《植物生理学实验赤霉素对淀粉酶的诱导ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《植物生理学实验赤霉素对淀粉酶的诱导ppt课件（23页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、赤霉素赤霉素诱导-淀粉淀粉酶的合成的合成*提早翻开水浴锅和分光光度计提早翻开水浴锅和分光光度计 赤霉素赤霉素GAs是在研是在研讨水稻水稻恶苗病是苗病是发现的。的。赤霉素的生理效赤霉素的生理效赤霉素的生理效赤霉素的生理效应应包括包括包括包括促促促促进进茎的伸茎的伸茎的伸茎的伸长长生生生生长长抑抑抑抑制制制制遗传遗传上的矮生性状、上的矮生性状、上的矮生性状、上的矮生性状、突破休眠、替代低温暖突破休眠、替代低温暖突破休眠、替代低温暖突破休眠、替代低温暖长长日照促日照促日照促日照促进进抽苔开花、抽苔开花、抽苔开花、抽苔开花、促促促促进进黄瓜雄花分化、促黄瓜雄花分化、促黄瓜雄花分化、促黄瓜雄花分化、促进
2、进坐果、坐果、坐果、坐果、诱导单诱导单性性性性结实结实等。等。等。等。一、一、实验目的目的 验证赤霉素赤霉素对-淀粉淀粉酶诱导构成的构成的生理作用生理作用; ; 掌握掌握对该酶活性定性定量活性定性定量测定的原定的原理与方法。理与方法。二、实验原理：种子萌生过程中耗费贮藏物质，需求在一系列酶种子萌生过程中耗费贮藏物质，需求在一系列酶的催化作用下才干进展。这些酶有的曾经存在于的催化作用下才干进展。这些酶有的曾经存在于枯燥种子中，有的需求在种子吸水后重新合成。枯燥种子中，有的需求在种子吸水后重新合成。 种子萌生种子萌生种子萌生种子萌生过过程中淀粉的分解主要在淀粉程中淀粉的分解主要在淀粉程中淀粉的分解
3、主要在淀粉程中淀粉的分解主要在淀粉酶酶催化下完成。淀粉催化下完成。淀粉催化下完成。淀粉催化下完成。淀粉酶酶在植物中存在在植物中存在在植物中存在在植物中存在多种方式：多种方式：多种方式：多种方式：-淀粉淀粉淀粉淀粉酶酶、-淀粉淀粉淀粉淀粉酶酶 - -淀粉淀粉淀粉淀粉酶酶存在于枯燥种子中，而存在于枯燥种子中，而存在于枯燥种子中，而存在于枯燥种子中，而-淀粉淀粉淀粉淀粉酶酶不存在于枯燥种子中，需求在种子吸水不存在于枯燥种子中，需求在种子吸水不存在于枯燥种子中，需求在种子吸水不存在于枯燥种子中，需求在种子吸水萌萌萌萌动动后重新合成。后重新合成。后重新合成。后重新合成。实验证明，启明，启动-淀粉淀粉酶合
4、成的化学信使是赤霉素。合成的化学信使是赤霉素。假假设没有胚没有胚释放赤霉素，放赤霉素，-淀粉淀粉酶就不能合成。就不能合成。赤霉素赤霉素诱导-淀粉淀粉酶的合成的合成 大麦种子萌生大麦种子萌生时胚中胚中产生生的的GAGA，经过胚乳分散到糊粉胚乳分散到糊粉层细胞，胞，诱导-淀粉淀粉酶的构成，的构成，该酶又分散到胚乳使淀粉水解。又分散到胚乳使淀粉水解。 糊粉糊粉层细胞是胞是GAGA作用的作用的靶靶细胞。胞。靶靶细胞：接受激素，并胞：接受激素，并产生特异理化反响的生特异理化反响的细胞。胞。胚胚胚胚释放释放GAGA-淀粉淀粉淀粉淀粉酶酶基因表达基因表达基因表达基因表达-淀粉淀粉淀粉淀粉酶酶催化淀粉水解催化
5、淀粉水解催化淀粉水解催化淀粉水解为为糖糖糖糖糊糊粉粉层细胞胞胚胚乳乳赤霉素赤霉素诱导-淀粉淀粉酶的合成的合成-淀粉淀粉淀粉淀粉酶酶赤霉素赤霉素赤霉素赤霉素诱导诱导-淀粉淀粉淀粉淀粉酶酶的机制的机制的机制的机制 赤霉素和赤霉素和质膜上的受体膜上的受体结合，合，经过膜上膜上G蛋白介蛋白介导的信号的信号传送系送系统，活化，活化细胞内既存的活化因子，胞内既存的活化因子，该活化因子活化因子进入核内使入核内使GA-MYB基因脱阻抑，合成基因脱阻抑，合成GA-MYB蛋白。蛋白。GA-MYB蛋白蛋白为-淀粉淀粉酶基因启基因启动子上子上转录因子，因子，诱导活化活化-淀粉淀粉酶 mRNA的的转录，最后翻，最后翻译
6、成成-淀粉淀粉酶，并分泌到胚乳中，并分泌到胚乳中发扬作作用用 外加的赤霉素可以替代胚的外加的赤霉素可以替代胚的释放作用，从而放作用，从而诱导-淀粉淀粉酶的合成。的合成。 这个反响非常个反响非常专注，被用来作注，被用来作为赤霉素的生物赤霉素的生物鉴定法。定法。 去胚的吸去胚的吸胀大麦种子外加赤霉素，大麦种子外加赤霉素，诱导-淀粉淀粉酶构构成，催化淀粉水解成，催化淀粉水解为糖。糖。实验证明：实验证明：大麦种子去胚后，大麦种子去胚后，淀粉不分解；淀粉不分解；去胚后，加去胚后，加GA处置，处置，淀粉水解；淀粉水解；去糊粉层，淀粉去糊粉层，淀粉不水解；不水解；去糊粉层，加去糊粉层，加GA处处置，淀粉不水
7、解。置，淀粉不水解。不产生不产生GA短少靶细胞短少靶细胞短少靶细胞短少靶细胞这一性质曾经运用于啤酒工业。这一性质曾经运用于啤酒工业。GA对大麦大麦糊粉糊粉层产生生-淀粉淀粉酶的影响的影响无胚种子无胚种子碘碘碘碘 I2 KI I2 KI遇淀粉或糊精会出遇淀粉或糊精会出遇淀粉或糊精会出遇淀粉或糊精会出现现不同的不同的不同的不同的颜颜色。色。色。色。淀粉的聚合度和生成碘包合物的淀粉的聚合度和生成碘包合物的淀粉的聚合度和生成碘包合物的淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜颜色：色：色：色： 聚合度聚合度3.83.87.47.412.912.9 18.318.3 20.220.229.329.334.734.7
8、以上以上以上以上颜色颜色无色无色淡红淡红红红棕红棕红紫色紫色蓝紫色蓝紫色蓝色蓝色测定根据：碘定根据：碘试法法 淀粉可与淀粉可与 I2 -KI 显蓝色，而淀粉分解的色，而淀粉分解的产物复原糖不能与物复原糖不能与 I2 -KI 显色，可以定性和定量色，可以定性和定量地分析地分析-淀粉淀粉酶的活性。的活性。 经过碘碘试法，比色法，比色测定淀粉在定淀粉在酶催化反响催化反响过程中的耗程中的耗费量，可以定性和定量地分析量，可以定性和定量地分析-淀淀粉粉酶的活力。的活力。三、三、实验资料：料： 大麦种子大麦种子 实验设计： 无胚、无胚、 有胚、有胚、 无胚无胚GA处置置 GA32108mol/L四、实验操作
9、步骤四、实验操作步骤 规规范曲范曲范曲范曲线线的的的的绘绘制略制略制略制略 取不同取不同取不同取不同浓浓度的淀粉度的淀粉度的淀粉度的淀粉0 0、1010、2020、3030、4040、50 50 g/mlg/ml各各各各2.0ml2.0ml，分，分，分，分别别参与参与参与参与I2-KII2-KI溶液溶液溶液溶液2.0ml2.0ml，蒸，蒸，蒸，蒸馏馏水水水水5.0ml5.0ml，充分，充分，充分，充分摇摇匀，于波匀，于波匀，于波匀，于波长长580nm580nm下下下下测测定吸光度定吸光度定吸光度定吸光度值值，以淀粉，以淀粉，以淀粉，以淀粉浓浓度度度度为为横坐横坐横坐横坐标标，吸光度，吸光度，吸
10、光度，吸光度值为纵值为纵坐坐坐坐标标制造制造制造制造规规范曲范曲范曲范曲线线。 C (g/ml) = 151.97D580+ 0.058 C (g/ml) = 151.97D580+ 0.058 R2=0.9995 R2=0.9995( (一选种与切种一选种与切种: :留意留意: 必需必需严厉区区分有胚、无胚半粒分有胚、无胚半粒, 教教师现场检查, 出出错者批判并扣分者批判并扣分! 选取大小一致、安康的大选取大小一致、安康的大麦种子麦种子8080粒，用刀片将每粒粒，用刀片将每粒种子横切成两半，无胚的半种子横切成两半，无胚的半粒和有胚的半粒。粒和有胚的半粒。有胚有胚无胚无胚处理处理编号编号醋酸醋
11、酸缓冲液缓冲液mlml赤霉素液赤霉素液mlml蒸馏水蒸馏水 mlml试验材料用量试验材料用量P 1P 14 41 10 01 11010个有胚半粒个有胚半粒个有胚半粒个有胚半粒O 5O 58 81 10 01 11010个无胚半粒个无胚半粒个无胚半粒个无胚半粒G9G912121 11 10 01010个无胚半粒个无胚半粒个无胚半粒个无胚半粒注：注：1ml1ml溶液的吸取用溶液的吸取用1 1个枪头即可，个枪头即可， 移取顺序移取顺序醋缓、水、赤霉素溶液。醋缓、水、赤霉素溶液。二淀粉酶的诱导二淀粉酶的诱导取取1212只离心试管，编号，按下表参与各种溶液和资料只离心试管，编号，按下表参与各种溶液和资
12、料于于30下振下振荡培育培育24小小时处理处理重复重复0.1淀粉淀粉磷酸液磷酸液mlml培养液培养液mlml3030保温时间保温时间minminI2-KI溶液溶液mlml蒸馏水蒸馏水mlmlP 141.8有胚有胚0.2摇匀摇匀1025O 581.8无胚无胚0.2摇匀摇匀1025G9121.8无胚无胚+GA0.2摇匀摇匀1025注：注：1.9ml1.9ml、2ml2ml、5ml5ml溶液的移取用量程溶液的移取用量程1000-50001000-5000LL的加样器，的加样器， 要使用配套的大号枪头，要使用配套的大号枪头，淀粉液淀粉液、I I2 2-KI-KI、水水 分别要换枪头。分别要换枪头。 0
13、.1ml 0.1ml用小加样器和配套小枪头，用小加样器和配套小枪头，培养液三种培养液三种分别要换小枪头。分别要换小枪头。三淀粉三淀粉酶活性分析活性分析从恒温振荡箱内取出昨日对应时间段培育的资料，按下表处置从恒温振荡箱内取出昨日对应时间段培育的资料，按下表处置:波波长580nm下下测定吸光度定吸光度比色比色应快速完成，防止延快速完成，防止延时误差差.空白空白: 1.8ml淀粉磷酸液淀粉磷酸液和和0.2ml培育液培育液换成磷成磷酸酸缓冲液，其它一冲液，其它一样.部分本卷须知部分本卷须知 测测定定定定-淀粉淀粉淀粉淀粉酶酶活性先运用其他班曾活性先运用其他班曾活性先运用其他班曾活性先运用其他班曾经诱导
14、经诱导24h24h24h24h的溶液，的溶液，的溶液，的溶液，每每每每4 4 4 4人取用震人取用震人取用震人取用震荡荡器内他人器内他人器内他人器内他人样样品一套品一套品一套品一套 ( ( ( (剩余倒掉剩余倒掉剩余倒掉剩余倒掉) ) ) )； 取用后用本人做好的取用后用本人做好的取用后用本人做好的取用后用本人做好的补齐补齐。处处置置置置编编号必需准确，号必需准确，号必需准确，号必需准确，严厉严厉按按按按处处置置置置顺顺序排放，序排放，序排放，序排放，请请放入相放入相放入相放入相应时间应时间的振的振的振的振荡荡器内。器内。器内。器内。 0.1% 0.1% 0.1% 0.1%淀粉磷酸溶液放置在冰
15、箱内，用后淀粉磷酸溶液放置在冰箱内，用后淀粉磷酸溶液放置在冰箱内，用后淀粉磷酸溶液放置在冰箱内，用后请请放回原放回原放回原放回原处处。 试试管架上的管架上的管架上的管架上的试试管和离心管用后管和离心管用后管和离心管用后管和离心管用后请补齐请补齐，试试管刷干管刷干管刷干管刷干净净倒置倒置倒置倒置. . . .选种、切种选种、切种(严厉区分有胚、无胚严厉区分有胚、无胚)淀粉淀粉酶的的诱导(30下培育下培育24h)酶提液酶提液- -昨日昨日0.1ml0.1ml30保温保温15minI2-KI溶液溶液2.0mL 蒸馏水蒸馏水5.0mL淀粉液淀粉液1.9ml计计算算算算比色比色比色比色580nm)580
16、nm)580nm)580nm)空白为？空白为？操作操作流程流程赤霉素赤霉素赤霉素赤霉素对对 淀粉淀粉淀粉淀粉酶酶的的的的诱导诱导构成数据构成数据构成数据构成数据记载记载表表表表无胚无胚有胚有胚无胚无胚GAGA重复1重复2重复3重复4平均值淀粉含量四结果计算四结果计算根据规范曲线计算淀粉的含量：根据规范曲线计算淀粉的含量：C (g/ml) = 151.97D580+0.058 R2=0.9995处置置O O为淀粉的原始量淀粉的原始量X X 处置置P P、G G分分别为反响后淀粉的剩余量反响后淀粉的剩余量Y Y淀粉水解量（淀粉水解量（% %）=X-Y100X* 需求对结果进展两两对比分析需求对结果
17、进展两两对比分析思索题思索题1. 本实验为何要将大麦种子分成有胚和无胚半粒本实验为何要将大麦种子分成有胚和无胚半粒? 2. 为何处置为何处置O和处置和处置P中都没有参与赤霉素溶液，但中都没有参与赤霉素溶液，但反响完后两者溶液的吸光值却不同反响完后两者溶液的吸光值却不同 ? 3. 影响本实验效果的能够要素有哪些？试分析阐明影响本实验效果的能够要素有哪些？试分析阐明其能够的影响是怎样的？如何改良？其能够的影响是怎样的？如何改良？ 结果记录：记载表教师签字 用品洗刷干净，检查摆放整齐、齐全 报告教师，经检查赞同可离去 值日生担任留意: 清理分光光度计、比色皿、台面清洗。下一个实验：地点：B120# 第11周植物组织中超氧物歧化酶活力的测定(实验39)
