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1、荧光光谱仪荧光光谱仪主要内容主要内容n n荧光光谱仪的工作原理荧光光谱仪的工作原理n n荧光光谱仪的结构荧光光谱仪的结构荧光产生的基本原理荧光产生的基本原理n n荧光：荧光：某些物质吸收光能量后，可某些物质吸收光能量后，可发射发射波长波长与激发光波长相同或不同的光，当激发光源与激发光波长相同或不同的光，当激发光源停止照射试样，再发射过程立即停止，这种停止照射试样，再发射过程立即停止，这种再发射的光称为荧光（再发射的光称为荧光（fluorescencefluorescence）。）。n n荧光分析法荧光分析法：通过测定物质分子产生的荧光：通过测定物质分子产生的荧光强度进行物质的定性与定量分析的方
2、法。强度进行物质的定性与定量分析的方法。荧光光谱法特点荧光光谱法特点灵敏度高；灵敏度高；用量少；用量少；选择好；选择好；应用范围不如吸收光谱法广；应用范围不如吸收光谱法广；对温度、对温度、pH值等因素变化比较敏感；值等因素变化比较敏感；荧光分析的基本原理荧光分析的基本原理 1.荧光的激发光谱：荧光的激发光谱：固定测量波长（选最大荧光固定测量波长（选最大荧光/发射波长），化合物发射的荧光发射波长），化合物发射的荧光(或磷光或磷光)强强度与照射光波长的关系曲线。度与照射光波长的关系曲线。2.荧光光谱荧光光谱 ：固定激发光波长（选最大激发固定激发光波长（选最大激发/吸吸收波长），收波长）， 化合物发
3、射的荧光化合物发射的荧光(或磷光或磷光)强度强度与发射光波长关系曲线。与发射光波长关系曲线。3. 最大激发波长最大激发波长(ex)和最大荧光波长和最大荧光波长(em)exem菲菲物质分子结构与荧光的关系物质分子结构与荧光的关系具有共轭双键体系的分子具有共轭双键体系的分子化合物化合物化合物化合物（环（环（环（环己烷中）己烷中）己烷中）己烷中）结结结结 构构构构荧光荧光荧光荧光效率效率效率效率 荧光波长荧光波长荧光波长荧光波长（nmnm）苯苯苯苯0.070.07283283联苯联苯联苯联苯0.180.18316316对对对对- -联三苯联三苯联三苯联三苯0.930.93342342物质分子结构与荧
4、光的关系物质分子结构与荧光的关系具有刚性平面结构具有刚性平面结构物质分子结构与荧光的关系物质分子结构与荧光的关系具有最低的单线电子激发态具有最低的单线电子激发态S S1 1为为- 型。型。若取代基团为给电子取代基，荧光强度增加若取代基团为给电子取代基，荧光强度增加荧光光谱仪的工作原理荧光光谱仪的工作原理n n对于某一荧光物质的稀溶液，在激发光的对于某一荧光物质的稀溶液，在激发光的频率、强度以及液层厚度不变时，此荧光频率、强度以及液层厚度不变时，此荧光物质所发出的荧光强度与溶液的浓度成正物质所发出的荧光强度与溶液的浓度成正比。由此可以通过测定荧光强度来求出该比。由此可以通过测定荧光强度来求出该物
5、质的含量。物质的含量。n n荧光分析法所测量的是待测物质所发射的荧光分析法所测量的是待测物质所发射的荧光强弱，它属于发散光谱。荧光强弱，它属于发散光谱。荧光光荧光光谱仪的谱仪的分类分类荧光光谱荧光光谱仪仪荧光光度荧光光度计计 荧光分光光度荧光分光光度计计 区别：单色器色散元件的不同区别：单色器色散元件的不同nFluoscenceFluoscence荧光分光光度计荧光分光光度计FP-6500FP-6500荧光分光光度计荧光分光光度计荧光光谱仪结构荧光光谱仪结构n n激发光源激发光源n n单色器单色器n n样品池样品池n n检测器检测器n n记录显示系统记录显示系统0.208光源光源光源光源激发激
6、发单色器单色器单色器单色器吸收池吸收池吸收池吸收池检测放大系统检测放大系统检测放大系统检测放大系统发射发射单色器单色器单色器单色器荧光光谱仪结构荧光光谱仪结构仪器的使用与维护仪器的使用与维护n n注意事项注意事项n n电源电源电源电源：触发电压、工作电流、稳定性：触发电压、工作电流、稳定性：触发电压、工作电流、稳定性：触发电压、工作电流、稳定性n n光源光源光源光源：启动预热、冷却重启、保持清洁：启动预热、冷却重启、保持清洁：启动预热、冷却重启、保持清洁：启动预热、冷却重启、保持清洁n n单色器单色器单色器单色器：防潮、防尘、防污和防机械损伤：防潮、防尘、防污和防机械损伤：防潮、防尘、防污和防
7、机械损伤：防潮、防尘、防污和防机械损伤n n光电倍增管光电倍增管光电倍增管光电倍增管：避免高压时受到外来光线直射：避免高压时受到外来光线直射：避免高压时受到外来光线直射：避免高压时受到外来光线直射n n样品池样品池样品池样品池：清洗、插放方向、避免摩擦：清洗、插放方向、避免摩擦：清洗、插放方向、避免摩擦：清洗、插放方向、避免摩擦n n个人防护个人防护个人防护个人防护 ： 避免紫外线损伤避免紫外线损伤避免紫外线损伤避免紫外线损伤荧光光谱仪的应用荧光光谱仪的应用JJ常规分析常规分析常规分析常规分析（如定性和定量分析、化学表征、色谱流（如定性和定量分析、化学表征、色谱流（如定性和定量分析、化学表征、
8、色谱流（如定性和定量分析、化学表征、色谱流出物的检测等）；出物的检测等）；出物的检测等）；出物的检测等）；JJ获得分子信息获得分子信息获得分子信息获得分子信息（如测量分子内间距、决定键合平衡、（如测量分子内间距、决定键合平衡、（如测量分子内间距、决定键合平衡、（如测量分子内间距、决定键合平衡、研究结构变化等）；研究结构变化等）；研究结构变化等）；研究结构变化等）；JJ医药研究（医药研究（医药研究（医药研究（如研究膜结构和功能、确定抗体的形态、如研究膜结构和功能、确定抗体的形态、如研究膜结构和功能、确定抗体的形态、如研究膜结构和功能、确定抗体的形态、研究生物分子的异质性、评价药物的相互作用、确研究生物分子的异质性、评价药物的相互作用、确研究生物分子的异质性、评价药物的相互作用、确研究生物分子的异质性、评价药物的相互作用、确定酶的活性和反应、荧光免疫分析、监测体内化学定酶的活性和反应、荧光免疫分析、监测体内化学定酶的活性和反应、荧光免疫分析、监测体内化学定酶的活性和反应、荧光免疫分析、监测体内化学过程等）；过程等）；过程等）；过程等）；JJ环境监测环境监测环境监测环境监测（如水和空气中污染物的鉴别和计量等）。（如水和空气中污染物的鉴别和计量等）。（如水和空气中污染物的鉴别和计量等）。（如水和空气中污染物的鉴别和计量等）。
