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1、油菜苗期菌核病抗性鉴定 实验室苗期菌丝接种鉴定法方法简单易行，实验室苗期菌丝接种鉴定法方法简单易行，鉴定周期短，不受自然环境影响，适于对大量材料鉴定周期短，不受自然环境影响，适于对大量材料的筛选。的筛选。 另据初步研究，苗期菌丝接种鉴定表现抗另据初步研究，苗期菌丝接种鉴定表现抗菌材料，在花期仍表现抗病。菌材料，在花期仍表现抗病。 在本实验中只学习和掌握苗期菌丝块接种在本实验中只学习和掌握苗期菌丝块接种鉴定法。鉴定法。 二、内容说明二、内容说明（一）用品（一）用品 油油菜菜不不同同品品种种种种子子（包包括括抗抗病病品品种种如如中中油油821821，感感病病品品种种如如8403984039的的种种
2、子子）、生生长长室室、平平底底塑塑料料盘盘（6030460304cmcm）、园园土土、绿绿高高一一号号液液（北北京京北北农农绿绿高高科科技技发发展展有有限限公公司司出出产产）、马马铃铃薯薯、纱纱布布、葡葡萄萄糖糖、琼琼脂脂胶胶、试试管管、三三角角瓶瓶、解解剖剖刀刀、接接种种环环等。等。 三、所需用品和操作方法 （1 1）土土壤壤准准备备：取取较较肥肥沃沃的的菜菜园园土土，清清除除石石块块，晒晒干敲碎，然后装入塑料盘中（需装满）。干敲碎，然后装入塑料盘中（需装满）。（二）、主要作法1. 供试苗的种植（2 2）油油菜菜播播种种：保保证证出出苗苗后后能能保保留留生生长长一一致致苗苗3030株株。每每
3、1010个品种设对照。个品种设对照。（二）、主要作法1. 供试苗的种植（3 3）土土壤壤消消毒毒：播播种种后后用用2000300020003000倍倍的的绿绿亨亨一一号号溶液浇透土壤进行消毒。溶液浇透土壤进行消毒。（二）、主要作法1. 供试苗的种植（4 4）播后管理：）播后管理： 播播后后将将塑塑料料盘盘放放于于生生长长室室内内，在在出出苗苗期期间间，室室内内温温度度控控制制在在2020以以下下，在在出出真真叶叶后后，控控制制20202424左右，每左右，每2 2天喷水一次。天喷水一次。（二）、主要作法1. 供试苗的种植生生长长室室生长室外管理生长室外管理（1 1）PDAPDA培养基的制作：培
4、养基的制作： 取取 马马 铃铃 薯薯 200200g g， 洗洗 净净 去去 皮皮 切切 碎碎 ， 加加 水水10001000mLmL，煮煮沸沸3030minmin，用用纱纱布布过过滤滤，将将滤滤液液加加水水补补足足到到10001000mLmL，加加葡葡萄萄糖糖10201020g g和和琼琼脂脂胶胶17201720g g，加加热热溶溶化化，用用纱纱布布过过滤滤。然然后后依依需需要要，分分别别装装入入试试管管（用用作作贮贮藏藏菌菌种种），或或装装入入培培养养皿皿（用用作作培培养养菌菌丝丝接种菌），然后在高压灭菌锅内进行灭菌。接种菌），然后在高压灭菌锅内进行灭菌。（2 2）菌丝的培养：）菌丝的培养
5、： 取取贮贮存存平平板板菌菌核核病病的的菌菌丝丝，在在无无菌菌条条件件下下移移下下装装有有PDAPDA培培养养基基的的培培养养皿皿上上，每每皿皿一一小小块块，放放在在培培养养皿皿中中间间，在在22252225下下培培养养3434天天，以以菌菌丝丝长长满满，而又没有结核为宜。而又没有结核为宜。（1 1）接种：）接种：cmcm小小块块，将将有有菌菌丝丝的的一一面面贴贴于于叶叶片片上上（注注意意不不要要贴贴在叶脉上），每株接种在叶脉上），每株接种1 1片叶，每叶接种片叶，每叶接种1 1小块。小块。 见下图见下图 （二）、主要作法3. 菌丝块的接种与管理（2 2）管管理理：接接种种后后在在232623
6、26温温度度和和85%95%85%95%相相对对湿湿度度下下培培养养5757天天后后即即可可调调查查（注注意意接接种种后后前前2 2天天相相对对湿湿度度应应保保持持95%95%以以上上，以以确确保保发发病病，后后3535天天保保持持85%85%左右，使接种菌不致于腐烂）。左右，使接种菌不致于腐烂）。（二）、主要作法3. 菌丝块的接种与管理 在在试试验验中中当当感感病病品品种种的的发发病病率率超超过过40%40%以以上上方方为有效鉴定。为有效鉴定。 一般将病害等级分为一般将病害等级分为5 5个等级，即：个等级，即：0 0级：无病。级：无病。1 1级：病斑面积占接种叶面积级：病斑面积占接种叶面积1
7、0%10%以下。以下。2 2级：病斑面积占接种叶面积级：病斑面积占接种叶面积1030%1030%。3 3级：病斑面积占接种叶面积级：病斑面积占接种叶面积3050%3050%。4 4级：病斑面积占接种叶面积级：病斑面积占接种叶面积50%50%以上。以上。（二）、主要作法4. 病害等级调查（1）计算发病率）计算发病率（二）、主要作法 5. 统计方法和抗性分级标准 （2）计算病情指数）计算病情指数式中：式中：Gi为病害级别；为病害级别；Ni为调查株数；为调查株数； i为为0、1、2k,GK为最高级别。为最高级别。（二）、主要作法 5. 统计方法和抗性分级标准 （4）抗性分级标准：）抗性分级标准： RRI-1.2-0.70.92.0抗性抗性分数分数高抗高抗中抗中抗低抗低抗低感低感中感中感高感高感代号代号HRMRLRLSMSHS（二）、主要作法 5. 统计方法和抗性分级标准
