DNA的粗提取与鉴定优秀课件实用教案

《DNA的粗提取与鉴定优秀课件实用教案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《DNA的粗提取与鉴定优秀课件实用教案（46页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、 DNA DNA的提取的提取(tq)(tq)和鉴定和鉴定DNADNA从哪从哪 儿提取儿提取(tq)(tq)？怎样将怎样将DNADNA与与细胞中的其他细胞中的其他物质分离？物质分离？怎样鉴定怎样鉴定我们提取我们提取的的DNADNA？第1页/共45页第一页，共46页。内容解析基础知识DNA的物理化学(w l hu xu)性质化学性质化学性质 在沸水浴条件下，在沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈蓝色与二苯胺反应呈蓝色第2页/共45页第二页，共46页。物理性质物理性质物理性质物理性质溶解性：溶解性： 在在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度最小溶液中溶解度最小 不溶于酒精不溶于酒精耐受性：耐受性：

2、80以上高温变性以上高温变性被被DNA酶分解，而不被蛋白酶分解酶分解，而不被蛋白酶分解洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质去除脂质和蛋白质, ,但对但对DNADNA没有没有影响影响第3页/共45页第三页，共46页。 如何利用如何利用DNADNA的物理化学性质提取的物理化学性质提取(tq)(tq)和鉴定和鉴定DNADNA？思考(sko)：1.洗涤剂能溶解细胞膜，但不会洗涤剂能溶解细胞膜，但不会(b hu)破破坏坏DNA 将将DNADNA从细胞中提取出来从细胞中提取出来2 2、当氯化钠的物质的量浓度为当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol 2 molL L时，时，

3、DNADNA的溶解度最大，浓度为的溶解度最大，浓度为 0 014 mol14 molL L时，时，DNADNA的溶解度最低。的溶解度最低。 可以使可以使DNADNA在盐溶液中溶解或析出在盐溶液中溶解或析出第4页/共45页第四页，共46页。3 3、DNADNA不溶于酒精不溶于酒精(jijng)(jijng)溶液，但是细溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精胞中的某些物质则可以溶于酒精(jijng)(jijng)。可以可以(ky)(ky)将将DNADNA与蛋白质进一步分离与蛋白质进一步分离4 4、DNADNA与二苯胺与二苯胺(bn n)(bn n)在沸水浴条件下在沸水浴条件下呈蓝色呈蓝色鉴定鉴定

4、DNADNA第5页/共45页第五页，共46页。提取(tq)DNA的实验步骤破碎细胞，获取(huq)含DNA的滤液选取(xunq)实验材料去除滤液中的杂质析出DNA鉴定DNA第6页/共45页第六页，共46页。二、二、DNADNA的粗提取的粗提取(tq)(tq)与鉴定的实验设计与鉴定的实验设计（一）实验（一）实验(shyn)(shyn)材料的材料的选取选取 材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆(wn du)(wn du)、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中菠菜、在液体培养基中培养的大

5、肠杆菌。（从中选取选取2 23 3种实验材料）种实验材料） 原则：凡是含有原则：凡是含有DNADNA的生物材料都可以考虑，但的生物材料都可以考虑，但选用选用DNADNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大大第7页/共45页第七页，共46页。 无细胞壁，将其加入蒸馏水中 ，使其破裂(pli)释放DNA 有细胞壁，需要(xyo)先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜，进行充分的搅拌和研磨，才能使其破裂释放DNA（二）破碎（二）破碎(p su)(p su)细胞，获取含细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液动物细胞：动物细胞：植物细胞：植物细胞：第8页/共45页第八页

6、，共46页。讨论：加入洗涤剂和食盐的作用讨论：加入洗涤剂和食盐的作用(zuyng)(zuyng)分别是分别是什么？什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于于DNADNA的释放；食盐的主要的释放；食盐的主要(zhyo)(zhyo)成分是成分是NaClNaCl，有，有利于利于DNADNA的溶解的溶解实例：提取洋葱实例：提取洋葱DNADNA时，在切碎的洋葱中加入时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行一定的洗涤剂和食盐，进行(jnxng)(jnxng)充分的搅充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液拌和研磨，过滤后收集研磨液第9页/共45页

7、第九页，共46页。答：研磨不充分会使细胞核内的答：研磨不充分会使细胞核内的DNADNA释放不完全，释放不完全，提取的提取的DNADNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定状沉淀物、用二苯胺鉴定(jindng)(jindng)不显示蓝色不显示蓝色等等讨论：如果研磨不充分，会对实验讨论：如果研磨不充分，会对实验(shyn)(shyn)结果产结果产生怎样的影响？生怎样的影响？（三）去除滤液（三）去除滤液(ly)(ly)中的杂质中的杂质为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理讨论：此步骤获得的滤液中可能含

8、有哪些细胞讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？成分？答：可能含有核蛋白、多糖和答：可能含有核蛋白、多糖和RNARNA等杂质等杂质第10页/共45页第十页，共46页。讨论讨论(toln)(toln)：为什么反复地溶解与析出：为什么反复地溶解与析出DNADNA，能，能够去除杂质够去除杂质答：用高盐浓度的溶液溶解答：用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高盐中，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNADNA析出，能除去析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复(fnf)(fnf)溶解与析出溶解与析出DNA

9、DNA，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解度溶解度不同的多种杂质不同的多种杂质第11页/共45页第十一页，共46页。讨论：方案讨论：方案(fng n)(fng n)二与方案二与方案(fng n)(fng n)三的原理三的原理有什么不同？有什么不同？答：方案二是利用答：方案二是利用(lyng)(lyng)蛋白酶分解杂质蛋白，蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的从而使提取的DNADNA与蛋白质分开；方案三利用与蛋白质分开；方案三利用(lyng)(lyng)的是的是DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同，和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与从而使蛋白质变性，与DNADNA分离。分离。

10、第12页/共45页第十二页，共46页。第13页/共45页第十三页，共46页。（四）（四） DNA DNA的析出的析出(xch)(xch)与与鉴定鉴定DNADNA的析出用的是与滤液的析出用的是与滤液(ly)(ly)体积相等的冷却的体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为酒精溶液（体积分数为95 95 ） ，静置，静置2 23min3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNADNA。用。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水取上面的水1 1、DNADNA的析出的析出(xch)(xch)第14页/共

11、45页第十四页，共46页。第15页/共45页第十五页，共46页。2 2、 DNA DNA的鉴定的鉴定(jindng)(jindng)鉴定鉴定DNADNA时在试管中先加入物质的量的浓度为时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 2mol/L 的的NaClNaCl溶液溶液5ml5ml于两只试管中，其中一只于两只试管中，其中一只加入加入DNADNA丝状物，各加入二苯胺丝状物，各加入二苯胺4ml 4ml 试剂。混合试剂。混合(hnh)(hnh)均匀后，将试管置于沸水中加热均匀后，将试管置于沸水中加热5min,5min,待待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色

12、的变化，看看溶解有看看溶解有DNADNA的溶液是否有蓝色的溶液是否有蓝色第16页/共45页第十六页，共46页。（一）案例一：以鸡血为实验（一）案例一：以鸡血为实验(shyn)(shyn)材料进材料进行行DNADNA的粗提取的粗提取三、实验三、实验(shyn)(shyn)案例案例鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要实验材料常常需要(xyo)(xyo)匀浆和离心，对设备匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长要求较高，操作繁琐，历时较长1 1、鸡血细胞做实验材料的原因、鸡血细胞做实验材料的原因鸡血细胞核的鸡血细胞核的DNADNA含量

13、丰富，材料易得含量丰富，材料易得第17页/共45页第十七页，共46页。2 2、实验、实验(shyn)(shyn)原理原理 DNA DNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，是随着溶液中的溶解度，是随着NaClNaCl的浓度的浓度的变化的变化(binhu)(binhu)而改变的。当而改变的。当NaClNaCl的物质的量浓度的物质的量浓度为为0.14 mol0.14 molL L时时,DNA,DNA的溶解度最低。利用这一原理，的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在可以使溶解在NaClNaCl溶液中的溶液中的DNADNA析出。析出。 DNA DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白不溶于酒精溶液

14、，但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。利用质可以溶于酒精溶液。利用(lyng)(lyng)这一原理，这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的可以进一步提取出含杂质较少的DNADNA。 DNA DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂。的试剂。第18页/共45页第十八页，共46页。3 3、实验、实验(shyn)(shyn)材料和用具：材料和用具：鸡血细胞液（鸡血细胞液（510ml510ml）；体积分数为）；体积分数为95%95%的冷酒的冷酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h2

15、4h）；蒸馏水；）；蒸馏水；质量浓度为质量浓度为0 0g/mlg/ml的柠檬酸纳溶液；务质量的柠檬酸纳溶液；务质量的浓度分别为的浓度分别为2mol/L2mol/L和和0 0015mol/L015mol/L的氯化纳溶的氯化纳溶液；二苯胺试剂。铁架台；铁环；镊子；三角架；液；二苯胺试剂。铁架台；铁环；镊子；三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（量筒（100ml100ml，一个，一个(y )(y )）；烧杯；（）；烧杯；（100ml100ml，一个，一个(y )(y )，50ml50ml、500ml500ml各二个）；试管各二个）；试管

16、（20ml20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。，二个）；漏斗；试管夹；纱布。 第19页/共45页第十九页，共46页。4 4、课前准备、课前准备(zhnbi)(zhnbi)鸡血鸡血细胞液细胞液取质量浓度为取质量浓度为0 01g/ml1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）100ml100ml，置于，置于500ml500ml烧杯中。注入新鲜的鸡血（约烧杯中。注入新鲜的鸡血（约180ml180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分液充分(chngfn)(chngfn)混合，以免凝血。将烧杯中的血液混合，以免凝血。将烧杯中的血液置

17、于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀。（也可置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将血液倒入离心管内，用以将血液倒入离心管内，用1000r/min1000r/min（转每分）的（转每分）的离心机离心离心机离心2min2min，血细胞沉淀于离心管底部。实验时。，血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。）胞液。）过程过程(guchng)(guchng)第20页/共45页第二十页，共46页。第21页/共45页第二十一页，共46页。柠檬酸钠作用柠檬酸钠作用(zuyng)(zuyng)防止防止(fngzh

18、)(fngzh)血液凝固血液凝固作用作用(zuyng)(zuyng)机理机理柠檬酸钠能与血浆中的柠檬酸钠能与血浆中的CaCa2+2+发生反应，生成柠檬酸发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆中游离的钙络合物，血浆中游离的CaCa2+2+大大减少，血液就不大大减少，血液就不会凝固会凝固讨论：提取鸡血中的讨论：提取鸡血中的DNADNA时，为什么除去血液中的时，为什么除去血液中的上清液？上清液？答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细胞，离心后除去的上清液是血浆细胞，离心后除去的上清液是血浆第22页/共45页第二十二页，共46页。5 5、方法、方法(fn

19、gf)(fngf)步骤步骤 将制备好的鸡血细胞液将制备好的鸡血细胞液5 mL5 mL10mL10mL，注入到，注入到50 mL50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL20 mL，同时，同时(tngsh)(tngsh)用玻璃棒充分搅拌用玻璃棒充分搅拌5 min5 min，使血细胞加，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至滤至500mL500mL。取其滤液。取其滤液。提取提取(tq)(tq)鸡血细胞的细胞核物质鸡血细胞的细胞核物质 鸡血细胞破碎以后释放出的鸡血细胞破碎以后释放出的DNADNA，容易被玻璃，容

20、易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNADNA的损的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液液注意事项：注意事项：第23页/共45页第二十三页，共46页。讨论讨论(toln)(toln)：答：让细胞内浓度大于周围答：让细胞内浓度大于周围(zhuwi)(zhuwi)溶液的浓溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破度，细胞会吸水以至胀破（1 1）为什么要加入）为什么要加入(jir)(jir)蒸馏水？加入蒸馏水？加入(jir)(jir)蒸馏水后细胞会有什么变化？蒸馏水后细胞会有什么变化？（2 2）用玻璃棒搅拌有什么意义？）用

21、玻璃棒搅拌有什么意义？答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎防止打碎DNADNA（3 3）滤去的是什么物质？）滤去的是什么物质？得到的是什么？得到的是什么？答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNADNA第24页/共45页第二十四页，共46页。溶解溶解(rngji)(rngji)细胞核内细胞核内的的DNADNA将氯化钠的物质的量浓度将氯化钠

22、的物质的量浓度(nngd)(nngd)为为 2 mol/L 2 mol/L的溶的溶40mL40mL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min1min，使其混合均匀，这时，使其混合均匀，这时DNADNA在溶液中呈溶解状态在溶液中呈溶解状态沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止会越来越多。

23、当粘稠物不再增加时停止(tngzh)(tngzh)加加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol0.14 molL L）析出含析出含DNADNA的粘稠物的粘稠物第25页/共45页第二十五页，共46页。第26页/共45页第二十六页，共46页。讨论：加入讨论：加入(jir)(jir)蒸馏水的目的蒸馏水的目的？降低降低NaClNaCl溶液浓度溶液浓度(nngd)(nngd)到使到使DNADNA溶解度最低点，溶解度最低点，使使DNADNA从从NaClNaCl溶液中析出溶液中析出将溶液中的将溶液中的DNADNA与其他杂质分离，这一步骤是实

24、与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于利于DNADNA分子分子(fnz)(fnz)的附着和缠绕的附着和缠绕注意事项：注意事项：第27页/共45页第二十七页，共46页。滤取含滤取含DNADNA的粘稠的粘稠(zhn chu)(zhn chu)物物用放有多层纱布的漏斗用放有多层纱布的漏斗(ludu)(ludu)，过滤步骤，过滤步骤3 3中的中的溶液至溶液至 500mL 500mL的烧杯中，含的烧杯中，含 DNA DNA的粘稠物被留在的粘稠物被留在纱

25、布上纱布上将将DNADNA的粘稠的粘稠(zhn chu)(zhn chu)物再溶解物再溶解取取 1 1个个 50 mL 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为量浓度为 2 mol 2 molL L的溶液的溶液 20mL 20mL。用钝头镊子将纱。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地用玻璃择不停地搅拌，搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中第28页/共45页第二十八页，共46页。第29页/共45页第二十九页，共46页。过滤过滤(gul)(gul)含有含有DNADNA的氯化钠

26、溶液的氯化钠溶液取取1 1个个100 mL100 mL烧杯，用放有两层纱布烧杯，用放有两层纱布(shb)(shb)的的漏斗过滤步骤漏斗过滤步骤5 5中的溶液。取其滤液，中的溶液。取其滤液，DNADNA溶于溶于滤液中滤液中提取提取(tq)(tq)含杂质较少的含杂质较少的DNADNA在上述滤过的溶液中，加入在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分冷却的、酒精的体积分数为数为 95 95的溶液的溶液 50mL 50mL（使用冷却的酒精，对（使用冷却的酒精，对DNADNA的凝集效果较佳），并用的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，玻璃棒搅拌，溶液溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状中会出现含

27、杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是的主要成分就是DNADNA第30页/共45页第三十页，共46页。第31页/共45页第三十一页，共46页。答：因为答：因为DNADNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的酒精中，使含杂质较少的DNADNA丝状物可以析出丝状物可以析出(xch),(xch),悬浮于溶液中悬浮于溶液中讨论讨论(toln)(toln)：（2 2）观察丝状物呈什么）观察丝状物呈什么(shn me)(shn me)颜色？颜色？答：白色答：白色

28、（1 1）为什么要加）为什么要加50mL50mL的冷酒精？的冷酒精？第32页/共45页第三十二页，共46页。取两支取两支20 mL20 mL的试管的试管(shgun)(shgun)，各加入氯化钠的物，各加入氯化钠的物质的量浓度为质的量浓度为0 0015 mol015 molL L的溶液的溶液5 mL5 mL，将丝状物，将丝状物放入其中一支试管放入其中一支试管(shgun)(shgun)中，用玻璃棒搅拌，使中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管丝状物溶解。然后，向两支试管(shgun)(shgun)中各加入中各加入4mlL4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管的二苯胺试剂。混合均匀后

29、，将试管(shgun)(shgun)置于沸水中加热置于沸水中加热 5 min 5 min，待试管，待试管(shgun)(shgun)冷却后，冷却后，观察并且比较两支试管观察并且比较两支试管(shgun)(shgun)中溶液颜色的变化中溶液颜色的变化 DNA DNA的鉴定的鉴定(jindng)(jindng)第33页/共45页第三十三页，共46页。第34页/共45页第三十四页，共46页。讨论讨论(toln)(toln)：答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来来(yunli)(yunli)颜色颜色（2 2）这一鉴定结果说明）这一鉴定结果说明(shum

30、ng)(shumng)什么问题？什么问题？（1 1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？答：提取出的丝状物是答：提取出的丝状物是DNADNA（3 3） DNA DNA的直径约为的直径约为20102010-10-10 m m，实验中出现的丝，实验中出现的丝状物的粗细是否表示状物的粗细是否表示1 1个个DNADNA分子直径的大小？分子直径的大小？答：答： DNA DNA分子直径只有分子直径只有2 nm2 nm。丝状物是多个。丝状物是多个DNADNA子聚在一起形成的子聚在一起形成的 第35页/共45页第三十五页，共46页。第36页/共45页第三十六页，共46页。

31、答：整个答：整个(zhngg)(zhngg)实验共实验共第第1 1次：次： 步骤步骤(bzhu)1.(bzhu)1.细胞吸水胀破细胞吸水胀破 第第2 2次：次： 步骤步骤(bzhu)3.(bzhu)3.使使 DNA DNA黏稠物析出黏稠物析出 此实验此实验(shyn)(shyn)过程中有几次使用蒸馏水？几过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤？几次析出？几次搅拌？分别在哪一步？次过滤？几次析出？几次搅拌？分别在哪一步？【实验总结实验总结】两次蒸馏水：两次蒸馏水：三次过滤：三次过滤：两次析出：两次析出：六次搅拌：六次搅拌：两次蒸馏水：两次蒸馏水：第37页/共45页第三十七页，共46页。 过过滤滤时时使

32、使用用的的纱纱布布层层数数与与需需用用(x (x yn)yn)滤滤液液或或黏黏稠稠物物有有关关，第第二二次次要要用用其其滤滤出出的的黏黏稠稠物物有有关关，所所以以要要使使用用多多层层纱纱布布，第第一一次次和和第第三三次均要用其滤液，使用的纱布为次均要用其滤液，使用的纱布为1 12 2层层三次三次(sn (sn c)c)过滤：过滤：第第1 1次：步骤次：步骤1. DNA1. DNA存在存在(cnzi)(cnzi)于滤液里于滤液里第第2 2次：步骤次：步骤4. DNA4. DNA被留在纱布上被留在纱布上 第第3 3次：步骤次：步骤6. DNA6. DNA存在存在(cnzi)(cnzi)于滤液里于滤

33、液里第38页/共45页第三十八页，共46页。两次析出两次析出(xch)(xch)：第第1 1次：次： 步骤步骤3.3.用用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI溶液溶液(rngy)(rngy) （含杂质多）（含杂质多）第第2 2次：次： 步骤步骤7.7.用冷却用冷却(lngqu)(lngqu)的的9595的酒精的酒精六次搅拌：六次搅拌： 其中除第其中除第8 8步外，其余均要朝一个方向搅步外，其余均要朝一个方向搅拌，在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直拌，在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的插烧杯底部，这样才能保证得到完整的DNADNA

34、第第1、2、3、5、7步步第39页/共45页第三十九页，共46页。1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯(shobi)中加蒸馏水的作用是( )选择题A.稀释血液、冲洗样品稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低使血细胞破裂、降低NaCl浓度使浓度使DNA析出析出C.使血细胞破裂、增大使血细胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血细胞破裂、提取使血细胞破裂、提取(tq)含杂质较少的含杂质较少的DNA第40页/共45页第四十页，共46页。A.随着NaCl溶液(rngy)浓度的增大，DNA在NaCl溶液(rngy)中的溶解度也增大B.随着NaCl溶液(rngy)浓度的减小，DNA在NaCl溶液(

35、rngy)中的溶解度也减小C.DNA在NaCl溶液(rngy)中的溶解度与NaCl溶液(rngy)的浓度无关D.当NaCl溶液(rngy)的浓度为0.14M时，DNA的溶解度最低 2.关于关于DNA在在NaCl溶液中的溶解度，下面的溶液中的溶解度，下面的叙述哪一个叙述哪一个(y )是正确的（是正确的（ ）第41页/共45页第四十一页，共46页。3.2006.江苏做DNA粗提取和鉴定实验时,实验材料用鸡血而不用猪血的原因是（）A.鸡血的价格比猪血的价格低B.猪的红细胞没有细胞核,不易提取到DNAC鸡血不凝固.猪血会凝固D.用鸡血提取DNA比用猪血提取操作(cozu)简便第42页/共45页第四十二

36、页，共46页。简答题1.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去(ch q)血液中的上清液?答：DNA的提取，关键(gunjin)是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。第43页/共45页第四十三页，共46页。2.实验中NaCl的物质(wzh)的量浓度为2 molL和0.14 molL对DNA有何影响?答：DNA在.1/的NaCl溶液中溶解(rngji)度最小，因此前者作用是溶解(rngji)DNA，后者是作用使DNA析出 。第44页/共45页第四十四页，共46页。感谢您的欣赏(xnshng)！第45页/共45页第四十五页，共46页。内容(nirng)总结实验思路。被DNA酶分解，而不被蛋白酶分解。3、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些(mu xi)物质则可以溶于酒精。答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质。讨论：方案二与方案三的原理有什么不同。（一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 molL）。取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液第四十六页，共46页。