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1、1培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。2培养基按照物理性质可分为液体培养基液体培养基 半固体培养基半固体培养基和固体培养基固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。3按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基选择培养基和鉴定鉴定培
2、养基培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质某种化学物质，以抑制不需要的抑制不需要的微生物生长，促进所需要的促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指某种指示剂或化学药品示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。4培养基的化学成分包括 水水 、 无机盐无机盐 、 碳源碳源 、 氮源氮源 、特殊营养物质特殊营养物质等。碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养异养微生物只能利用有机碳源。单质碳单质碳不能作为碳源。氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、
3、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物只有固氮微生物才能利用N2。5培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性酸性，培养细菌细菌是需要将pH调至中性或微碱性中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件6无菌技术获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验
4、操作应在酒精灯火焰酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染操作者自身被微生物感染。7消毒与灭菌的区别消毒消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法煮沸消毒法，巴氏消毒法巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒紫外线消毒。灭菌灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼
5、烧灭菌灼烧灭菌、干热灭菌干热灭菌、高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌。灭菌方法：接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱 ； 培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅 。表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯 。8、制作牛肉膏蛋白胨固体培养基（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。（2）倒平板操作的步骤：将灭过菌灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手右手拿装有培养基的锥形瓶，左手左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰火焰。用左手的拇指和食指将培养皿打开
6、一条稍大于瓶口的打开一条稍大于瓶口的缝隙缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约1020mL）倒入培养皿，左手立即立即盖上培养皿的皿盖。等待平板冷却凝固，大约需510min。然后，将平板倒过来倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。倒平板操作的讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的
7、培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的培养基表面的水分更好地挥发水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 9、纯化大肠杆菌（1）微生物接种的方法最常用的是平板划线法平板划线法和稀释涂稀释涂布平板法布平板法。（2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作稀释操作和涂布平板操作涂布平板操作两步。（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落菌落，以便于纯化菌种。
