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1、第二章第二章 食用菌制种技术食用菌制种技术 v关于制种的几个概念关于制种的几个概念第一节第一节 制种场地、设备、用具及消毒药品制种场地、设备、用具及消毒药品 第二节第二节 三级菌种制作技术三级菌种制作技术v本章重点本章重点4.5学时2021/3/241授课：XXX有关概念有关概念1.1.菌种：由人工方法培育出来的纯双核菌丝体。菌种：由人工方法培育出来的纯双核菌丝体。2.2.母种：由孢子或者组织分离而得到的最初菌种。母种：由孢子或者组织分离而得到的最初菌种。3.3.原种：将母种扩大到新培养基上培育出来的菌丝体。原种：将母种扩大到新培养基上培育出来的菌丝体。4.4.栽栽培培种种：由由原原种种再再扩
2、扩大大接接种种一一次次培培养养而而得得。直直接接应应用于生产。用于生产。5.5.消毒和灭菌。消毒和灭菌。2021/3/242授课：XXX母 种原 种2021/3/243授课：XXX栽培种2021/3/244授课：XXX第一节第一节 制种场地、设备等制种场地、设备等一、一、制种场地制种场地二、二、常用设备常用设备三、三、制种用具制种用具四、四、消毒药品消毒药品2021/3/245授课：XXX一、一、制种场地制种场地闲闲散散房房屋屋均均可可用用。新新建建时时选选择择场场地地要要注注意意：交交通通方便，水电齐全，周围环境要卫生。方便，水电齐全，周围环境要卫生。建建造造可可参参照照 “”字字型型房房，
3、以以方方便便生生产产。包包括括：配配料料室室、灭灭菌菌室室、冷冷却却室室、接接种种室室、菌菌种种培培养养室室、销售室以及库房等。销售室以及库房等。2021/3/246授课：XXX2021/3/247授课：XXX2021/3/248授课：XXX二、二、常用设备常用设备（一）（一）拌料和装料设备拌料和装料设备（二）（二）灭菌设备灭菌设备（三）（三）接种设备接种设备（四）（四）培养设备培养设备 2021/3/249授课：XXX（一）（一）拌料和装料设备拌料和装料设备v拌拌料料设设备备：可可人人工工拌拌料料，也也可可用用拌拌料料机机，有桶式和开放式两种。有桶式和开放式两种。v装装料料设设备备：人人工工
4、装装料料或或用用装装瓶瓶装装袋袋两两用用机机。关关键键是是料料的的松松紧紧度度，可可3-53-5人人合合作作，约约10001000袋袋/h/h。2021/3/2410授课：XXX2021/3/2411授课：XXX（二）（二）灭菌设备灭菌设备v根据灭菌压力：高压灭菌设备和根据灭菌压力：高压灭菌设备和常压灭菌设备常压灭菌设备。1.高高压压灭灭菌菌特特点点：温温度度高高，灭灭菌菌速速度度快快，灭灭菌菌彻彻底底，但每次灭菌量小，投资较大。但每次灭菌量小，投资较大。 高高压压灭灭菌菌设设备备：手手提提式式高高压压灭灭菌菌锅锅。立立式式高高压灭菌锅。压灭菌锅。卧式高压灭菌锅。卧式高压灭菌锅。2021/3/
5、2412授课：XXX2021/3/2413授课：XXX2021/3/2414授课：XXX2.2.常常压压灭灭菌菌特特点点：容容量量大大(0.5-1(0.5-1吨吨料料/ /次次) )，投投资资小，但时间长，灭菌效果较差。小，但时间长，灭菌效果较差。 常常压压灭灭菌菌设设备备：常常压压灭灭菌菌灶灶、灭灭菌菌室室或或灭灭菌菌包包（可利用（可利用节能型多功能蒸汽炉节能型多功能蒸汽炉或普通锅炉）或普通锅炉）。2021/3/2415授课：XXX2021/3/2416授课：XXX2021/3/2417授课：XXX2021/3/2418授课：XXX（三三）接种设备接种设备1.1.洁净工作台洁净工作台：适合接
6、母种和少量原种。：适合接母种和少量原种。2.2.接种箱接种箱：成本低，容量较大，适合各级菌种。：成本低，容量较大，适合各级菌种。3.3.接种帐：适于接栽培袋，但效果稍差。接种帐：适于接栽培袋，但效果稍差。4.4.接种室接种室：与接种帐类似。：与接种帐类似。5.5.电炉和蒸汽接种电炉和蒸汽接种：简易，成功率：简易，成功率80%80%以上。以上。2021/3/2419授课：XXX2021/3/2420授课：XXX2021/3/2421授课：XXX2021/3/2422授课：XXX2021/3/2423授课：XXX（四）四）培养设备培养设备1.1.培培养养室室：要要清清洁洁卫卫生生，有有调调温温设设
7、备备。可可用用于于原原种种、栽栽培培种种培培养养，要要做做一一些些培培养养架架，便便于于菌菌种种检检查查和和提高空间利用率。提高空间利用率。2.2.电热恒温培养箱电热恒温培养箱：温度可调，容积小。：温度可调，容积小。2021/3/2424授课：XXX2021/3/2425授课：XXX2021/3/2426授课：XXX三、三、制种用具制种用具、酒精灯；、酒精灯； 、托盘天平；、托盘天平；、地泵；、地泵； 、水桶、盆、铝锅；、水桶、盆、铝锅；、镊子；、镊子； 、接种钩和接种铲；、接种钩和接种铲；、试管、菌种瓶和菌种袋；、试管、菌种瓶和菌种袋；、漏斗；、漏斗； 、电炉或煤炉；、电炉或煤炉；v另另外外
8、，还还需需温温度度计计、湿湿度度计计、量量筒筒和和量量杯杯、磨口瓶、塑料绳、报纸以及磨口瓶、塑料绳、报纸以及pHpH试纸等。试纸等。2021/3/2427授课：XXX2021/3/2428授课：XXX四、消毒药品四、消毒药品1. 75%酒精酒精 2. 40%甲醛高锰酸钾甲醛高锰酸钾3. 汽雾消毒剂汽雾消毒剂 4. 高锰酸钾（高锰酸钾（0.1%-0.2%）5. 5%石炭酸石炭酸(苯酚苯酚) 6. 1%-2%来苏儿来苏儿7. 2%-5%漂白粉漂白粉 8. 硫磺硫磺v各种药品最好轮换使用，以防产生抗药性。各种药品最好轮换使用，以防产生抗药性。2021/3/2429授课：XXX第二节第二节 三级菌种制
9、作技术三级菌种制作技术一、母种制作技术一、母种制作技术（一）（一）母种培养基制备母种培养基制备 （二）（二）组织分离法组织分离法（三）（三）母种的扩大母种的扩大二、原种制作技术二、原种制作技术（一）（一）原种培养基的制备原种培养基的制备 （二）（二）原种的制作原种的制作三、栽培种制作技术三、栽培种制作技术（一）（一）栽培种培养基制备栽培种培养基制备 （二）（二）栽培种的制作栽培种的制作四、四、菌种污染的原因及防止措施菌种污染的原因及防止措施2021/3/2430授课：XXX一、母种制作技术一、母种制作技术1.1.培养基的概念培养基的概念2.2.常用的母种培养基配方常用的母种培养基配方3.3.母
10、种培养基的制作母种培养基的制作（一）母种培养基的制备（一）母种培养基的制备2021/3/2431授课：XXX1.1.培养基的概念培养基的概念培养基是按照食用菌生长繁殖所需要的各种培养基是按照食用菌生长繁殖所需要的各种营养，用人工方法配制而成的营养基质。营养，用人工方法配制而成的营养基质。2021/3/2432授课：XXX2. 母种培养基配方母种培养基配方(g/1000ml)除配方除配方1 1，其它均需加入，其它均需加入KHKH2 2POPO4 43 3克，克，MgSOMgSO4 41.51.5克，克，VBVB1 12 2片。片。 编号土豆棉籽皮木屑发酵料麸皮葡萄糖琼脂蛋白胨1200202022
11、00202031001005020202-1041001005020205520020205-102021/3/2433授课：XXX3.3.母种培养基的制作母种培养基的制作PDAPDA培养基的制作过程：培养基的制作过程：1)1)煮煮土土豆豆，取取滤滤液液。开开锅锅后后，文文火火煮煮3030minmin，适适当当搅拌，使营养充分溶出。搅拌，使营养充分溶出。2)2)补补足足水水，加加药药品品溶溶化化。琼琼脂脂溶溶解解较较慢慢并并易易溢溢锅锅，烧开后减小火力并搅拌烧开后减小火力并搅拌1min1min左右。左右。2021/3/2434授课：XXX3)分分装装试试管管。常常用用试试管管为为18mm180
12、mm，每每管管约约装培养基装培养基8-10ml。加棉塞后。加棉塞后3个一把绑好。个一把绑好。4)高高压压灭灭菌菌。在在1.1-1.2kg/cm2压压力力下下灭灭菌菌30-40min。灭灭菌菌程程序序：放放入入物物品品，拧拧紧紧锅锅盖盖加加热热，当当压压力力达达到到0.5kg/cm2时时，排排出出冷冷空空气气，关关闭闭放放气气阀阀。压压力力上去后记时，维持所需时间。上去后记时，维持所需时间。2021/3/2435授课：XXX2021/3/2436授课：XXX5)摆摆斜斜面面。灭灭完完菌菌后后，锅锅体体自自然然冷冷凉凉，压压力力降降到到0.5kg/cm2以以下下时时，缓缓慢慢放放气气，气气排排尽尽
13、后后取取出出试试管，趁热摆斜面，管，趁热摆斜面，40以下即可凝固。以下即可凝固。2021/3/2437授课：XXX母母种种培培养养基基制制作作流流程程2021/3/2438授课：XXX（二）菌种组织分离法（二）菌种组织分离法1.1.组织分离的概念、种类和特点组织分离的概念、种类和特点2.2.组织分离的方法组织分离的方法 2021/3/2439授课：XXX1.1.组织分离的概念、组织分离的概念、种类和特点种类和特点概概念念：是是指指在在双双核核菌菌丝丝的的组组织织上上切切取取一一块块组组织织，使使其其在在培培养养基基上上萌萌发发而而获获得得纯纯双双核核菌菌丝丝体体的的方方法法。称作原始母种。称作
14、原始母种。种种类类：据据切切取取组组织织的的来来源源，分分为为子子实实体体组组织织分分离离、菌核、菌索组织分离和基内菌丝组织分离。菌核、菌索组织分离和基内菌丝组织分离。特点：特点：简单易行；为无性繁殖。简单易行；为无性繁殖。2021/3/2440授课：XXX2.2.平菇子实体组织分离方法平菇子实体组织分离方法培养基制备。培养基制备。种种菇菇选选择择：是是指指用用来来进进行行组组织织分分离离的的子子实实体体。要要选选择择适适宜宜出出菇菇期期出出菇菇早早、出出菇菇整整齐齐、形形态态正正常常、无无病病虫虫害害、产产量量高高的的栽栽培培袋袋，从从上上选选择择肥肥大、肉厚、大、肉厚、6 6成熟的幼嫩子实
15、体，切去多余菌柄。成熟的幼嫩子实体，切去多余菌柄。接种场地消毒。接种场地消毒。2021/3/2441授课：XXX种菇处理：表面消毒。种菇处理：表面消毒。接接种种过过程程：双双手手表表面面消消毒毒，把把种种菇菇带带入入接接种种箱箱，点点燃燃酒酒精精灯灯，种种菇菇表表面面消消毒毒后后从从中中间间纵纵向向撕撕开开，用用无无菌菌小小镊镊子子夹夹取取菌菌柄柄、菌菌盖盖交交界界处处的的菌菌肉肉，迅迅速速放放入入培培养养基基上上，塞塞上上棉棉塞塞。特特殊殊种种类类：灵灵芝芝、金针菇、鸡腿菇等。金针菇、鸡腿菇等。2021/3/2442授课：XXX培培养养。适适宜宜条条件件下下，2-3天天组组织织块块上上即即萌
16、萌发发出出菌菌丝丝，8-10天天可可长长满满。期期间间要要检检查查，从从中中选选留留无无污污染染、菌丝洁白浓密、长速正常的菌种。菌丝洁白浓密、长速正常的菌种。 基基内内菌菌丝丝组组织织分分离离以以及及菌菌核核和和菌菌索索的的组组织织分分离离过过程类似，只是所取部位不同。程类似，只是所取部位不同。原始母种还可转接扩繁原始母种还可转接扩繁3-4次，以增加母种量。次，以增加母种量。长满后暂时不用的母种要置于长满后暂时不用的母种要置于2-5下冷藏。下冷藏。2021/3/2443授课：XXX2021/3/2444授课：XXX2021/3/2445授课：XXX（三）母种的扩大（三）母种的扩大1.1.培养基
17、的制备（同前）培养基的制备（同前）2.2.接种场地的消毒灭菌（同前）接种场地的消毒灭菌（同前）3.3.母种的扩大母种的扩大4.4.培养培养2021/3/2446授课：XXX3.3.母种的扩大母种的扩大要要严严格格无无菌菌操操作作。母母种种试试管管表表面面消消毒毒，然然后后靠靠近近灯灯焰焰用用接接种种钩钩将将母母种种横横切切成成若若干干份份，再再用用接接种种铲铲将将横横切切的的母母种种分分成成2-32-3份份，取取一一份份带带1 1 2mm2mm厚厚的的培养基放入新的培养基斜面上。培养基放入新的培养基斜面上。2021/3/2447授课：XXX4.4.培培 养养在在适适宜宜条条件件下下培培养养。2
18、-32-3天天后后，检检查查菌菌丝丝的的生生长长及及杂杂菌菌污污染染情情况况，若若在在接接种种块块或或培培养养基基表表面面上上出出现现独独立立的的小小菌菌落落或或奶奶油油状状小小点点，即即为为污污染染，应应立立即淘汰。即淘汰。2021/3/2448授课：XXX二、原种制作技术二、原种制作技术（一）原种培养基的制备（一）原种培养基的制备（二）原种的制作（二）原种的制作2021/3/2449授课：XXX（一）原种培养基的制备（一）原种培养基的制备1.1.常用原种培养基配方常用原种培养基配方(%)(%)麦粒预处理：麦粒预处理：冷水浸泡冷水浸泡1212小时后水煮，开锅后文火小时后水煮，开锅后文火202
19、0minmin左右，麦粒左右，麦粒煮透，胀而不破，用水冷却后沥干表面水分，拌入石膏即可。煮透，胀而不破，用水冷却后沥干表面水分，拌入石膏即可。 编号编号 麦粒麦粒 棉子皮棉子皮木屑木屑麸皮麸皮玉米面玉米面蔗糖蔗糖石膏石膏1982265332377-8720-10124821051254141151268215122021/3/2450授课：XXX2.2.原种培养基制备原种培养基制备选定配方。分别称取各物质。选定配方。分别称取各物质。加加水水拌拌料料。含含水水量量约约60%65%，料料水水比比约约1:1.31.5。关关键键是是拌拌匀匀，用用量量少少的的水水溶溶性性物物质质要要先先溶于水，再拌入料
20、中。溶于水，再拌入料中。2021/3/2451授课：XXX装装瓶瓶。常常用用容容器器为为750ml罐罐头头瓶瓶或或菌菌种种瓶瓶，每每瓶瓶装装干干料料2.53两两。料料要要装装匀匀，松松紧紧适适度度，装装至至瓶瓶肩下肩下1cm处，料面压平。处，料面压平。打打洞洞封封口口。擦擦净净瓶瓶口口，中中央央打打直直径径2cm的的孔孔至至瓶瓶底底。用用两两层层报报纸纸和和一一层层聚聚丙丙烯烯膜膜封封口口。打打洞洞可可增加料底透气性。增加料底透气性。2021/3/2452授课：XXX2021/3/2453授课：XXX灭菌：高压灭菌或常压灭菌。灭菌：高压灭菌或常压灭菌。v常常压压灭灭菌菌：视视灭灭菌菌量量，需需
21、810h以以上上。注注意意：一一是是培培养养料料量量要要适适中中，物物品品排排列列合合理理，保保证证蒸蒸汽汽流流通通。二二是是大大火火猛猛烧烧，防防止止压压力力忽忽高高忽忽低低。三三是是灭灭菌后闷菌后闷46h再出锅。再出锅。v高高压压灭灭菌菌：1.41.5kg/cm2压压力力下下灭灭1.52h，压压力不稳或压力低时要延时。力不稳或压力低时要延时。高压灭菌应注意高压灭菌应注意：2021/3/2454授课：XXXa.灭菌锅内冷空气必须排尽。否则会灭菌锅内冷空气必须排尽。否则会产生假蒸汽压产生假蒸汽压。b.b.培养基必须排放有序，蒸汽畅通。培养基必须排放有序，蒸汽畅通。c.c.灭灭菌菌完完毕毕应应缓
22、缓慢慢减减压压。自自然然降降温温或或缓缓慢慢排排气气，防防止止液体突然沸腾弄脏瓶塞，或瓶、袋胀破。液体突然沸腾弄脏瓶塞，或瓶、袋胀破。d.d.棉棉塞塞防防湿湿。灭灭菌菌时时棉棉塞塞不不能能接接触触锅锅壁壁，并并盖盖报报纸纸或或防水纸，防止冷凝水打湿棉塞。防水纸，防止冷凝水打湿棉塞。2021/3/2455授课：XXX2021/3/2456授课：XXX（二）原种的制作（二）原种的制作1.场地消毒：将料瓶和用具放入接种箱熏场地消毒：将料瓶和用具放入接种箱熏0.52h。2.接接种种：母母种种表表面面消消毒毒后后带带入入接接种种箱箱，点点燃燃酒酒精精灯灯，再再次次对对试试管管外外壁壁消消毒毒。在在灯灯焰
23、焰范范围围内内，用用接接种种钩钩将将母母种种分分成成46份份，取取一一份份放放入入料料面面中中部部，封封口口。两人合作既好又快。两人合作既好又快。3.培培养养：在在适适宜宜条条件件下下培培养养。定定期期检检查查。菌菌丝丝长长满满后，再继续培养后，再继续培养35天。天。2021/3/2457授课：XXX2021/3/2458授课：XXX三、栽培种制作技术三、栽培种制作技术（一）（一）栽培种培养基的制备栽培种培养基的制备v培养基配方：与原种培养基可以相同。培养基配方：与原种培养基可以相同。1.菌菌种种袋袋规规格格：选选用用聚聚丙丙烯烯或或高高密密度度聚聚乙乙烯烯塑塑料料袋袋。1732cm，一一端端
24、开开口口，每每袋袋装装干干料料6两两。1740cm，两端开口，每袋装干料两端开口，每袋装干料1斤。斤。2021/3/2459授课：XXX3.3.拌料装袋，注意：拌料装袋，注意：1)1)料松紧度适宜；袋壁光滑。料松紧度适宜；袋壁光滑。2)2)料面要平，中间打孔，以利通气。料面要平，中间打孔，以利通气。3)3)绳要绑紧，尽量排除袋内空气，防止涨袋。绳要绑紧，尽量排除袋内空气，防止涨袋。4.4.灭菌：与原种相同。灭菌：与原种相同。2021/3/2460授课：XXX（二）栽培种的制作（二）栽培种的制作1.场地消毒：同前。场地消毒：同前。2.接接种种方方法法：双双手手表表面面消消毒毒后后进进入入接接种种
25、箱箱；原原种种表表面面消消毒毒，放放于于三三角角架架或或空空瓶瓶上上，瓶瓶口口表表面面消消毒毒、火火焰焰灭灭菌菌；用用镊镊子子把把菌菌种种扒扒成成1-2cm小小块块，均匀接于料面，绑口。均匀接于料面，绑口。2021/3/2461授课：XXX2021/3/2462授课：XXX接种时注意：接种时注意：1)接种过程应在酒精灯旁进行。接种过程应在酒精灯旁进行。2)每每瓶瓶原原种种接接栽栽培培种种1015袋袋(两两头头接接种种)或或50瓶瓶左右。左右。3)接种用具使用前表面消毒，火焰灭菌。接种用具使用前表面消毒，火焰灭菌。4)接完种后，据接种量确定封口松紧度。接完种后，据接种量确定封口松紧度。3.培养：
26、同原种。培养：同原种。2021/3/2463授课：XXX三级菌种生产的工艺流程三级菌种生产的工艺流程2021/3/2464授课：XXX四、菌种污染原因及防止措施四、菌种污染原因及防止措施（一一）常常见见杂杂菌菌种种类类：细细菌菌、酵酵母母菌菌、放放线线菌菌和和霉菌。霉菌。2021/3/2465授课：XXX2021/3/2466授课：XXX（二）污染原因及防止措施（二）污染原因及防止措施1.培培养养基基灭灭菌菌不不彻彻底底。表表现现为为瓶瓶壁壁和和袋袋壁壁上上出出现现杂杂菌菌菌菌落落。原原因因：灭灭菌菌压压力力或或时时间间不不足足，或或者者高高压压灭灭菌时菌时锅内空气没有排尽锅内空气没有排尽。措
27、施措施：锅内空气排尽；保证灭菌压力和时间。：锅内空气排尽；保证灭菌压力和时间。2021/3/2467授课：XXX2.2.菌种带杂菌。表现为菌种块周围首先污染。菌种带杂菌。表现为菌种块周围首先污染。措施：选用纯正菌种。措施：选用纯正菌种。3.3.接接种种操操作作中中污污染染。污污染染点点常常分分散散在在培培养养基基表表面面。原因：接种时无菌操作不严格。原因：接种时无菌操作不严格。措措施施：接接种种场场所所及及工工具具消消毒毒、灭灭菌菌要要彻彻底底，接接种种操作在灯焰形成的无菌区进行，并要敏捷迅速。操作在灯焰形成的无菌区进行，并要敏捷迅速。2021/3/2468授课：XXX4.4.培培养养室室环环
28、境境污污染染。培培养养室室环环境境不不卫卫生生，或或通通风风不不良、潮湿等导致棉塞等封口材料受潮而污染。良、潮湿等导致棉塞等封口材料受潮而污染。措施：选择清洁、高燥的场地作菌种培养室。措施：选择清洁、高燥的场地作菌种培养室。5.5.破破口口污污染染。灭灭菌菌操操作作或或运运输输中中不不小小心心，使使容容器器破破裂或出现微孔而污染。裂或出现微孔而污染。措措施施：灭灭菌菌操操作作或或运运输输中中要要轻轻拿拿轻轻放放，所所用用器器具具不能带毛刺。不能带毛刺。结结 束束2021/3/2469授课：XXX本章重点本章重点 1.菌种的本质，三级菌种的概念。菌种的本质，三级菌种的概念。2.三级菌种的制作方法
29、以及制作过程中应三级菌种的制作方法以及制作过程中应注意的问题。注意的问题。3.常用的消毒、灭菌方法。常用的消毒、灭菌方法。结结 束束2021/3/2470授课：XXX复习思考题复习思考题 1.什么是菌种？什么是菌种？2.什么是三级菌种？为什么要制作三级菌种？什么是三级菌种？为什么要制作三级菌种？3.消毒和灭菌的概念？常用消毒、灭菌方法有哪些？消毒和灭菌的概念？常用消毒、灭菌方法有哪些？4.如何提高制种的成功率和菌种质量？如何提高制种的成功率和菌种质量？5.菌种制备过程中常见的污染原因及防止措施有哪些？菌种制备过程中常见的污染原因及防止措施有哪些？2021/3/2471授课：XXXThank you!2021/3/2472
