色层分离法ppt课件

《色层分离法ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《色层分离法ppt课件（127页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、第六章 色层分别法6.1 6.1 概概 述述6.2 6.2 柱柱层层析析6.3 6.3 纸层纸层析析6.4 6.4 薄薄层层层层析析l色色层分分别法又称法又称层析法或色析法或色谱分分别法，它的最大特点法，它的最大特点是分是分别效率高，能把各种性效率高，能把各种性质及相近的物及相近的物质彼此分彼此分别。现代的色代的色谱分分别技技术就是在此根底上开展而来的。就是在此根底上开展而来的。l色色层分分别最早是由波最早是由波兰植物学家植物学家M茨茨维特提出来的。特提出来的。他在叶他在叶绿素的石油素的石油醚溶液流溶液流经装有碳酸装有碳酸钙的管柱的管柱时，发现碳酸碳酸钙对叶叶绿素中各种色素的吸附才干不同，于素

2、中各种色素的吸附才干不同，于是在管柱中出是在管柱中出现了不同了不同颜色的色色的色谱带，因此称，因此称这种分种分别方法方法为色色层分分别法或色法或色谱分分别法。法。6.1 概 述层析法的开展史年代年代发明者发明者发明的色谱方法或重要应用发明的色谱方法或重要应用1906 Tswett 用碳酸钙作吸附剂分离植物色素。最先提出色谱概念用碳酸钙作吸附剂分离植物色素。最先提出色谱概念 1931 Kuhn, Lederer 用氧化铝和碳酸钙分离用氧化铝和碳酸钙分离a-、b-和和g-胡萝卜素。使色谱法开始为胡萝卜素。使色谱法开始为人们所重视。人们所重视。1938Taylor Uray用离子交换色谱法分离了锂和

3、钾的同位素。用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素。 1941 Martin, Synge 提出色谱塔板理论；发明液提出色谱塔板理论；发明液-液分配色谱；预言了气体可作为流液分配色谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）。动相（即气相色谱）。1952Martin,James 从理论和实践方面完善了气从理论和实践方面完善了气-液分配色谱法。液分配色谱法。 1956Van Deemter提出色谱速率理论，并应用于气相色谱。提出色谱速率理论，并应用于气相色谱。1957基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世。基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世。 1958Golay发明毛细管柱气相色谱。发明毛细管

4、柱气相色谱。1965Giddings 发展了色谱理论，为色谱学的发展奠定了理论基础。发展了色谱理论，为色谱学的发展奠定了理论基础。 1975 Small发明了以离子交换剂为固定相、强电解质为流动相，采用抑制发明了以离子交换剂为固定相、强电解质为流动相，采用抑制型电导检测的新型离子色谱法。型电导检测的新型离子色谱法。1981 Jorgenson创立了毛细管电泳法。创立了毛细管电泳法。层析分别图示层析分别图示 “层析的本析的本质是使一种液体均匀地渗是使一种液体均匀地渗过一个相一个相当当细碎的物碎的物质的柱体，的柱体，这些物些物质经过某种某种过程有程有选择地阻留了液体内的某些地阻留了液体内的某些组分

5、。分。 马丁丁A. J. P. MartinA. J. P. Martin英英一、一、层析法的条件析法的条件 层析法析法应具具备的要素或条件是：的要素或条件是： 1. 1. 具有两相具有两相 固定相固定相固定不固定不动的一相的一相 流流动相相即携即携带样品流品流过固定固定相的流相的流动体。体。 2. 2. 混合物中各混合物中各组分的物理化学性分的物理化学性质有有差差别 3. 3. 多次展开多次展开6.1 概概 述述二、层析法的分类二、层析法的分类l 根据根据层层析机理不同的划分析机理不同的划分吸附剂为固定相，利用吸附才干吸附剂为固定相，利用吸附才干强弱的差别来分别强弱的差别来分别利用组分在固定

6、相和流动相间分利用组分在固定相和流动相间分配系数的差别来分别配系数的差别来分别离子交换剂作固定相，利用离子离子交换剂作固定相，利用离子交换亲和力的差别来分别交换亲和力的差别来分别凝胶作固定相，利用对分子大小凝胶作固定相，利用对分子大小的筛分作用来分别的筛分作用来分别 根据操作技根据操作技术术的划分的划分操作操作压压力在力在0.5MPa-5MPa之之间间操作操作压压力在力在5Mpa-40MPa之之间间操作操作压压力小于力小于0.5MPa靠溶靠溶质质分子在分子在电场电场中的挪中的挪动动速度速度 不同而分不同而分别别二、层析法的分类二、层析法的分类 根据固定相的形状划分：根据固定相的形状划分： 二、

7、层析法的分类二、层析法的分类 根据流根据流动动相的物相的物态态不同的分不同的分类类 二、层析法的分类二、层析法的分类各种层析法的机理及优缺陷各种层析法的机理及优缺陷 类型类型机理机理优点优点缺点缺点适用范围适用范围吸附层析吸附层析化学、物理吸附化学、物理吸附操作简便操作简便易易受受离离子子干干扰扰各各种种生生物物大大分分子子的的分分离离、脱脱色和去热源色和去热源凝胶层析凝胶层析分子筛的排阻效应分子筛的排阻效应分分辨辨力力高高，不不会引起变性会引起变性各各种种凝凝胶胶介介质质昂昂贵贵，处处理量有限制理量有限制分分子子量量有有明明显显差差别别的的可可溶溶性性生物大分子生物大分子分配层析分配层析溶溶

8、质质在在固固定定相相和和流流动动相相中中分分配配系系数数的的差异差异分分辨辨力力高高，重重复复性性较较好好，能能分离微量物质分离微量物质影影响响因因子子多多，上样量太小上样量太小用用于于各各种种生生物物大大分分子子的的分分析析鉴定鉴定亲和色谱亲和色谱亲亲和和色色谱谱生生物物大大分分子子与与配配体体之之间间有有特特殊亲和力殊亲和力分辨力很高分辨力很高 一一种种配配体体只只能能用用于于一一种种生生物物大大分分子子，局限性大局限性大各各种种生生物物大大分分子子聚焦色谱聚焦色谱等等电电点点和和离离子子交交换换作用作用分辨力高分辨力高进进口口试试剂剂昂昂贵贵蛋白质和酶蛋白质和酶6.2 柱层析一、吸附柱层

9、析二、一、吸附柱层析二、分配柱层析分配柱层析柱层析分别的原理表示图柱层析分别的根本原理表示图柱层析分别的根本原理表示图t1t0t1t2t0t0t3t1t2t0分子量： 一、吸附柱层析一、吸附柱层析 1. 原理原理 吸附柱层析是利用吸附剂对混合试吸附柱层析是利用吸附剂对混合试样各组分的吸附力不同而使各组分分别。样各组分的吸附力不同而使各组分分别。 6.2 柱层析一、吸附柱层析一、吸附柱层析l吸附剂普通是多孔性的微粒状物质，在其外表具有许吸附剂普通是多孔性的微粒状物质，在其外表具有许多吸附中心或称吸附位置，吸附中心的数量多少多吸附中心或称吸附位置，吸附中心的数量多少以及吸附才干强弱直接影响其吸附性

10、能。以及吸附才干强弱直接影响其吸附性能。l当流动相载着溶质当流动相载着溶质A渐渐流过层析柱时，溶质渐渐流过层析柱时，溶质A在固在固定相和流动相中不断的进展吸附、脱附、再吸附、再定相和流动相中不断的进展吸附、脱附、再吸附、再脱附的过程。脱附的过程。6.2 柱层析1、分配系数、分配系数l在在一一定定的的温温度度下下，溶溶质在在固固定定相相和和流流动相相之之间的的平平衡关系服从分配定律：衡关系服从分配定律：l KD= Cs/Cml KD为分配系数分配系数l Cm，Cs 分分别为流流动相相和和固固定定相相中中的的溶溶质A的的浓度。度。l运用条件：温度一定运用条件：温度一定l 低低浓度度一、吸附柱层析一

11、、吸附柱层析l试样中各组分的分配系数有差别，分配系数大试样中各组分的分配系数有差别，分配系数大的组分，在柱中被吸附得较牢，在固定相中保的组分，在柱中被吸附得较牢，在固定相中保管的时间较长，不易被洗脱下来，而分配系数管的时间较长，不易被洗脱下来，而分配系数小的组分被吸附得较不牢，在柱中保管时间较小的组分被吸附得较不牢，在柱中保管时间较短，易被洗脱下来。短，易被洗脱下来。l洗脱时，吸附力较强的组分，挪动的间隔小，洗脱时，吸附力较强的组分，挪动的间隔小，后出柱；吸附力较弱的组分，挪动的间隔大，后出柱；吸附力较弱的组分，挪动的间隔大，先出柱。先出柱。一、吸附柱层析一、吸附柱层析2、吸附等温线、吸附等温

12、线 吸附等温线：某种组分在吸附剂外表吸附等温线：某种组分在吸附剂外表的吸附规律。包括：线形和非线性。的吸附规律。包括：线形和非线性。1线性吸附等温线线性吸附等温线lCm：溶质A在流动相中的浓度lCs：溶质A在固定相中的浓度l当溶质A在随流动相缓慢流过层析柱的固定相时，在两相中不断吸附、脱附到达平衡l Cm Cs 吸附平衡l KD= Cs/Cm Cs 固定相Cm 流动相l洗脱曲线洗脱曲线l假设测定流出液中假设测定流出液中A的的浓度，绘制浓度，绘制CV的曲线，的曲线，那么得到洗脱曲线又那么得到洗脱曲线又叫洗提曲线。为一对叫洗提曲线。为一对称的层析图谱称的层析图谱 。CV2非线性吸附等温线非线性吸附

13、等温线l吸附剂外表具有吸附才干不同的吸附中心，溶质在其上的分配系数是吸附剂外表具有吸附才干不同的吸附中心，溶质在其上的分配系数是不同的。不同的。l吸附才干强的吸附中心，溶质在其上的分配系数吸附才干强的吸附中心，溶质在其上的分配系数KD较大，溶质分子将较大，溶质分子将首先占据它们，其次再占据较弱的、弱的和最弱的吸附中心。首先占据它们，其次再占据较弱的、弱的和最弱的吸附中心。l随着溶质在吸附中心上的浓度添加，强吸附中心逐渐被饱和，其分配随着溶质在吸附中心上的浓度添加，强吸附中心逐渐被饱和，其分配系数也渐变小。因此吸附等温线逐渐向下弯曲构成凸形。系数也渐变小。因此吸附等温线逐渐向下弯曲构成凸形。l洗

14、脱时，由于数量较多的弱的和较弱的吸附中心上的溶质先被洗下，洗脱时，由于数量较多的弱的和较弱的吸附中心上的溶质先被洗下，因此溶质集中的区域前进较快，接着较少的强吸附中心的溶质后被洗因此溶质集中的区域前进较快，接着较少的强吸附中心的溶质后被洗下流出，出现拖尾峰。下流出，出现拖尾峰。 Cs 固定相固定相Cm 流动相流动相Langmuir等温线 凸形Cs 固定相固定相Cm 流动相流动相反Langmuir等温线 凹形 3. 吸附剂的选择 吸附吸附剂应具有适宜的吸附力。具有适宜的吸附力。 颗粒均匀、大小适宜。粒均匀、大小适宜。 吸附与解吸可逆。吸附与解吸可逆。 不含不含杂质。 不溶于所运用的溶不溶于所运用

15、的溶剂即洗脱即洗脱剂，与欲分与欲分别的物的物质不不发生化学反响。生化学反响。 常用吸附柱介质常用吸附柱介质l无机物吸附介质包括：氧化铝、无机物吸附介质包括：氧化铝、硅胶、活性炭、膨润土、磷酸硅胶、活性炭、膨润土、磷酸钙钙( (凝胶型和晶型凝胶型和晶型) )、氧化钛和、氧化钛和氢氧化锌凝胶等。氢氧化锌凝胶等。l聚合物吸附介质有：琼脂糖、聚合物吸附介质有：琼脂糖、葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺等等1Al2O3中性、酸性、碱性I Al2O3分类分类中性：适用于醛，酮，醌，酯，内酯及苷的分别中性：适用于醛，酮，醌，酯，内酯及苷的分别酸性：酸性化合物如酸性色素，氨基酸等酸性：酸性化

16、合物如酸性色素，氨基酸等碱性：生物碱，醇及其它中性和碱性物质碱性：生物碱，醇及其它中性和碱性物质普通地，能用酸性或碱性普通地，能用酸性或碱性Al2O3分别的也能用中性分别的也能用中性Al2O3分别分别II Al2O3的活性的活性 活度活度级级I级级加加强强 吸附才干吸附才干 I 减弱减弱 在不同的温度下活化氧化在不同的温度下活化氧化铝铝： 加加热热至至 100150 活化有活化有一定活性一定活性 150 III级级 300400 IVVI 600 脱水开脱水开场烧结场烧结每一批每一批Al2O3外表外表积积和外表孔构造不一致，和外表孔构造不一致，活性不同活性不同普通，分普通，分别别极性极性较较强

17、强的的组组分用活性弱的吸分用活性弱的吸附附剂剂；分；分别别弱极性的弱极性的组组分用活性分用活性强强的吸的吸附附剂剂。2硅胶l弹性多聚硅酸脱水制的弹性多聚硅酸脱水制的 l硅氧烷不具吸附性硅氧烷不具吸附性l外表孔穴较小的硅酸吸附能较强外表孔穴较小的硅酸吸附能较强l用途：微酸性，吸附才干较用途：微酸性，吸附才干较Al2O3 弱，可分弱，可分别酸性和中性物质，如有机酸，氨基酸，萜别酸性和中性物质，如有机酸，氨基酸，萜类，甾胆固醇及激素属于甾类化合物类类，甾胆固醇及激素属于甾类化合物类弹性多聚硅酸脱水性多聚硅酸脱水 OHOH SiOSi SiOH SiSi 硅氧硅氧烷 游离型硅酸游离型硅酸醛 束束缚型型

18、 活活泼型型 硅酸硅酸醛 硅酸硅酸醛 a b c d3聚酰胺l乙内酰胺聚合：聚己内酰胺，锦纶乙内酰胺聚合：聚己内酰胺，锦纶l可与酚类，酸类，醌类，硝类化合物构成可与酚类，酸类，醌类，硝类化合物构成氢键而分别。构成氢键基团的吸附才干大氢键而分别。构成氢键基团的吸附才干大l对、间位构成氢键对、间位构成氢键邻位空间位阻邻位空间位阻l芳香族由于共轭吸附才干大芳香族由于共轭吸附才干大由海洋生物由海洋生物琼脂提脂提获得到的主要成分得到的主要成分 中性不中性不带电水溶性水溶性线状多糖状多糖高高亲水性，含大量水性，含大量羟基基能制成多孔性凝胶，分能制成多孔性凝胶，分别大分子大分子制制备： 去除去除带电琼胶成分

19、胶成分 将溶化的将溶化的琼脂糖采用脂糖采用悬浮浮, ,乳化或乳化或喷珠的方法制珠的方法制 得珠状介得珠状介质。 采用交采用交联剂添加介添加介质的机械的机械强度度4琼脂糖5葡聚糖 l-1,6 相相连连的葡萄糖聚合物，由的葡萄糖聚合物，由环环氧氧氯氯丙丙烷烷交交联联得到得到珠粒。珠粒。l性性质质：l 1 亲亲水性比水性比琼琼脂糖高脂糖高 羟羟基数多基数多 l 2 化学化学稳稳定性及定性及热稳热稳定性好定性好l 3 孔度与机械孔度与机械强强度与交度与交联联度有关度有关l 4 用于凝胶用于凝胶过滤过滤分子分子筛筛l运用：水溶液中分运用：水溶液中分别别蛋白蛋白质质等等6纤维素l-1,4 相相连连的的D-

20、葡萄糖葡萄糖 偶而有偶而有1，6 键键合合 线线性天性天然高聚物。然高聚物。l 1 亲亲水水l 2 微晶与无定型两部分微晶与无定型两部分组组成，缺乏孔度成，缺乏孔度l大孔珠状大孔珠状纤维纤维素素l 1 高孔度高孔度l 2 高机械高机械强强度度l 3 ) 亲亲水性水性强强 l运用：离子交运用：离子交换换分分别别蛋白蛋白质质介介质质性性质： 1丙丙烯酰胺与交胺与交联剂N, N-甲叉双丙甲叉双丙烯酰 胺共聚。胺共聚。2烷烃骨架与骨架与酰胺胺侧链3控制交控制交联剂比例可控制网格孔度比例可控制网格孔度4亲水好，但不如多糖介水好，但不如多糖介质 (5) 机械机械强度差度差运用：运用：1凝胶凝胶过滤 2 电

21、泳介泳介质7聚丙烯酰胺4、流动相及其选择l(1)流动相洗脱过程的本质：流动相分子与被分别的溶质分子竞流动相洗脱过程的本质：流动相分子与被分别的溶质分子竞争占据吸附剂外表活性中心的过程。强极性组分选强极性的流动争占据吸附剂外表活性中心的过程。强极性组分选强极性的流动性洗脱，反之相反。性洗脱，反之相反。 l(2)功能团极性：功能团极性：l 有机分子根本母核一样时，取代基极性加强，整个分子极性加有机分子根本母核一样时，取代基极性加强，整个分子极性加强；极性基团增多，整个分子极性加强。分子中双键多，吸附力强；极性基团增多，整个分子极性加强。分子中双键多，吸附力强；共轭双键多，吸附力强。分子构成内氢键，

22、吸附力弱于不能强；共轭双键多，吸附力强。分子构成内氢键，吸附力弱于不能构成内氢键的化合物。构成内氢键的化合物。 烷烃CH3 ，CH2 烯烃CH= CH醚类OCH3，OCH2硝基化合物硝基化合物NO2二甲胺二甲胺酯类COOR酮类 C=O醛类CHO 硫醇硫醇SH胺胺类NH2 酰胺胺 醇醇类OH酚酚类ArOH羧酸酸类COOH3常用流动相极性：常用流动相极性： 石油醚石油醚环己烷环己烷二硫化碳二硫化碳CCl4三氯乙三氯乙烯烯苯苯甲苯甲苯二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿乙醚乙醚乙乙酸乙酯酸乙酯乙酸甲酯乙酸甲酯丙酮丙酮正丙醇正丙醇乙醇乙醇甲醇甲醇吡啶吡啶酸酸在某些情况下可用混合流动相在某些情况下可用混合流动相聚酰

23、胺柱层析可采用水溶液：乙醇水溶液，丙聚酰胺柱层析可采用水溶液：乙醇水溶液，丙酮水溶液等酮水溶液等溶解试样用的溶剂极性应与流动相相近溶解试样用的溶剂极性应与流动相相近 5. 洗脱方法及流出曲洗脱方法及流出曲线 有色物有色物质分分别的洗脱方法的洗脱方法 推出法：有色物推出法：有色物质分分别后，将吸附后，将吸附剂从柱中推出，用刀按从柱中推出，用刀按层切开，分切开，分层洗洗脱再定量。脱再定量。 无色物无色物质分分别的洗脱方法及流出曲的洗脱方法及流出曲线 无色物无色物质分分层后，可采用流出曲后，可采用流出曲线加以判加以判别。 流出曲流出曲线：以物：以物质浓度度为纵座座标，以搜集的洗脱液体以搜集的洗脱液体

24、积为横座横座标，得出的，得出的曲曲线。 柱层析的洗脱方法柱层析的洗脱方法 洗脱普通有三种方法：洗脱普通有三种方法：恒定洗脱法：恒定洗脱法：逐次洗脱法：逐次洗脱法：梯度洗脱法：梯度洗脱法：梯度洗脱法是目前最常用的洗脱法。梯度洗脱法是目前最常用的洗脱法。恒定洗脱恒定洗脱 分分 步步 洗洗 脱脱 梯梯 度度 洗洗 脱脱 洗脱剂的选择 样品在溶品在溶剂中具有一定溶解度。中具有一定溶解度。 普通采用无水溶普通采用无水溶剂，且与水不互溶。，且与水不互溶。 溶溶剂沸点适宜。沸点适宜。 纯度要高，无度要高，无杂质。 二、分配柱层析二、分配柱层析l分配柱层析是根据欲分别组分在两种互不混溶分配柱层析是根据欲分别组

25、分在两种互不混溶或部分混溶的溶剂间的溶解度差别来实现分别或部分混溶的溶剂间的溶解度差别来实现分别的。的。l这两种互不混溶的溶剂一个是流动相，另一个这两种互不混溶的溶剂一个是流动相，另一个被吸收在载体中，被称为固定相。被吸收在载体中，被称为固定相。l流动相载着试样中的各种组分沿着层析柱流动流动相载着试样中的各种组分沿着层析柱流动时，试样中的各种组分就在流动相和固定相间时，试样中的各种组分就在流动相和固定相间进展分配，当不同组分的分配系数有差别时，进展分配，当不同组分的分配系数有差别时，它们在层析柱中的前进速度就不一样，于是得它们在层析柱中的前进速度就不一样，于是得以分别。以分别。 二、分配柱层析

26、1. 原理原理 分配分配层层析是根据混合物中各析是根据混合物中各组组分在两种不相混溶的溶分在两种不相混溶的溶剂剂间间溶解度溶解度 即分配系数即分配系数 的不同，使各的不同，使各组组分得以分分得以分别别。 分配系数分配系数K：当溶：当溶质质在两种不相混溶的溶在两种不相混溶的溶剂剂中到达平衡中到达平衡时时，溶，溶质质在两种溶在两种溶剂剂 即两相即两相 中的中的浓浓度比度比值为值为一常数，称分一常数，称分配系数。配系数。 各种各种组组分具有各自的分配系数分具有各自的分配系数K，同一物，同一物质质，温度不同，温度不同时时，K不同。不同。 在分配的各在分配的各组组分中，某分中，某组组分分K ，那么固定相

27、中，那么固定相中浓浓度度 ， K ，后出柱。，后出柱。 2. 固定相与流固定相与流动相相 固定相：由固定相：由载体和一种溶体和一种溶剂多多为水水组成。成。 流流动相：普通是与水互不相相：普通是与水互不相溶的有机溶溶的有机溶剂 。 当流当流动相是水或水溶液，固定相相是水或水溶液，固定相液体是有机溶液体是有机溶剂时，称，称为反相分反相分配配层析。析。 分配柱层析分配柱层析l常用的载体有：硅胶、纤维素、硅藻土等；常常用的载体有：硅胶、纤维素、硅藻土等；常用的固定相有：水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等用的固定相有：水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等强极性溶剂。强极性溶剂。l流动相普通是与水互不相溶的有机溶剂，如正流

28、动相普通是与水互不相溶的有机溶剂，如正丁醇、正戊醇等。丁醇、正戊醇等。l分配柱色谱常用来分别极性极强的、亲水性的分配柱色谱常用来分别极性极强的、亲水性的物质，如脂肪酸、多元醇、水溶性氨基酸等。物质，如脂肪酸、多元醇、水溶性氨基酸等。 3. 挪动速率 主要是用于比较各组分挪动速度的大小，即在同一时间内，各组分挪动间隔的大小，作为定性之用。 = = 6.3 纸层析特点：微量操作技特点：微量操作技术，简便、分便、分别效率高，效率高，但分但分别速度慢。速度慢。纸层析析(Paper chromatography) 是在是在滤纸上上进展的色展的色谱分分析法。析法。 一、定一、定义 将固定相放在将固定相放在

29、纸上，以上，以纸做做载体体进展点展点样、展、展开、定性和定量的液开、定性和定量的液-液分配液分配层析法。析法。 纸层析和萃取一析和萃取一样，也是根据不同物，也是根据不同物质在两相在两相间的分配比不同而的分配比不同而进展分展分别的相当于逆流萃取的相当于逆流萃取。6.3 6.3 纸层纸层析析6.3 6.3 纸层纸层析析 二、根本原理固定相滤纸是一种惰性载体，滤纸纤维素中吸附着的水或其它溶剂作固定相。 流动相展开剂 ：沿着滤纸流动的溶剂 ( 普通为有机溶剂 )。试液点在滤纸上，在层析过程中，试液中各组分，因其在两相中的溶解度不同， ( 也就是 分配系数KD 不同 ) ，因此得到分别。其原理与萃取类似

30、。它是一种分配层析。溶质在固定相与展开剂之间反复分配。在固定相中分配系数大而在展开剂中分配系数小的，在纸条上挪动速度慢，停留在纸条的接近原点端。 1.层析缸层析缸 2.滤纸滤纸 3.原点原点 4.展开剂展开剂 5.前沿前沿 6.7.斑点斑点123456736.3 6.3 纸层纸层析析1. 纸色谱的根本原理纸色谱的根本原理xyRf的计算2. 比移值比移值Rf组份分别后,它们在滤纸上的位置用比移值Rf 表示。定义:6.3 6.3 纸层纸层析析比移值比移值RfRf的大小取决于各组分在二相间的分配系数的大小取决于各组分在二相间的分配系数及滤纸的性质。不同的组分具有不同的分配系数及滤纸的性质。不同的组分

31、具有不同的分配系数, , 因此也就有不同的因此也就有不同的RfRf。这就是定性的根据。这就是定性的根据。6.3 6.3 纸层纸层析析3. 影响影响Rf的要素的要素(1)欲分欲分别物的性物的性质:物物质在两相的分配系数在两相的分配系数,决决议了了它的它的Rf大小大小;；(2)展开展开剂:同一同一组分在不同溶分在不同溶剂中中Rf不同。通常不同。通常应选这样的的层析析剂，使溶，使溶质的的Rf在在0.05 0.85之之间,不不同同组分的分的Rf差差值 0.05。(3)pH:影响它影响它们的存在形状。的存在形状。(4)滤纸:质地均一、厚薄适当、具有一定机械地均一、厚薄适当、具有一定机械强度、度、不含不含

32、杂质(5). 温度温度:在在层析缸中用析缸中用红外灯照射。温度会影响溶外灯照射。温度会影响溶质的分配系数及流的分配系数及流动相的分散速度。相的分散速度。层析操作析操作应在在恒温下恒温下进展，温度不超越展，温度不超越 0.5oC。(6). 展开方式展开方式:展开方式不同展开方式不同,Rf也不同。下行法的也不同。下行法的Rf最大，上行法的最大，上行法的Rf较小，小，环行法的行法的 Rf也不大。也不大。1.四、操作技四、操作技术2.1、载体体 (滤纸)3.1滤纸的的选择4. a. 要求要求滤纸质地均匀、平整无折痕地均匀、平整无折痕边缘整整齐5. b. 要求要求滤纸的的纤维松松紧适宜适宜6. c. 滤

33、纸的的杂质含量少含量少7.6.3 6.3 纸层纸层析析1.2层析滤纸的性能与规格层析滤纸的性能与规格型号杯重G /m2厚度(mm)吸水性( 30min内水上升mm)灰分G /m2性能1900.17150 1200.08快速2900.17120 900.08中速3900.1590 600.08慢速41800,34151 1210.08快速51800.32120 910.08中速61800.3090 600.08慢速3滤纸的处置滤纸的处置 以以0.1 0.4 mol/L HCl (或或 2 mol/L HAc)浸泡浸泡数小时数小时, 除去无机杂质后除去无机杂质后, 取出用蒸馏水洗净取出用蒸馏水洗净

34、, 再将滤纸放在丙酮再将滤纸放在丙酮-乙醇乙醇( 1 : 1 )中浸泡一周时中浸泡一周时间间, 除去有机杂质除去有机杂质, 再取出风干备用。再取出风干备用。6.3 6.3 纸层纸层析析 2、固定相 纸层析以吸着在纤维素上的水作固定相。反相纸层析用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇等作固定相。假设分别芳香油等非极性物，以石蜡油、硅油作固定相。 3、 试样试样 1 试样试样的溶解的溶解 尽量防止用水。普通用乙醇、丙尽量防止用水。普通用乙醇、丙酮酮、氯氯仿等，仿等，最好采用与展开最好采用与展开剂剂极性极性类类似的溶似的溶剂剂。液体。液体样样可可直接点直接点样样。1.四、操作技四、操作技术术2点点样方法方法

35、a、先用、先用铅笔在距笔在距纸条一端条一端2 3 cm处划一条直划一条直线起始起始线并在并在线上隔一定上隔一定间隔划一隔划一“x号表示点号表示点样位置；位置；见下表示下表示图：b 点点样样工具：微量注射器、毛工具：微量注射器、毛细细滴管滴管 0.5 mm) c.点样方法：用点样工具汲取试液悄然与“x号接触，使点样的斑点直径为0.2 0.5 cm, 每次点样2 20 m于滤纸上，以冷风吹干；d. 干后，将纸的两边用线缝好，以圆筒方式置于层析缸中展开。4、 展开展开 1展开剂的选择展开剂的选择欲分别物在两相中的溶解度；欲分别物在两相中的溶解度；展开剂的极性展开剂的极性展开剂与欲分别物间应无化学反响

36、展开剂与欲分别物间应无化学反响欲分别物在展开剂中的分配系数最好不受温度欲分别物在展开剂中的分配系数最好不受温度的影响的影响欲分别物在两相间能瞬间到达分配平衡欲分别物在两相间能瞬间到达分配平衡常用的展开剂常用的展开剂水、饱和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、水、饱和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、氯仿、苯、丁酮、丙酮、有机酸、有机碱，氯仿、苯、丁酮、丙酮、有机酸、有机碱，有时也参与一定比例的无机酸、无机碱、甲有时也参与一定比例的无机酸、无机碱、甲醇、乙醇等。醇、乙醇等。2展展层方法方法 展展层前，前，层析缸与已点析缸与已点样滤纸必需必需预先先经水蒸汽、水蒸汽、溶溶剂蒸气蒸气饱和。和。 方法：将溶方

37、法：将溶剂和水置于分液漏斗中充分振和水置于分液漏斗中充分振荡，分，分层后，将水后，将水层放入小放入小烧杯内，置于杯内，置于层析缸中平衡一段析缸中平衡一段时间，使，使滤纸吸吸饱蒸汽，然后移去小蒸汽，然后移去小烧杯，将溶杯，将溶剂倒入倒入溶溶剂槽中，立刻将点好槽中，立刻将点好样的的滤纸的一端浸入溶的一端浸入溶剂槽内槽内展展层。1.A .上行展开上行展开法法将点有试样的滤纸条的下端浸入溶剂但不能浸没点样处上端固定在层析缸的上部，坚持垂直，将缸密闭，使溶剂沿下端上升而展层。待溶液上升到间隔纸上端3 4 cm 时，将滤纸取出，用铅笔在溶剂前沿处画线作记号见右图。对于对于 Rf 非常接近的物质可采取延续挥

38、发的色谱法。非常接近的物质可采取延续挥发的色谱法。a.a.纸条的上端暴露在条的上端暴露在层析缸外，析缸外，以便令上升的溶以便令上升的溶剂挥发；b.b.只需只需坚持持纸条下端与溶条下端与溶剂面面接触，溶接触，溶剂便能不断地上升便能不断地上升而而挥发，展，展层过程就自程就自动延延续地地进展；展；c.c.假假设溶溶剂沸点沸点100oC100oC，那，那么可在么可在纸条暴露部分用条暴露部分用红外外灯烘烤，促使溶灯烘烤，促使溶剂挥发；d.d. 该法不能丈量前沿，但可法不能丈量前沿，但可达分达分别的目的。的目的。玻片玻璃棒原点玻皿剪成锯齿状，剪成锯齿状，便于溶剂滴下便于溶剂滴下B.下行展开法下行展开法 溶

39、剂自滤纸条的上端向下降借助于重力的作用，具有分别速度快及延续挥发色谱的优点。C. 环行法环行法 又叫径向展开法。这是一种既快又方便的方法。又叫径向展开法。这是一种既快又方便的方法。取一张圆形滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪取一张圆形滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪刀沿这两根线剪至圆心处，在纸的中央滴上试液，干刀沿这两根线剪至圆心处，在纸的中央滴上试液，干后，将滤纸夹在两个大小一样培育皿之间，使剪开的后，将滤纸夹在两个大小一样培育皿之间，使剪开的纸条的尾端浸入流动相。纸条的尾端浸入流动相。D.双向展开法双向展开法有时用一种溶剂不能将样品中组份分开时，可以试用双向展开法。该法是用正方形或长

40、方形滤纸，在纸的一角上点样，先用一种展开剂朝一个方向展开，展开终了，待溶剂挥发后，再用另一种展开剂朝与原来垂直的方向进展第二次展层。假设前后二次展开剂选择适当，可使各种组份完全分别。例如，氨基酸的分别可用此法。双向展开法也可以二次运用同一种展开剂展层。5、 显色显色展展层后，将后，将滤纸从从层析缸中取出，用析缸中取出，用铅笔在溶笔在溶剂前沿作前沿作记号。号。a. 有色物：直接察看各个色斑b.无色物：无色物：c.物理法物理法显色：用紫外灯照，察看有无吸收色：用紫外灯照，察看有无吸收或或发出各种不同出各种不同颜色的色的荧光斑点，并用光斑点，并用铅笔画下斑点的位置及大小。笔画下斑点的位置及大小。6、

41、分析、分析A.定性分析：各定性分析：各组组分有各自的分有各自的Rf。为为了了查查明未知明未知物的物的组组成，最好是在同成，最好是在同样样条件下与知的条件下与知的纯纯物物质质做做对对照照实验实验。化学法显色：利用各种物质的特性反响，喷洒适当的显化学法显色：利用各种物质的特性反响，喷洒适当的显色剂，假设被分别的物质含有羧酸，可喷酸碱指示剂溴色剂，假设被分别的物质含有羧酸，可喷酸碱指示剂溴甲酚绿，当斑点呈黄色，阐明羧酸确实存在；假设被分甲酚绿，当斑点呈黄色，阐明羧酸确实存在；假设被分别的物质含有氨基酸，那么可喷茚三酮，多数氨基酸呈别的物质含有氨基酸，那么可喷茚三酮，多数氨基酸呈紫色，个别氨基酸呈黄色

42、。其它化合物所用显色剂可从紫色，个别氨基酸呈黄色。其它化合物所用显色剂可从手册里查阅。手册里查阅。xyRf 的计算:Rf = x / yx1x2yRf 的的计计算算:Rf 1= x1 / yRf2 = x2 / y这样这样每一个斑点用两每一个斑点用两个个Rf 来描画。来描画。1.B.定量分析定量分析2.剪洗法：将斑点剪下，用适当的溶剂洗脱，剪洗法：将斑点剪下，用适当的溶剂洗脱，然后用各种仪器方法如红外、紫外、原子然后用各种仪器方法如红外、紫外、原子吸收、发射光谱测吸光度，也可将斑点剪吸收、发射光谱测吸光度，也可将斑点剪下灰化，再用适当的溶剂溶解，测之。下灰化，再用适当的溶剂溶解，测之。3.比较

43、法：经纸色谱将各种组份分开后，可在比较法：经纸色谱将各种组份分开后，可在一样条件下，制得规范系列图谱，与待测斑一样条件下，制得规范系列图谱，与待测斑点颜色、面积进展比较，确定其能够的含量。点颜色、面积进展比较，确定其能够的含量。五、五、纸层析的运用析的运用例氨基酸的分别固定相为水例氨基酸的分别固定相为水流动相流动相分离情况分离情况 正丁醇：正丁醇：2 mol/L HAc = 1 : 1酪氨酸、二碘酪氨酸酪氨酸、二碘酪氨酸用水饱和的苄醇用水饱和的苄醇亮氨酸、异亮氨酸亮氨酸、异亮氨酸叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水16 : 16 : 0.1 : 3.9亮氨酸、异亮氨酸亮氨酸、异亮氨

44、酸流动相分离情况丁醇：醋酸：水32 : 2 :22甲状腺素、二碘酪氨酸流动相：丁醇：HAc :H2O = 4 : 1 :5流动相：M甲酚酚：pH = 9.33硼酸缓冲液 = 1 : 1亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、苏氨酸、门冬氨酸、谷氨酰酸、门冬酰氨、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、胱氨酸等例例2. 糖的分别糖的分别(固定相为水固定相为水)流动相分离情况醋酸乙脂:吡啶:水= 2 : 1 : 1木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖丁醇:吡啶:水= 45 : 25 : 40乳糖、半乳糖、葡萄糖丁醇:乙醇:水: NH3 = 40 : 10 : 49 : 1尿

45、中葡萄糖丁醇:乙醇:水= 10 : 1 : 2蜜二糖、果糖、葡萄糖、流动相分离情况流动相：酚流动相：丁醇:醋酸:水= 1 : 1 : 1鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖醛酸丁醇:乙醇:水= 4 : 1 : 5低聚糖75% 2丙醇：醋酸9 : 1直链淀粉丁醇:吡啶:水：苯= 50 : 30 : 3 : 45棉子糖例脂肪酸的分别固定相为水例脂肪酸的分别固定相为水流动相分离情况95%乙醇：浓氨水100 : 1同系的直链脂肪酸正己醇： 1.5 mol/L 氨水1 : 1烷氧基酸流动相1:乙醇：浓氨水 : H2O = 80 : 5 : 15流动相2：乙二醇乙醚：桉树脑：

46、88%甲酸 = 5 : 5 : 2草酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、羟基醋酸、顺丁烯二酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、乌头酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸流动相分离情况丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5甲胺、乙胺、丙胺、丁胺、戊胺、苯苄胺甲醇：戊醇：苯：水4 : 2 : 2 : 2萘胺、间苯二胺、对苯二胺、苯胺丁醇：1.5 mol/L 氨水1 : 1C7以下的脂肪酸例例4. 胺类的分别固定相为水胺类的分别固定相为水例例5. 醇、酚的分别固定相为水醇、酚的分别固定相为水流动相分离情况丁醇：5%NaHCO3 1 : 1甲醇、乙醇、异丙醇、异丁醇、异戊醇、辛醇己烷饱和甲醇乙醇、异丙醇、丙醇、异丁醇、正丁醇丁醇：乙

47、醇：水 4 : 1.1 : 1.9乙二醇、丙三醇、甘露糖醇、山梨醇、肌醇流动相分离情况丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5苯甲酸、儿茶酚、肉桂酸、邻苯甲酸、儿茶酚、肉桂酸、邻香豆酸、没食子酸、间羟基苯香豆酸、没食子酸、间羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、甲酸、对羟基苯甲酸、5-甲基甲基苯二酚、间苯三酚、苯二酚、间苯三酚、2,4,6三三羟基苯甲酸、羟基苯甲酸、2,4二羟基苯甲二羟基苯甲酸、酸、1,2,3苯三酚、对苯二酚、苯三酚、对苯二酚、间苯二酚、间苯二酚、羟基苯甲酸、邻羟基苯甲酸、邻羟基苯甲酸、香草酸羟基苯甲酸、香草酸例例 核酸降解物核苷酸、嘌呤、嘧啶碱基的分别核酸降解物核苷酸、嘌呤、嘧啶碱基的分别固定

48、相为水固定相为水流动相分离情况饱和(NH4)2SO4：水：2丙醇 79 : 10 : 2鸟嘌呤、腺嘌呤、胞苷正丁醇：水：乙二醇：醋酸5 : 1 : 5 : 2AMP、 ADP、 ATP正丁醇：二苷酸：0.1 mol/L HCl4 : 1 : 1黄嘌呤、鸟嘌呤正丁醇：二苷酸：水4 : 1 : 1腺嘌呤、次黄嘌呤例例. 其它类的分别固定相为水其它类的分别固定相为水流动相分离情况正丁醇：浓氨水：水4 : 1 : 5磺胺嘧啶、磺胺噻睉、Sulfamerzine、p,p-sulfonyldianiline正丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5对胺基苯甲酸、维生素C、N甲基菸酰胺、菸碱酰胺、菸酸、潘妥宁、泛

49、酸、VB6、VB1VB甲苯：石油醚：乙醇：水200 : 100 : 30 : 70雌酮、雌二酮、雌三酮、马烯雌酮、脱氢皮质甾酮酸、孕甾酮、顺式睾丸甾酮流动相分离情况丁醇：浓盐酸98 : 2阿托品、莨菪胺、后马托品、莨菪碱、d古苛碱、d假古苛碱、托把柯卡因、金雀花碱、高金雀花碱、吗啡、可待因、蒂巴因、海洛因、那可叮、可它宁、北美黄莲碱、马钱子碱、二甲马钱子碱、奎咛、辛可宁、辛可宁啶、毛果碱、异毛果碱、毛果心碱、菸碱、吡啶、胆碱、乙酰胆碱、波尔啶碱、槟榔碱例例8无机运用固定相为水无机运用固定相为水流动相分离情况12 mol/LHCl：甲醇：丁醇：甲基异丁酮55 : 35 : 5 : 5K+、Rb

50、+ 、Cs +乙醇：水80 : 20Li + 、Na + 、K +10% HCl的水饱和丁醇Zn 2+Ga 3+In 3+ Al 3+苯酚：甲醇：HCl 5 : 3 : 2Al 3+ Ga 3+ In 3+ Tl 3+流动相分离情况丁醇：HAc：乙酸乙脂：水10 : 2 : 1 : 7从Fe、Al、Ti中分离出Ga乙酸乙脂：水：HNO385 : 10 : 5从稀土、Zr、Ti、Th中分离出Sc乙醚：浓HNO3 87.5 : 12.5HfZr4 mol/L HCl 饱和丁醇UO2Th例例9生物学运用生物学运用FeCuCoNiNiNiNiTiMo黑毛红毛黄毛白毛 兔毛的色谱图以兔毛作实验，分别结果

51、如右图。取不同颜色兔毛取不同颜色兔毛(300 500 mg), 干法灰化干法灰化, 溶于稀溶于稀HCl 中中,用用丙酮丙酮 : 丁醇丁醇 : HCl = 10 : 4 : 2, 展开后展开后,显色显色6.4 6.4 薄薄层层色色谱谱薄层层析薄层层析：把固定相吸附剂铺在玻璃板上铺薄层层析：把固定相吸附剂铺在玻璃板上铺成均匀的薄层，层析就在玻璃板上的薄层中成均匀的薄层，层析就在玻璃板上的薄层中进展。进展。把试样点在层析板的一端，把层析板放入层把试样点在层析板的一端，把层析板放入层析缸中，使点有样品的一端浸入流动相展开析缸中，使点有样品的一端浸入流动相展开剂中，试样中的各种组分沿着薄层在固定相剂中，

52、试样中的各种组分沿着薄层在固定相和流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶和流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解再吸附的分配过程，以致相互分开。解再吸附的分配过程，以致相互分开。6.4 6.4 薄薄层层色色谱谱法法一、薄层层析的特点一、薄层层析的特点优点 快速：只需10-60 min 分别效率高，灵敏度高 安装简、操作方便 样品负荷量大、斑点分散少缺陷Rf值的反复性差抑制方法标样和试样在同一块板上展开二、固定相吸附剂二、固定相吸附剂 决议吸附性能的要素：吸附剂的化学组成、决议吸附性能的要素：吸附剂的化学组成、活性、外表积。活性、外表积。要求：要求：适宜的吸附力适宜的吸附力与展开与展开剂、被吸附物

53、、被吸附物质均不起化学反响均不起化学反响粒度粒度细小而且均匀范氏方程，减少小而且均匀范氏方程，减少涡流分散流分散项6.4 6.4 薄薄层层色色谱谱法法(1). 氧化铝氧化铝 氧化铝呈微弱碱性，酸性较强的化合物在氧氧化铝呈微弱碱性，酸性较强的化合物在氧化铝上吸附的很牢所以，酸性物质分别不好化铝上吸附的很牢所以，酸性物质分别不好，故通常用于分别碳氢化合物、生物碱类和，故通常用于分别碳氢化合物、生物碱类和对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物质。对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物质。普通要求薄板用的活性普通要求薄板用的活性为 级氧化铝的活性与含水量亲密相关含一定量的水份时，吸附剂外表的吸附中心回被水

54、分子占据。活性活性 含水量（）含水量（） 故加故加热驱除水除水活化；吸附一定量的水活化；吸附一定量的水失活失活100 150oC, 除去Al2O3中与羟基结合的部分水份，使Al2O3有一定的活性；150 300oC， Al2O3活性达 级；300 400oC，Al2O3活性达 级； 600oC， Al2O3进一步脱水并开场烧结。 由于脱水过程遭到许多要素的影响，因此，每批消费的Al2O3 ，其外表积和外表孔穴构造并不一致，活性也不一样。 Al2O3活性的测定：取20 L染料溶液偶氮苯30 mg、对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、和对氨基偶氮苯各20 mg ，溶解于50 mL CCl4中，加到薄板

55、上，用CCl4展层，根据下表确定活性。活性 Rf,偶氮苯 0.59 0.74 0.85 0.95Rf,对-甲氧基偶氮苯 0.16 0.49 0.69 0.89Rf,苏丹黄 0.01 0.25 0.57 0.78Rf,苏丹红 0.00 0.10 0.33 0.56Rf,偶氮苯 0.00 0.03 0.08 0.19市售的供薄层色谱用的市售的供薄层色谱用的Al2O3有有:Al2O3 H氧化铝中无粘合剂氧化铝中无粘合剂Al2O3 G氧化铝中含煅石膏普通氧化铝中含煅石膏普通5煅石膏煅石膏 煅石膏煅石膏CaSO4，作为粘合剂，作为粘合剂Al2O3 HF254氧化铝中不含煅石膏，仅含荧光指示氧化铝中不含煅

56、石膏，仅含荧光指示剂剂 在在254 nm下呈黄绿色荧光下呈黄绿色荧光Al2O3 GF254氧化铝中既含煅石膏又含荧光指示剂氧化铝中既含煅石膏又含荧光指示剂 在在254 nm下呈黄绿色荧光下呈黄绿色荧光上述商品可以直接调料涂敷上述商品可以直接调料涂敷1份料，份料，2份水调和份水调和硅胶吸附性较硅胶吸附性较Al2O3弱弱硅胶是微酸性吸附剂，且适用于酸性、中性物质的分别如有机酸、氨基酸、萜类、甾体。碱性物质那么能与硅胶作用当用中性溶剂展层，碱性物质有时停留在原点不动，或者得到拖尾的斑点，而不能很好的分别。活性 含水量（） 0 5 15 25 35注:硅胶薄层的活化温度不能高于200oC硅胶的构造为硅

57、胶的构造为:硅胶活性的测定：称取二甲黄、苏丹红、靛酚蓝各40mg溶于100 mL 苯中，将此混合液滴加于薄层上，用石油醚展开10 cm，混合物应不动；如用苯展开，那么应分成三个斑点，其Rf值分别为：二甲黄0.58，苏丹红0.19，靛酚蓝0.08展层时间30 45 min，那么以为此硅胶合格。经本法测定的活性与Al2O3活性 级相当。薄层用商品硅胶有：薄层用商品硅胶有：硅胶硅胶H H不含粘结剂不含粘结剂硅胶硅胶G G含粘结剂煅石膏含粘结剂煅石膏硅胶硅胶HF254HF254含荧光物质的硅胶含荧光物质的硅胶硅胶硅胶GF254GF254含有煅石膏和荧光剂含有煅石膏和荧光剂此外，硅藻土、硅酸盐、杂多酸盐

58、、聚酰胺、纤维素也可用作吸附剂。选择吸附剂的规律：选择吸附剂的规律：v极性物质极性物质 被被 极性外表的吸附剂吸附；极性外表的吸附剂吸附；v亲水性的吸附剂适用于在非水溶液中吸附物质亲水性的吸附剂适用于在非水溶液中吸附物质v疏水性的吸附剂适用于在水溶液中吸附物质疏水性的吸附剂适用于在水溶液中吸附物质三、铺层方法三、铺层方法1干法铺层“干板或软板 适用于颗粒粗，分别效率差。氧化铝常用此法，2湿法铺层：加水或其它溶液调糊状“硬板倾倒法：根据玻璃面积及铺层厚度称取一定量吸附剂，按比例加水或其它溶液调糊状，立刻倾倒在玻璃上大致推开，悄然颠动玻璃板，使其自动 成均匀薄层，程度放置1020min 结后阴干备

59、用或活化后备用刮层法1制板制板A、玻璃板、玻璃板 a .平整、去油、去平整、去油、去污污 可用可用浓浓H2SO4-K2CrO7洗液浸洗液浸洗，或丙洗，或丙酮酮擦洗，自来水洗擦洗，自来水洗净净后，烘干后，烘干 b. 玻璃板的尺寸根据本人的需求自在玻璃板的尺寸根据本人的需求自在选择选择，小的可，小的可用用2.57.5cm的的载载玻片玻片, 大的可用大的可用20 20cm的玻片。的玻片。B、涂布液、涂布液 取一定量的吸附剂放入研钵中，参与需求的水或取一定量的吸附剂放入研钵中，参与需求的水或适当的溶剂，研磨时间以调成稀糊状为度，当浓度均适当的溶剂，研磨时间以调成稀糊状为度，当浓度均一后，即成胶状物，色

60、泽洁白为最正确，立刻倾入玻一后，即成胶状物，色泽洁白为最正确，立刻倾入玻璃板上，用下述方法涂布。璃板上，用下述方法涂布。涂布方法涂布方法 玻棒涂布玻棒涂布 玻片刮涂玻片刮涂 倾斜涂布利用流平性：简单，但均匀性差倾斜涂布利用流平性：简单，但均匀性差 涂布器涂布器层析析板板是是用用专门的的涂涂布布器器把把浆状状的的吸吸附附剂硅硅胶胶或或氧氧化化铝，200200250250目目均均匀匀地地涂涂在在长条条形形玻玻璃璃板上厚度板上厚度0.150.150.5mm0.5mm。枯燥后即可运用。枯燥后即可运用。2活化活化 薄板首先薄板首先风干，否那么湿板一下加干，否那么湿板一下加热到高到高温，烘出的薄板很酥松，

61、运用效果不好。温，烘出的薄板很酥松，运用效果不好。 氧化氧化铝G板在板在150 160oC, 烘烘4小小时(级左右左右) 硅胶硅胶G板在板在110oC烘烘1小小时 薄板薄板经活化后，一定要活化后，一定要贮藏在密藏在密闭的枯燥的枯燥器或烘箱中器或烘箱中备用。用。四、展开剂、点样和展开1展开剂的选择展开剂的选择吸附层析：根据极性的不同来选择流动相吸附层析：根据极性的不同来选择流动相a活度小活度小b微量环技术微量环技术c微型薄层微型薄层分配层析：根据试样中各组分在展开剂中溶分配层析：根据试样中各组分在展开剂中溶解度的不同和纸层析类似解度的不同和纸层析类似展开剂的选择展开剂的选择2、点样：快，量适当、

62、点样：快，量适当适当的点样量，集中的斑点是得到一个好适当的点样量，集中的斑点是得到一个好的层析的必要条件。如何才适当？不同的分别的层析的必要条件。如何才适当？不同的分别要求、不同的薄板有厚有薄、不同的吸附要求、不同的薄板有厚有薄、不同的吸附剂性能不一，需求不同的点样量。从以下剂性能不一，需求不同的点样量。从以下图可见：点样量少了，不易检出；点样量多了，图可见：点样量少了，不易检出；点样量多了，易拖尾或分散，影响分别效果。易拖尾或分散，影响分别效果。0.12503000.50.30.1Rfg 用微量注射器或玻璃毛细管汲取一定量试样点在原点上。试样点的直径普通应小于5mm。可并排点多个试样同时展开

63、。15cm2.5cm1.5cm溶剂前沿溶剂前沿纯物质的鉴定，假设又有高灵敏度的显色剂，点样量只需g或ng；假设进展天然物或中间产物的分别时，点样量需50 g几百微克；假设进展制备色谱，进样量可达1mg。点样时可用内径约1mm，管口平整的毛细管或微量吸管汲取试液后，悄然接触板面，分数次滴加样品。留意点：留意点：a.溶解试样的溶剂最好是挥发性的溶解试样的溶剂最好是挥发性的b.点样宜分几次点加点样宜分几次点加,即点一次后即点一次后, 用吹风机的冷用吹风机的冷风吹干风吹干, 再点再点, 再吹干再吹干, ., 反复反复,直到点直到点完所要求的量完所要求的量c. 点样量的体积尽能够小些点样量的体积尽能够小

64、些(2 10L左右左右)d. 点样最好是在密闭的室中或比较枯燥的环境下点样最好是在密闭的室中或比较枯燥的环境下完成完成, 防止薄板吸水降低活性防止薄板吸水降低活性.3、展开、展开薄层的展开需在密闭的器皿中进展，密闭容薄层的展开需在密闭的器皿中进展，密闭容器运用展开溶剂预先饱和。展开方式和纸层析一器运用展开溶剂预先饱和。展开方式和纸层析一样。但不加粘合剂的薄板只能作近程度展开与样。但不加粘合剂的薄板只能作近程度展开与平面成平面成1020o倾角的上行或下行展层而不能垂倾角的上行或下行展层而不能垂直展层。直展层。a.上行展开：上行展开： 把点好样品的薄板浸入把点好样品的薄板浸入0.5cm深的适宜展开

65、剂中，当展开剂挪深的适宜展开剂中，当展开剂挪动至离起点约动至离起点约10 20cm处处(约约30min)，将薄板取出放平，用铅，将薄板取出放平，用铅笔或小针记下溶剂前沿的位置后，笔或小针记下溶剂前沿的位置后，在室温枯燥或烘箱内枯燥，测其在室温枯燥或烘箱内枯燥，测其Rf值。值。留意：每次的展层间隔要固定，以便留意：每次的展层间隔要固定，以便Rf值的反复值的反复五、薄层层析中定性检出和定量测定五、薄层层析中定性检出和定量测定1定性：展开终了，取出记下展开剂前缘位置定性：展开终了，取出记下展开剂前缘位置 A、显色：、显色： a. 紫外光照射紫外光照射 b. 蒸气熏：固体碘，浓氨水，溴蒸气熏：固体碘，

66、浓氨水，溴 c. 喷显色剂：雾滴细而均匀防止损伤薄层外表喷显色剂：雾滴细而均匀防止损伤薄层外表 B、计算、计算Rf值值,与文献值对照与文献值对照 由于由于Rf值受诸多要素的影响，最好用规范物在值受诸多要素的影响，最好用规范物在 同一板上展开比较。同一板上展开比较。定性检出定性检出 a. 本身是有色物，可以直接观测斑点的位置和颜色； b. 本身无色但在紫外线的照射下会发出不同颜色的荧光 c. 薄板本身有荧光硅胶HF254+366, 硅胶GF254, .), 欲测物吸收紫外线, 在荧光背景下呈暗色。 d.多数有机物, 喷10 50% H2SO4(或铬硫酸)并在100 120oC加热, 使有机物碳化

67、, 察看加热中有机物颜色变化及碳化斑点位置, 可以推断物质的化学性质。e. 喷显色剂或荧光试剂不含粘合剂的薄板不能喷，只能浸，以免把吸附剂吹散表表 主要显色试剂主要显色试剂试剂配制及使用方法检出范围浓H2SO4喷雾, 100 120oC , 观察颜色变化高级醇、醛、酮、甾体H2SO4-K2Cr2O75g K2Cr2O7+100mL H2SO4, 喷雾,280oC观察颜色变化全部有机物2,7-二氯荧光黄(0.2%乙醇)喷雾，紫外线照射全部有机物I2-KI1g I2 +10gKI溶于50mLH2O中，加入2mLHAc，稀释至100mL，喷雾生物碱试剂配制及使用方法检出范围溴甲酚绿 0.04g溶于1

68、00mL乙醇中，以0.1 mol / L NaOH调至蓝色刚消失， pH3.6显黄色羧基酸Ag(NH3)2+2.6gAgNO3溶于50mL水，加入NH3H2O至沉淀刚好消失还原性物质、醛、还原糖茚三酮0.5%丙酮溶液胺类（如麻黄碱、氨基酸等）FeCl31g溶于100mL酚羟基、鞣质、黄酮磷钼酸5g溶于100mL95%乙醇脂肪、甾类、类脂、三萜酸、生物碱六目六目视比比较半定量法半定量法1试液与一系列不同浓度的规范溶液并排点试液与一系列不同浓度的规范溶液并排点样于同一薄层上展开后比较斑点的大小及颜样于同一薄层上展开后比较斑点的大小及颜色的深浅。例如检验药物中杂质能否超标色的深浅。例如检验药物中杂质

69、能否超标2丈量斑点面积：丈量斑点面积：3从薄层上将组分洗脱下来测定从薄层上将组分洗脱下来测定4用薄层色谱扫描仪扫描定量用薄层色谱扫描仪扫描定量七、特点及运用七、特点及运用简单、方便、及操作、方便、及操作费用低。用低。可可以以在在一一块层析析板板上上同同时展展开开多多个个试样。采采用用方方形形薄薄层板板还可可以以方方便便的的进展展二二维展展开开，即即按按普普通通方方法法展展开开后后，改改动方方向向和和展展开开剂再再次次展展开开，进一一步改善分步改善分别效果。效果。试样普通不需普通不需经预处置即可分置即可分别。 缺陷缺陷: :缺缺陷陷：分分别效效率率较低低，不不适适用用挥发性性试样分分别。定性定量

70、不便。定性定量不便。运运用用：在在染染料料、农药、医医药、有有机机酸酸碱碱类化化合合物物、糖糖类化化合合物物、氨氨基基酸酸、蛋蛋白白质及及中中草草药中中有有效效成成分分的的分分别分分析析中中经常常被被运运用用。也也可可以以用用于于无无机机离离子子的的分分别。还经常常作作为高高效液相色效液相色谱的一种的一种预试方法。方法。运用：运用：(1)氨基酸分别氨基酸分别薄层薄层:硅胶硅胶G板板; 流动相流动相: 正丁醇正丁醇:醋酸醋酸:水水=3:1:1Rf值值:丙氨酸丙氨酸0.27, 氨基辛酸氨基辛酸0.60, 精氨酸盐酸盐精氨酸盐酸盐0.08, 磺磺基丙氨酸基丙氨酸0.14, 胱氨酸盐酸盐胱氨酸盐酸盐0

71、.16, 二羟基苯丙氨酸二羟基苯丙氨酸0.45, 甘氨酸甘氨酸0.22, 组氨酸盐酸盐组氨酸盐酸盐0.06, 羟脯氨酸羟脯氨酸0.20, 亮氨酸亮氨酸0.47, 甲硫氨酸甲硫氨酸0.40, 颉氨酸颉氨酸0.36, 苯丙氨酸苯丙氨酸0.49, 脯氨脯氨酸酸0.19, 肌氨酸肌氨酸0.17, 苏氨酸苏氨酸0.25, 色氨酸色氨酸0.56(2)核苷核苷,核苷酸核苷酸, 寡核苷酸的分别寡核苷酸的分别薄层薄层:硅胶硅胶F254 流动相流动相: 正丁醇正丁醇:HAc:H2O = 5:2:3Rf值值:腺苷腺苷-5-磷酸磷酸0.35, 胞苷胞苷-5-磷酸磷酸0.24, 脱氧腺苷脱氧腺苷-5-磷酸三氯乙酯磷酸三

72、氯乙酯0.74, 脱氧胸苷酰脱氧胸苷酰(3,5)脱氧胸腺嘧啶脱氧胸腺嘧啶核苷核苷0.61, 5-甲基尿苷甲基尿苷-5-磷酸酯磷酸酯(胸苷胸苷-5-磷酸磷酸)0.37, 5-0-磷酸基脱氧胸腺嘧啶核苷酰磷酸基脱氧胸腺嘧啶核苷酰-(35)脱氧胸腺苷酰脱氧胸腺苷酰-(3,5)脱氧胸苷脱氧胸苷0.19, 5-0-三氯乙基三氯乙基-磷酸脱氧腺苷酰磷酸脱氧腺苷酰(3,5)脱氧腺苷脱氧腺苷0.68, 尿苷尿苷-5-磷酸磷酸0.30(3)类固醇、固醇的分别类固醇、固醇的分别薄层：薄层：Al2O3 流动相：流动相：C6H6:乙酸乙酯乙酸乙酯=4:1Rf值值: 胆甾醇胆甾醇0.83, 别色胆甾醇别色胆甾醇0.77, -谷甾醇谷甾醇0.63, 豆甾醇豆甾醇0.62, -谷甾烷醇谷甾烷醇0.44(4)碱金属的分别碱金属的分别薄层薄层: 硅胶卷硅胶卷 流动相：含流动相：含0.1mol/L I2 的硝基甲烷的硝基甲烷: C6H6 = 40:60Rf值值:Cs+0.55, Rb+ 0.47, K+ 0.36, NH4+ 0.24, Na+ 0.18, Li+ 0.06