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1、 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）金黄色葡萄球菌定性检验金黄色葡萄球菌定性检验1 1 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分） 1. 了解金黄色葡萄球菌生物学特性。 2. 掌握金黄色葡萄球菌定性检测程序和检验方法。 学习目的与要求2 2 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）一、生物学特性一、生物学特性菌体形态及培养特征菌体形态及培养特征革兰氏阳性球菌，直径为革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.0微米，镜检时呈单个、成微米，镜检时呈
2、单个、成对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。3 3 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）大多数菌株产生大多数菌株产生类胡萝卜素类胡萝卜素，使细胞团呈现出，使细胞团呈现出深橙色深橙色到浅黄色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄金黄色葡萄球菌色葡萄球菌(高盐甘露醇平板高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为：金黄色葡萄球菌为淡黄淡黄色菌落色菌落；其他葡萄球菌为；其他葡萄球菌为白色菌落白色菌落)。4 4 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检
3、验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）n n n n最适生长温度最适生长温度37，最适，最适pH为为7.4；n n兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；n n可在高盐环境下生长，可在高盐环境下生长，15%氯化钠环境下氯化钠环境下还能生长；还能生长；n n一般用含一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。氯化钠肉汤增菌。5 5 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）n n n n所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来
4、源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。浆。n n金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放脂肪酸。在的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生平板产生磷脂环。磷脂环。6 6 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）生物学特性生物学特性 致致 病病 性性金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：决于其产生的毒素
5、和侵袭性酶：a.溶血素：溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；在体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环血平板培养出现溶血环。b.杀白细胞素：杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；可破坏人的白细胞和巨噬细胞；c.血浆凝固酶：血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。细胞的吞噬作用。d.耐热核酸酶耐热核酸酶e.肠毒素：肠毒素：引起急性胃肠炎。引起急性胃肠炎。7 7 金色葡
6、萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）葡萄球菌性葡萄球菌性食物中毒食物中毒是葡萄球菌是葡萄球菌肠毒素肠毒素所引起的疾病，所引起的疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。出而且普遍，腹痛、腹泻次之。当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。小时即可相当数量的肠毒素。8 8 金色葡萄球菌检
7、验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）二、检验程序与操作方法二、检验程序与操作方法食品安全国家标准食品安全国家标准GB 4789.10-2016食品微生物学检验食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验第一法第一法 金黄色葡萄球菌定性检验金黄色葡萄球菌定性检验 9 9 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）检样检样25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质Baird-parker平板，血平板BHI肉汤和营养琼脂小斜面涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报 告3636 1 1 3636
8、 1 1 18h- 24hBPBP平板平板 24h-48h血平板血平板 18h-24h3636 1 1 18h- 24h检样检样25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质Baird-parker平板，血平板BHI肉汤和营养琼脂小斜面涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报 告3636 1 1 3636 1 1 18h- 24hBPBP平板平板 24h-48h血平板血平板 18h-24h3636 1 1 18h- 24h检样检样25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质Baird-parker平板，血平板BHI肉汤和营养琼脂小斜面涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报 告3636 1
9、1 3636 1 1 18h- 24hBPBP平板平板 24h-48h血平板血平板 18h-24h3636 1 1 18h- 24h检样检样25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质Baird-parker平板，血平板BHI肉汤和营养琼脂小斜面涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报 告3636 1 1 3636 1 1 18h- 24hBPBP平板平板 24h-48h血平板血平板 18h-24h3636 1 1 18h- 24h检样检样25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质1010 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分
10、）检验程序检验程序 样品处理样品处理 称取称取25g（mL）样品至盛有）样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉氯化钠肉汤的无菌均质杯内汤的无菌均质杯内,8000r/min10000r/min均质均质1min2min,或放入盛有或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均氯化钠肉汤无菌均质袋中质袋中,用拍击式均质器拍打用拍击式均质器拍打1 min2min。1111 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）检验程序检验程序 增菌增菌 利用金黄色葡萄球菌利用金黄色葡萄球菌耐盐耐盐的特性（最高可耐受的特性（最高可耐受15%的氯化钠），用的氯化钠），用7
11、.5%氯化钠肉汤增菌。氯化钠肉汤增菌。 361培养培养18h24h。1212 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）检验程序检验程序 分离培养（血平板和分离培养（血平板和BP平板）平板）血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的板上产生明显的溶血环溶血环。典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血环。不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血环。1313 金色葡萄球菌检验金色葡萄
12、球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环阳性阳性阴性阴性1414 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）BPBP（贝尔德（贝尔德（贝尔德（贝尔德- - 帕克）平板：帕克）平板：帕克）平板：帕克）平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和矿物元素和矿物元素和矿物元素和矿
13、物元素丙酮酸钠是一种生长促进剂丙酮酸钠是一种生长促进剂丙酮酸钠是一种生长促进剂丙酮酸钠是一种生长促进剂亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色有毒性，并使菌落产生黑色有毒性，并使菌落产生黑色有毒性，并使菌落产生黑色卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制甘氨酸和氯化锂对金黄色葡
14、萄球菌以外的其它菌株有抑制甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。作用。作用。作用。检验程序检验程序分离培养分离培养1515 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分） 在在BP平板上典型菌落为：圆形平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起、湿表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为润、菌落直径为2mm3mm, 颜色呈颜色呈灰黑色至黑色灰黑色至黑色,有光泽有光泽,常有浅色常有浅色(非白色非白色)的边缘的边缘,周围绕以周围绕以不透明圈不透明圈(沉淀沉淀),其外常其外常有一有一清晰带清晰带。当
15、用接种针触及菌落时具有。当用接种针触及菌落时具有黄油样黄油样黏稠感。黏稠感。 有时可见到不分解脂肪的菌株有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清除没有不透明圈和清晰带外晰带外,其他外观基本相同。其他外观基本相同。 从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色其黑色常较典型菌落浅些常较典型菌落浅些, 且外观可能较粗糙且外观可能较粗糙,质地较干燥质地较干燥。 1616 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）B-P平板平板圆形、光滑、黑色有光泽圆形、光滑、黑色有光泽, 周围绕以不透明圈周围绕以不透明圈
16、,其外有清晰带其外有清晰带1717 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜检验程序检验程序 确证鉴定确证鉴定1.革兰氏染色镜检革兰氏染色镜检1818 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）检验程序检验程序 确证鉴定确证鉴定2.血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别的主要试验是测定其凝固酶。的主要试验是测定其凝固酶。试管法试管法
17、 挑取挑取BP平板或血平板上平板或血平板上至少5个可疑菌落（少于（少于5个个全选，分别接种于全选，分别接种于BHI肉汤和营养琼脂小斜面，肉汤和营养琼脂小斜面， 361 培养培养18h-24h。 取取0.5mL无菌生理盐水加入瓶装冻干兔血浆中至完全无菌生理盐水加入瓶装冻干兔血浆中至完全溶解，加入培养后的溶解，加入培养后的BHI肉汤培养物肉汤培养物0.2-0.3mL，振荡摇，振荡摇匀，放匀，放361恒温箱或水浴内，恒温箱或水浴内，每半小时每半小时观察一次，观察观察一次，观察6h，如凝固体积，如凝固体积大于原体积一半大于原体积一半时，判定为阳性。时，判定为阳性。 如结果可疑，从营养琼脂小斜面挑去菌落
18、到如结果可疑，从营养琼脂小斜面挑去菌落到BHI肉汤，肉汤，重复凝固酶试验。重复凝固酶试验。1919 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）不凝固少量、零散凝固明显的块状凝固巨大块凝固完全凝固，倒置不流动阴性阴性阳性阳性2020 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）试管法试管法2121 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）结果报告结果报告n n在在25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。萄球菌。n
19、n即：检出即：检出/ 25g(mL) 或或 未检出未检出/ 25g(mL)2222 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）小结n n了解金黄色葡萄球菌的生物学特性（耐盐，能产毒素、凝固酶等）n n掌握检验流程n n知识点：增菌液，BP平板和血平板的典型菌落特征，凝固酶试验。2323 金色葡萄球菌检验金色葡萄球菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）新旧标准主要差异n n增菌液统一改成了增菌液统一改成了增菌液统一改成了增菌液统一改成了7.5%7.5%氯化钠肉汤氯化钠肉汤氯化钠肉汤氯化钠肉汤 这个标准主要是因为这个标准
20、主要是因为这个标准主要是因为这个标准主要是因为20082008版本参照美国版本参照美国版本参照美国版本参照美国FDAFDA的方法增加了的方法增加了的方法增加了的方法增加了10%10%胰胨大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。胰胨大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。胰胨大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。胰胨大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。n n修改修改修改修改Baird-ParkerBaird-Parker平板的培养时间为平板的培养时间为平板的培养时间为平板的培养时间为24 h24 h48 h48 h，原来是，原来是，原来是，原来是18 h18 h24 h 24 h 或或或或45 h45 h48 h48 h。n n挑取挑取挑取挑取Baird-Parker Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落至少平板或血平板上可疑菌落至少平板或血平板上可疑菌落至少平板或血平板上可疑菌落至少5 5个，个，个，个，20102010版版版版1 1个以上。个以上。个以上。个以上。2424
