五、保藏设备六、菌种厂布局六、菌种厂布局返回本章第二节第二节 主要生产设备主要生产设备一、制培养基设备一、制培养基设备（一）
5、原料处理、配制设备（一）原料处理、配制设备切片粉碎两用机切片粉碎两用机铡草机粉碎机返回本节拌料机拌料机返回本节装袋机装袋机（二）培养基分装设备（二）培养基分装设备返回本节装瓶机挖瓶机返回本节菌种袋菌种袋颈圈颈圈返回本节菌种瓶菌种瓶返回本节二、灭菌设备二、灭菌设备高高压压锅锅外锅：装水外锅：装水内锅：装物（有壁管）内锅：装物（有壁管）锅盖锅盖安全阀安全阀排气阀排气阀压力表压力表返回本节第4章食用菌菌种生产第一节菌种概述第二节主要生产设备第三节菌种培养基第四节接种第五节菌种培养及质量的鉴定第六节菌种保藏及复壮返回本节常压返回本节密闭性好密闭性好要要求求1.接接 种种 箱箱用用法法清洁、放物品清洁、
6、放物品 消毒消毒喷雾喷雾熏蒸熏蒸紫外灯紫外灯特特点点简易、利移动简易、利移动对人体低害对人体低害效果好、工效低效果好、工效低 三、接种设备三、接种设备（一）接种环境及器具（一）接种环境及器具返回本节观察窗观察窗紫外灯紫外灯 操作孔操作孔接种箱接种箱返回本节2.接种室接种室缓冲间：缓冲间：23m2接种间：接种间：56m2面积面积79m2高高2.22.5m要求要求6个面平滑个面平滑两门错开、平拉式两门错开、平拉式顶装紫外灯顶装紫外灯清洁清洁物品放缓冲间物品放缓冲间消毒消毒 移物至接种间移物至接种间 喷消毒液喷消毒液 10min 后接种后接种消毒液清洁消毒液清洁使用使用返回本节返回本节使一定工作区达
7、到相对无菌、无尘状态的电器使一定工作区达到相对无菌、无尘状态的电器3.超净工作台超净工作台双人双人单单人人返回本节要求要求:前端为导热性好的金属材料前端为导热性好的金属材料刀刀匙匙钩钩铲铲镊镊耙耙针针环环接种接种4.接种工具接种工具返回本节固固体体菌菌种种接接种种枪枪液体菌种接种枪液体菌种接种枪返回本节四、菌种培养没备四、菌种培养没备1.培养箱培养箱培养少量菌种的恒温电器（培养少量菌种的恒温电器（2040）返回本节2.培养室培养室培养大量菌种的恒温房培养大量菌种的恒温房要求要求光线暗光线暗密闭好、通风性强密闭好、通风性强能升温、降温（空调机）能升温、降温（空调机）有培养架有培养架返回本节贮贮藏
8、藏室室远离污染源低温（48）干燥、通风、遮光用前要严格消毒杀虫地面常撒石灰粉保藏原种、栽培种保藏原种、栽培种：五、菌种保藏设备五、菌种保藏设备保藏母种保藏母种：冰箱（4）左右返回本节六、菌种厂的布局六、菌种厂的布局根据菌种生产流程合理设置根据菌种生产流程合理设置仓库仓库配料室配料室灭菌室灭菌室接种室接种室培养室培养室办公室办公室栽培棚栽培棚门门口口晒料场返回本节一、概述一、概述（一）概念及要求（一）概念及要求（二）培养基的类型（二）培养基的类型二、各级菌种的培养基二、各级菌种的培养基（一）母种培养基（一）母种培养基（二（二)原种、栽培中培养基原种、栽培中培养基三、培养基的灭菌三、培养基的灭菌返
9、回本章第三节第三节 菌种培养基菌种培养基一、培养基的概述一、培养基的概述（一）概念及要求（一）概念及要求概念概念人工配制的适于菌种生长人工配制的适于菌种生长的营养基质的营养基质要要求求营养种类、比例、水分、营养种类、比例、水分、pH适宜；适宜； 保持无菌状态。保持无菌状态。返回本节类类型型天然：天然有机物天然：天然有机物合成：已知成分合成：已知成分的化学药品的化学药品半合成：半合成：？原料原料来源来源状态状态液体：营养液液体：营养液固体固体固体：天然固体原料固体：天然固体原料固化：加固化：加1.5%2%琼脂琼脂表面表面形状形状斜面培养基斜面培养基平板培养基平板培养基（二）培养基的类型二）培养基
10、的类型返回本节粉状条状属天然植物多糖融点96以上凝点40以下冷水中不溶透明度好、粘着力强不被微生物分解利用特性返回本节返回本节 二、各级菌种的培养基二、各级菌种的培养基（一）母种培养基（一）母种培养基1.通用配方通用配方2.配制配制过程过程PDA马铃薯马铃薯200g、葡萄糖、葡萄糖20g琼脂琼脂1520g、水、水1000m1返回本节煮沸煮沸20min，取定量滤液，取定量滤液制马铃制马铃薯滤液薯滤液滤液沸时加入，融后加余料滤液沸时加入，融后加余料融化琼脂融化琼脂调解调解pH勿污管口，控制装量勿污管口，控制装量分装试管分装试管准备灭菌准备灭菌扎捆扎捆10%NaOH或或HCL返回本节返回本节（二）原
11、种、栽培种培养基（二）原种、栽培种培养基主料主料棉籽壳棉籽壳8787，麦麸，麦麸1010辅料料白糖白糖1 1，石灰，石灰1 1，过磷酸磷酸钙1 1配方（配方（%）棉壳、麦麸干混棉壳、麦麸干混余料溶于水后浇入主料余料溶于水后浇入主料清水翻拌至含水量清水翻拌至含水量配制配制1.种类种类(1)棉籽壳培养基棉籽壳培养基返回本节主料主料 麦粒、玉米粒等麦粒、玉米粒等98.5%98.5%辅料料 石膏粉石膏粉1%,1%,碳酸碳酸钙0.5%0.5%调调pH与分装与分装pH：一般为：一般为8.0左右左右原种培养基装大口瓶原种培养基装大口瓶栽培种培养基装菌种袋栽培种培养基装菌种袋配方（配方（%）颗粒洗净，颗粒洗净
12、，1%石灰水泡胀石灰水泡胀文火煮沸文火煮沸1520min晾至无明水后拌入余料晾至无明水后拌入余料配制配制(2)颗粒培养基颗粒培养基返回本节返回本节栽培种的装袋返回本节三、培养基的灭菌三、培养基的灭菌（一）母种培养基的灭菌一）母种培养基的灭菌无菌检验无菌检验约约30条件下条件下空白培养空白培养23天天灭菌与摆斜面灭菌与摆斜面摆斜面摆斜面1kg/cm2(103kpa、121）2030min返回本节母基灭菌与摆斜面返回本节（二）原种、栽培种培养基的灭菌（二）原种、栽培种培养基的灭菌高压灭菌高压灭菌1.5kg/cm1.5kg/cm2 2（152kpa152kpa、128.1128.1）灭菌灭菌12h
13、返回本节常压灭菌常压灭菌100100灭菌灭菌1010h左右左右再闷再闷12h12h要求要求攻头、控中、保尾攻头、控中、保尾 返回本节一、无菌操作一、无菌操作二、母种的接种二、母种的接种(一）分离法一）分离法1.组织分离组织分离2.孢子分离孢子分离（二）转管法（二）转管法三、原种、栽培种的接种三、原种、栽培种的接种返回本章第四节第四节 菌种的接种菌种的接种概念：菌种移至新培养基上的过程概念：菌种移至新培养基上的过程关键：无菌操作关键：无菌操作接种接种在严格消毒灭菌条件下进行的操作在严格消毒灭菌条件下进行的操作概念概念一、无菌操作一、无菌操作接种环境消毒灭菌接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手酒精棉球
14、消毒双手开启的管口、瓶口靠近灯焰开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方拔出的棉塞勿触及任何地方动作快，接种时间勿太长动作快，接种时间勿太长要点要点必必备备返回本节u特点特点简便，易成功简便，易成功保持原菌种性状保持原菌种性状重复多易退化重复多易退化不适于耳类不适于耳类1.组织分离组织分离组织组织PDA次生菌丝次生菌丝培养培养（一）分离法（一）分离法u步骤步骤返回本节二、母种的接种二、母种的接种步骤步骤选种菇选种菇外观典型、大小适中、无病虫害、外观典型、大小适中、无病虫害、八成熟、第八成熟、第12茬的子实体茬的子实体取接取接组织组织纵剖（撕）菇体纵剖（撕）菇体尖头镊取柄盖交界处绿豆粒大
15、的组织尖头镊取柄盖交界处绿豆粒大的组织放入新斜面中部放入新斜面中部种菇种菇消毒消毒用燃烧的酒精棉球迅速擦拭用燃烧的酒精棉球迅速擦拭返回本节2.孢子分离孢子分离(有性繁殖）有性繁殖）孢子孢子特点特点菌龄小菌龄小生命力强生命力强变异率高变异率高孢孢 子子分离法分离法难度较大难度较大单孢分离单孢分离多孢分离多孢分离较简易较简易单孢分离单孢分离的菌落的菌落返回本节多孢分离多孢分离概念概念使许多孢子在同一培养基上，使许多孢子在同一培养基上，萌发后自由交配成次生菌丝的方法萌发后自由交配成次生菌丝的方法步骤步骤种菇种菇消毒消毒采收孢子采收孢子接种孢子接种孢子整菇插种法整菇插种法钩悬法钩悬法孢子印法孢子印法返
16、回本节1.种菇种菇 消毒消毒菌柄去菌柄去2/3苞被苞被有：有：75%酒精棉球擦酒精棉球擦0.25%新洁尔灭浸23min无菌纱布吸干表面水分无菌纱布吸干表面水分 无无返回本节2.采收孢子采收孢子整菇整菇插种法插种法种菇插在孢子收集器中种菇插在孢子收集器中使孢子散落于培养皿内的方法使孢子散落于培养皿内的方法用用前前灭灭菌菌25、24h现孢子粉现孢子粉取出分离材料取出分离材料培养皿盖严培养皿盖严返回本节钩悬法钩悬法25、24h现孢子粉现孢子粉取出分离材料取出分离材料返回本节孢子印法孢子印法返回本节3.接种孢子接种孢子用接种环用接种环蘸孢子液或孢子粉蘸孢子液或孢子粉涂布于平板上涂布于平板上返回本节（二
17、）转管法（二）转管法注意注意种块勿太大种块勿太大原老种块勿再接入原老种块勿再接入传代次数勿太多传代次数勿太多将母种移入新的过程将母种移入新的过程概念概念过程过程接种环取绿豆粒大母种接种环取绿豆粒大母种移入新斜面中部移入新斜面中部返回本节三、原种、栽培种的接种三、原种、栽培种的接种接接原原种种用接种耙取蚕豆大母种用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上放于瓶中料面上返回本节接接栽栽培培种种用接种匙（镊、铲）取枣大原种用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上放于袋的两端或瓶中料面上表面老菌丝及表面老菌丝及老种块勿接入老种块勿接入返回本节栽培种接种返回本节一、菌种培养一、菌种培养（一）培养条件
18、（一）培养条件（二）技术环节（二）技术环节二、菌种质量鉴定二、菌种质量鉴定（一）母种质量鉴定（一）母种质量鉴定（二）原种和栽培种质量鉴定（二）原种和栽培种质量鉴定返回本章第五节第五节 菌种培养与质量鉴定菌种培养与质量鉴定(一一)培养条件培养条件场所清洁场所清洁空气清新空气清新光线暗光线暗空气湿度空气湿度60%70%温度约温度约25一、菌种培养一、菌种培养返回本节（二）技术环节（二）技术环节1.母种母种培养培养及时挑拣污染管及时挑拣污染管分离的母种要纯化分离的母种要纯化出菇试验出菇试验 使使用用控制菌龄（即将长满斜面）控制菌龄（即将长满斜面）培养时间培养时间510天天2.原种原种栽培种栽培种的培
19、养的培养培养时间：约培养时间：约30天天勿堆放过挤勿堆放过挤及时挑拣污染瓶（袋）及时挑拣污染瓶（袋）栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧控制菌龄（菌丝长满后控制菌龄（菌丝长满后710天使用）天使用）返回本节返回本节刺孔点刺孔点返回本节返回本节二、菌种质量的鉴定二、菌种质量的鉴定形态特征、生理特性、形态特征、生理特性、栽培性状、经济效益等栽培性状、经济效益等鉴定鉴定项目项目（一）母种质量的鉴定（一）母种质量的鉴定、菌丝白、整齐、粗壮、菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快等有弹性、萌发快等1.外观外观好好差差丝干燥、收缩、自溶丝干燥、收缩、自溶产生红褐色液体等产生红褐色液体等返回
20、本节退化母种退化母种好母种好母种返回本节2.鉴定鉴定耐干湿性试验耐干湿性试验接入母种接入母种正常生长正常生长原种原种培养基培养基含水量含水量50%70%耐高温性试验耐高温性试验仍正常生长仍正常生长适温培养适温培养7天天 3035 锻炼锻炼24h 再适温培养再适温培养返回本节出菇试验出菇试验栽培栽培出菇快出菇快产量高产量高品质好品质好抗逆性强抗逆性强返回本节（二）原种、栽培种质量的鉴定（二）原种、栽培种质量的鉴定具有具有菌丝白（菌丝白（符合该菌种的颜色符合该菌种的颜色）均匀、粗壮、有菇香味均匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快接种后萌发快菌种种类菌种种类品种名称品种名称菌种级别菌种级别代代 时时生产厂
21、家生产厂家接种日期接种日期用于生产用于生产没有没有无杂色、无黄水、无结皮、无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象无原基、无干缩脱壁等现象返回本节产生原基产生原基返回本节黄黄水水污染污染返回本节一、菌种保藏一、菌种保藏 （一）保藏目的及原理（一）保藏目的及原理 （二）常用保藏法（二）常用保藏法 （三）保藏注意（三）保藏注意二、菌种复壮二、菌种复壮 (一）菌种的衰退一）菌种的衰退 （二）复壮方法（二）复壮方法 （三）防衰措施（三）防衰措施返回本章第六节第六节 菌种保藏与复壮菌种保藏与复壮一、菌种保藏一、菌种保藏（一）保藏目的及原理（一）保藏目的及原理目的目的原理原理创造不利于菌种生长的一
22、切条件，创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。使其代谢处于休眠状态。使菌种使菌种不生长不生长不死亡不死亡不污染不污染不降低或不丧失其优良性不降低或不丧失其优良性以尽量延长使用时间以尽量延长使用时间返回本节低温低温干燥干燥无氧无氧缺营养缺营养不利不利条件条件返回本节（二）常用保藏法（二）常用保藏法以母种形式保藏以母种形式保藏特点特点简便简便保藏时间短保藏时间短易污染及退化易污染及退化不适于草菇等菌类不适于草菇等菌类1.斜面低温法斜面低温法斜面菌种置，斜面菌种置，46冰箱中（冰箱中（36个月）个月）返回本节返回本节2.2.矿油保藏法矿油保藏法无菌检验无菌检验 ？注入种管注入种管淹没斜
23、面约淹没斜面约1cm矿油矿油处理处理灭菌：灭菌：152kpa、30min去水：去水：4050烘至无色透明烘至无色透明 口堵胶塞口堵胶塞用时转管再转管用时转管再转管返回本节返回本节3.3.自然基质保藏法自然基质保藏法基质的处理基质的处理麦粒浸透、煮熟麦粒浸透、煮熟麸皮拌湿麸皮拌湿装管装管防衰老防衰老保藏时间长保藏时间长转接后生长旺转接后生长旺易污染，灭菌要彻底易污染，灭菌要彻底特点特点灭菌灭菌接种接种培养培养干燥器去水干燥器去水返回本节（三）保藏注意（三）保藏注意u用保种培养基用保种培养基u及时保藏（菌丝占斜面及时保藏（菌丝占斜面2/3）u最好换胶塞最好换胶塞u用时活化用时活化u严防棉塞受潮严防
24、棉塞受潮返回本节二、菌种的复壮二、菌种的复壮概念概念 确保或恢复菌种优良性能的措施确保或恢复菌种优良性能的措施 （一）菌种的衰退（一）菌种的衰退形态改变、生长慢、形态改变、生长慢、抗逆性差、产量及质量下降抗逆性差、产量及质量下降表现表现根源根源内因内因 菌种的遗传物质发生了负变菌种的遗传物质发生了负变外因外因 传代过多，条件不适宜传代过多，条件不适宜返回本节（二）复壮法（二）复壮法1.繁殖交替法繁殖交替法2. 经常改变培养条件经常改变培养条件 3. 转管时只取尖端菌丝转管时只取尖端菌丝组织分离组织分离母种母种孢子分离孢子分离再生再生母种母种栽培栽培子实体子实体返回本节（三）防衰措施（三）防衰措
25、施保证菌种的纯培养保证菌种的纯培养严格控制传代次数严格控制传代次数用适宜菌龄的菌种用适宜菌龄的菌种用适宜培养条件及保藏条件用适宜培养条件及保藏条件返回本节本章主要内容本章主要内容1.菌种类型（母种、原种、栽培种的作用）菌种类型（母种、原种、栽培种的作用）2.高压锅、接种箱、接种室的构造及使用高压锅、接种箱、接种室的构造及使用3.培养基（培养基（PDA、颗粒培养基的配制方法）、颗粒培养基的配制方法）4.接种（无菌操作、各级菌种的接种法）接种（无菌操作、各级菌种的接种法）5.菌种保藏（目的与原理、菌种保藏（目的与原理、3种方法）种方法）6.菌种复壮（简易复壮法、防衰措施）菌种复壮（简易复壮法、防衰
26、措施）返回本节1.设计菌种厂的依据是什么？设计菌种厂的依据是什么？2. 怎样防止菌种的衰退？怎样防止菌种的衰退？3.怎样判断菌种的衰退？怎样判断菌种的衰退？4.自然基质保藏法是怎样进行的？有何优缺点？自然基质保藏法是怎样进行的？有何优缺点？1.黄毅黄毅.食用菌栽培食用菌栽培. 北京：高等教育出社，北京：高等教育出社，19982.中国食用菌菌种网中国食用菌菌种网作业题作业题1.栽培时为何不用母种作菌种？栽培时为何不用母种作菌种？2.母种扩成原种的目的是什么？母种扩成原种的目的是什么？3.怎样使用接种箱？怎样使用接种箱？4.菌种的基本要求是什么？菌种的基本要求是什么？思考、讨论题思考、讨论题课外学
27、习资源课外学习资源返回本节本章参考资料本章参考资料1.中国食用菌杂志中国食用菌杂志. 云南：中国食用菌编辑部云南：中国食用菌编辑部 2004.16， 2005.162.杨新美杨新美.食用菌栽培学食用菌栽培学.第第6章章.北京：中国农业出版社，北京：中国农业出版社，19963.张金霞张金霞.食用菌生产技术食用菌生产技术.第第48章章.北京：中国标准出版社，北京：中国标准出版社，19994.黄毅黄毅.食用菌栽培食用菌栽培.第二版第二版.上册上册.第第4章章.北京：高等教育出版北京：高等教育出版社，社，19985.张松张松.食用菌学食用菌学.第第6章章.广州：华南理工大学出版社，广州：华南理工大学出版社，20006.中国食用菌菌种网中国食用菌菌种网 7.中国食用菌信息网中国食用菌信息网 http:/返回本节返回本章
