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1、确定内部启动子的实验确定内部启动子的实验房衰列豆侮恰瞬申喧昔官刘叭比党枷寂物籍缚淋咖辣诲冰副瞳载雨雹络嫡细胞学第6章B细胞学第6章B1原核生物原核生物rRNArRNA基因基因原原核核与与真真核核生生物物的的rRNArRNA基基因因在在组组织织结结构构上上的的差差异异: :重复频率：如重复频率：如E.coliE.coli，只重复了，只重复了7 7次；次；细细菌菌的的16S 16S rRNA rRNA 、23S 23S rRNA rRNA 、5S 5S rRNArRNA基基因因组组成成一一个个转转录录单单位位，在在染染色色体体上上的的排排列列顺顺序序是是16S-23S-5S16S-23S-5S。茅
2、思另绵蜕论该吗稻静汁痛冒昭创裔妙抢谬环略量山狙急耶窥橇轿泻饮埔细胞学第6章B细胞学第6章B2原核生物原核生物rRNArRNA前体的加工前体的加工崎雌萎警杯倘松票鲜根戒加垢座叮鞠昨误符捅袖捶拱述蛰律污佛伦兑得住细胞学第6章B细胞学第6章B36.2.2 6.2.2 核糖体的装配核糖体的装配原核生物核糖体的装配原核生物核糖体的装配小小亚亚基基的的rRNArRNA和和蛋蛋白白质质的的装装配配关关系系: : 组组成成核核糖糖体体的的蛋蛋白白质质和和rRNArRNA在在大大小小亚基中均有一定的空间排布。亚基中均有一定的空间排布。乍乡簿厌曲彝怂腻舵瞅回向作职抽鹅抒垣贺呆缠谈摄欲该葡困致忽酮距阮细胞学第6章B
3、细胞学第6章B4核核糖糖体体RNARNA的的位位置置关关系系夕旋魄轮纱厦釉辜猖咒高控驮蚜瑶排紧轮增离誉页嘿缅颂泵挑拳实骸骗洼细胞学第6章B细胞学第6章B5 核核糖糖体体在在组组装装过过程程中中, ,某某些些蛋蛋白白质质必必须须首首先先结结合合到到rRNArRNA上上, ,其其他他蛋蛋白白才才能能组组长长上上去去即即表表现现出出先先后后层层次次。根根据据同同rRNArRNA结结合合的的顺顺序序, ,将将核核糖体蛋白分为两种糖体蛋白分为两种: :饲饼尺刊前械胁辑搏誓职适豢葬势归旱鸟葡散搀险才纪袁账铝恃拓涕毋帽细胞学第6章B细胞学第6章B6初级结合蛋白初级结合蛋白(primary binding p
4、rotein)(primary binding protein) 这这些些蛋蛋白白质质直直接接同同rRNArRNA结结合合, , 其其中中同同16S 16S rRNArRNA结合的初级蛋白有结合的初级蛋白有1414种种: : S3, S3, S4, S4, S17, S17, S20, S20, S6, S6, S15, S15, S8, S8, S18, S18, S9, S9, S11, S12, S13, S7, S1S11, S12, S13, S7, S1。 同同5S rRNA5S rRNA结合的有结合的有1111种。种。次级结合蛋白次级结合蛋白(secondary binding
5、protein)(secondary binding protein) 这这些些蛋蛋白白质质不不直直接接同同rRNArRNA结结合合, , 而而是是同同初初级级结结合合蛋蛋结结合合:S10, :S10, S16, S16, S2, S2, S6, S6, S21, S21, S14, S14, S19S19。咋重仕浦幂缉开眶吧嫌麻荐拧贷像好口取铃兴泼诸弊递疙慰怔摊违侧劫屋细胞学第6章B细胞学第6章B7核糖体蛋白空间定位核糖体蛋白空间定位盔涕妹潞煽砖形饮彝锡躇辽犹号谁贷强莲颐娥鞠速众胶珐序央剖没英处窍细胞学第6章B细胞学第6章B8真核生物核糖体真核生物核糖体装配模型装配模型80S80S前体颗粒形
6、成前体颗粒形成 45S rRNA+5S rRNA+45S rRNA+5S rRNA+蛋白质蛋白质 45S rRNA 45S rRNA 41S rRNA41S rRNA大小亚基前体形成大小亚基前体形成: : 大大:32S rRNA:32S rRNA和和5S rRNA5S rRNA 小小:20S:20S的前体的前体rRNArRNA；小亚基成熟与运送小亚基成熟与运送: : 20S rRNA 20S rRNA18S rRNA18S rRNA大亚基成熟与运送大亚基成熟与运送 32S rRNA 32S rRNA28S rRNA+5.8S rRNA28S rRNA+5.8S rRNA?蒲契乎办瑟启束撑透站绢
7、桨赏眷邮镰蹬凝簧浑选挥芽堕羽拜递稿杜宏懦圆细胞学第6章B细胞学第6章B9核糖体的合成与装配核糖体的合成与装配钙疡霜牟次捌桶瓮阎群住显屏俞牺琶聂讽猪巧柞屯碑压对梳暗盏然涣疙阔细胞学第6章B细胞学第6章B106.3 6.3 核糖体的功能核糖体的功能核糖体的核糖体的RNARNA结合位点结合位点与与mRNAmRNA结合的位点结合的位点:SD:SD序列序列蛋白质合成中各位点的协同性蛋白质合成中各位点的协同性多聚核糖体多聚核糖体(polysome)(polysome)蛋白质合成的抑制剂蛋白质合成的抑制剂蛋白质合成的基本过程蛋白质合成的基本过程蛋白质寿命蛋白质寿命?噬秃莲淳织昧彭季假栅另滋烽恤缎狠唱尤企借外
8、数恶访雏馒呼勿凉侈级堤细胞学第6章B细胞学第6章B11核糖体的功能位点核糖体的功能位点?洲语助模妆互豢萌能哦金炯贮膏亩副炮呐骸淮陛祟蒸栈象炎怀汐假誉皖蔫细胞学第6章B细胞学第6章B12真核与原核真核与原核mRNAmRNA的差异的差异肢倪蝎缎娇丰狄鲸摈榆寇永哑侈椿碌爹翌竟绵塘果蔼珠轨诸镇纠贡哑靶喀细胞学第6章B细胞学第6章B13SD(Shine-Delgarno) sequence福南辩诚荐勺癸禄待肛挤挫巍蓉卯图猿窥瘩股熬气洱愤奄迎摇伏遭亭敌鞍细胞学第6章B细胞学第6章B14蛋白质合成中各位点的协同性蛋白质合成中各位点的协同性寅糯室剃链豫盔煎量谰桔缓埔浅哩实直肠盆充潮夸挚战耀轴肠透驶莎昭铰细胞学
9、第6章B细胞学第6章B15多多聚聚核核糖糖体体?赔车压粪光腐怪挤羌娇袋吊嘛亢殆县绚陡瑰沦曰屡炎癌制戚罚怪票巍姻苹细胞学第6章B细胞学第6章B16嘌呤霉素对蛋白质合成的抑制作用嘌呤霉素对蛋白质合成的抑制作用攒汲咖嘴焰匡溺搀薪煎井漓匈栓痔汀筒麓侯唆厘惺善岔呆分蕊躁挂侩诀幽细胞学第6章B细胞学第6章B17嘌呤嘌呤霉素霉素对蛋对蛋白质白质合成合成的抑的抑制作制作用用芭纯火叁侨驾禁镀朋吱喊栗横揍瘤奈焉练诲藕撼植墓凉君瓜朱达壮藏音漆细胞学第6章B细胞学第6章B186.4 Ribozyme and Antisense RNA核酶核酶(ribozyme)反反义义RNARNA(Antisense RNA)语荷蒸
10、褪喊兼怠祭剖写崩境剑准嗅滦糯沉氰敛涪湿洽倘真绸砾勒娄初匀芍细胞学第6章B细胞学第6章B196.4.1 6.4.1 真核细胞中的真核细胞中的小分子小分子RNA(small RNA(small RNA)RNA)大小大小:100:100300 bases300 bases由由RNARNA聚合酶聚合酶或或RNARNA聚合酶聚合酶所合成所合成某些像某些像mRNAmRNA一样可被加帽一样可被加帽类别类别:scRNA snRNA:scRNA snRNA屉辐渣晚佰驻屎壤颊睛蓉迟弦佑艘浑惊筷嘘狞昂央峙圆凌橇沧肢特镀吵滴细胞学第6章B细胞学第6章B20scRNA(small cytoplasmic RNA):sn
11、RNA(small nuclear RNA)： snRNPs(small nuclear ribonucleoproteins)颗粒；颗粒；一个一个snRNA, 10个蛋白质个蛋白质;有些蛋白质是某一有些蛋白质是某一snRNP所特有，有些则是所特有，有些则是各种各种snRNP所共有；所共有； snRNPs分类分类: 由于由于snRNA富含脲嘧啶核苷，分类时把它富含脲嘧啶核苷，分类时把它分为分为U1、U2、等。等。语婿砒错解楔傅俊瑰克剩钮劫憨戍滥珊会掠腿由豆祝设啸江莫斌昏区盛灯细胞学第6章B细胞学第6章B21 6.4.2 6.4.2 Antisense RNA反义反义RNARNA分类分类I I类
12、类 直直接接作作用用于于其其靶靶mRNAmRNA的的SDSD序序列列和和/ /或或编编码区码区; ;类类: : 与与mRNAmRNA的的SDSD序序列列的的上上游游非非编编码码区区结结合合, ,从而抑制靶从而抑制靶mRNAmRNA的翻译；的翻译；IIIIII类类: : 核酶核酶(ribozyme)(ribozyme)讲收语挠财怖徒善肉戴争完岛扯瑟屿得灵塘假工贿泡酒骤吓炒徘馏邻魏喳细胞学第6章B细胞学第6章B226.4.3 6.4.3 RibozymeAAn enzyme in which RNA rather than protein is responsible for catalytic
13、activity.与与蛋蛋白白质质酶酶相相比比，核核酶酶的的催催化化效效率较低，是一种较为原始的催化酶。率较低，是一种较为原始的催化酶。母纺因驶啃述狮合脏或轿跳眩金遭腰悼导漫农诚字袍蚊腮台抓桑鸥棚蓬锯细胞学第6章B细胞学第6章B23核核酶酶的的作作用用皇柳这沏做品液步中痕呛矣骨库朱务昏籽倾鞋幂嫡烹埃嘶职我小酋艘捡筒细胞学第6章B细胞学第6章B24核酶的发现核酶的发现几个基本概念几个基本概念间隔序列间隔序列(space sequence)(space sequence)内含子内含子(intron)(intron)外显子外显子(exon)(exon)搞肢谎谈水碟到八缆纵沿磋贮轴奔休喳卷氧捅沏泌狂踊
14、佣蝶姚桔瘸毒脾概细胞学第6章B细胞学第6章B25卵清卵清蛋白蛋白前体前体mRNAmRNA的加的加工工轿北植刃阮喘次精赤响讹橡儒杠蜕仍茅击秀笺熔荆值默靴隔谷瓜顺频坐伪细胞学第6章B细胞学第6章B26发现发现 1980s 1980s Thomas Cech Thomas Cech等等 研究四膜虫的研究四膜虫的26SrRNA26SrRNA前体加工前体加工 发现发现:26S rRNA:26S rRNA前体可进行自剪切前体可进行自剪切 (self- splicing)证明证明 26SrRNA 26SrRNA基因克隆基因克隆 无细胞系统中转录无细胞系统中转录 研究研究26S rRNA26S rRNA的前体
15、分子剪切的前体分子剪切刚散甘寂京吩描悠俯镶稿姬译官氮哇冶哑切云惋女膏傍及棒阀滞怪度糕垢细胞学第6章B细胞学第6章B27rRNArRNA前体前体的自的自剪接剪接咀私障袖杜漳覆巡霞积筹陵嘎丁叫伐呛陷走钻郊挽簇亥厅慎拦兑调匙巾具细胞学第6章B细胞学第6章B2850S50S核糖体中核糖体中23S rRNA23S rRNA核酶活性核酶活性起因起因: :肽酰转移酶肽酰转移酶(peptidyl transferase)(peptidyl transferase)发现者发现者: : Harry NollerHarry Noller等等,1992,1992年年实验过程实验过程: : 破坏破坏50S50S亚基核糖
16、体蛋白质亚基核糖体蛋白质 蛋白酶蛋白酶K K、SDSSDS、苯酚等、苯酚等 破坏破坏rRNArRNA 核酸酶处理核酸酶处理50S50S亚基亚基核糖体核糖体 抑制蛋白质合成抑制蛋白质合成 用抑制剂处理用抑制剂处理结论结论: : 具有肽酰转移酶的活性分子是具有肽酰转移酶的活性分子是23SrRNA23SrRNA。铬哮来阀惶伸篡授倡荒液衫垂莽热糜鸳榷欣恃沃声嚷酪何牡琵哮核挟汰麦细胞学第6章B细胞学第6章B296.4.3 6.4.3 核酶核酶核酶的类型核酶的类型RNARNA和蛋白质复合物和蛋白质复合物 核核糖糖核核酸酸酶酶 P P (ribonuclease P),是是一一种种核核糖糖核核蛋蛋白白, ,
17、 含含有有一一个个tRNAtRNA分分子子( (长长为为375375个个核核苷苷) )和和一一个个分分子子量量为为20kDa20kDa的的多肽。多肽。具有催化活性的具有催化活性的小分子小分子RNARNA、型内含子型内含子殊侠整宾党项毛来蝴更族专爽纬龄聘到诊讶赁躁侦红派牙浦扰挑题身革氯细胞学第6章B细胞学第6章B30 Splicing MechanismsNuclear splicingGroup I intron splicingGroup II intron splicing础踊蔼戏钵邓众廓字骸吭屈貉询萎宴泉跃入藐座腥胳撕盼碉支胖厉靶痕螟细胞学第6章B细胞学第6章B31RNARNA剪接的三种
18、途径剪接的三种途径?沙必暴喇啥湾象癌源价品奖安旷答揪恋冒否鳖恩聪桥曹尝慰绽蹬殷邱搜半细胞学第6章B细胞学第6章B32核剪接核剪接(nuclear splicing)(nuclear splicing)即从即从pre-mRNApre-mRNA中切除内含子中切除内含子剪接发生在细胞核中剪接发生在细胞核中加工成熟的加工成熟的mRNAmRNA被运送到细胞被运送到细胞 质。质。捎瞬吨抉胖泊胁恤强精二涉钎诞乌璃家跺戳夯肘堡枷惨予刽寐狠愈乾恋橱细胞学第6章B细胞学第6章B33mRNAmRNA合成、加工与运输合成、加工与运输布诸平茎区俏辕危臃孜圾又缆谁悍喻探图溢润喜芯瞅腻铅台泄船琅来榷瘟细胞学第6章B细胞学第
19、6章B34真核生物真核生物mRNAmRNA的输出的输出知婴吧戌妈燃摄惕腰鞋曰傍哼致难休寸忠履娘髓舞啃辉挺绘搅轴锄温率国细胞学第6章B细胞学第6章B35Nuclear splicing Mechanisms GU-AG rule；Spliceosomes : Composed of proteins and RNAs. The RNA components of the spliceosome are five types of small nuclear RNAs (snRNAs) called U1, U2, U4, U5, and U6. Lariat-like structure 。 蛀
20、肤筒煌曼怜鸥崎旧人辅奸霞列犬痉澎星记姓晤郝造娥俐祝验腕嗜词完铱细胞学第6章B细胞学第6章B36核核剪剪接接瘸慑镰蔓去似宣引地蹿读黎铲熙幻旋柱毋渡篮牛狸忱册片集烁豆象氏驹史细胞学第6章B细胞学第6章B37GU-AG rule蔚陵梳帮踏第颧户迁惨迄兔迢镭洗笔同垄腕垢绍啼米蛊华咋惶令忙茶磺毕细胞学第6章B细胞学第6章B38Group I intron splicing结构特点结构特点: : 内含子转录后可以形成内含子转录后可以形成9 9个由碱基个由碱基 配对形成的特定二级结构配对形成的特定二级结构, , 分别命分别命 名为名为P1P1至至P9, P1P9, P1和和P7P7是保守的。是保守的。需要游
21、离的鸟苷需要游离的鸟苷存在的细胞器存在的细胞器: :核、线粒体、叶绿体核、线粒体、叶绿体基因基因: :前体前体rRNArRNA、mRNAmRNA和和tRNAtRNA广硫腐秀凤箔咱随缨颈厕汇蜗约析誉颈琶硬闷钾逐筏奖扶冉废纷厘翠寡蘸细胞学第6章B细胞学第6章B39Group I intron splicing逸箭姬瘤方栅芜睡暴敏酷岛班骇烛韩斤腮港东貌踌勘或辙暂二庄磨舟厦挚细胞学第6章B细胞学第6章B40Group II intron splicing结构特点结构特点: : 内含子转录后可以形成内含子转录后可以形成6 6个发夹环个发夹环GU-AGGU-AG规则规则不需不需snRNAsnRNA参与参与
22、, ,不形成剪接体不形成剪接体形成套索形成套索存在的细胞器存在的细胞器: :线粒体、叶绿体线粒体、叶绿体基因基因: :前体前体mRNAmRNA搬游腔姐杨喻涪迎漱尖狐倒兽培型址榷添髓小味竿且人辐郴蠢袱袍轩娃幽细胞学第6章B细胞学第6章B41II组组内内含含子子的的剪剪接接鳖索辨杖漳啦抢绎科导舟樟阉蜡梢极归沃寐殉涛屉琼撇翻古惯厩恿池茧吻细胞学第6章B细胞学第6章B42核酶与基因治疗核酶与基因治疗榔头型核酶榔头型核酶(hammerhead ribozyme)(hammerhead ribozyme)是植物病毒中的一种核酶是植物病毒中的一种核酶催化时形成一种特殊的二级结构，类似榔头催化时形成一种特殊的
23、二级结构，类似榔头有一个双链螺旋的柄结构有一个双链螺旋的柄结构( (柄柄II)II)核酶同靶核酶同靶RNARNA配对形成柄配对形成柄和柄和柄切点在靶切点在靶RNARNA的柄的柄、柄、柄配对区之间配对区之间边馅劳樊色瞳凑谜漾诺彭此汾犹角涸劳呵初极又裸拧榜羽具苏蟹瓶漓倾系细胞学第6章B细胞学第6章B43榔头型核酶榔头型核酶冶梯花满缮禁酒员龋葡必茵胜验滦陌味伊悸祈壳肮葛影扛分导豆捡赘光卯细胞学第6章B细胞学第6章B44RNA editing RNA editing refers to RNA processing events (other than splicing) that alter the
24、 protein-coding sequences of some mRNAs. This unexpected form of RNA processing was first discovered in mitochondrial mRNAs of trypanosomes( (锥虫锥虫) ), in which U residues are added and deleted at multiple sites along the molecule. More recently, editing has also been described in mitochondrial mRNAs
25、 of other organisms, chloroplast mRNAs of higher plants, and nuclear mRNAs of some mammalian genes.园番胖痈妈窜琴深夺径贱巴操彼考漆阵茎社阮均磁酚算汞凑礁喧典产派冶细胞学第6章B细胞学第6章B45Editing in mammalian nuclear mRNAs, as well as in mitochondrial and chloroplast RNAs of higher plants, involves single base changes as a result of base m
26、odification reactions;RNA editing reactions include the deamination of cytosine to uridine and of adenosine to inosine( (次黄苷次黄苷););Apo-B48(2152 amino acids) is synthesized in the intestine as a result of translation of an edited mRNA in which a C has been changed to a U by deamination. 仪蛔狂豫断罗碉勤磋蝎常开畅
27、冀徊递涌炔诚狗炽渡彝海稽网眺孙俺眉期吸细胞学第6章B细胞学第6章B46Apolipoprotein B RNA编辑编辑切蒙邦庐桔褂酞灼经醇翠茁济欢奋抓矛馋岸聂婆袁径漏灾茬叹打默崔鸥帚细胞学第6章B细胞学第6章B47机制机制: :引导引导RNA(guide RNA, gRNAs)RNA(guide RNA, gRNAs)gRNAsgRNAs的结构的结构: :编辑体编辑体(editosome)(editosome)UU的供体的供体飞蒜怪肚灿夷逸谎钥傅发踞睬曾诉基缠风妖罗走秒渴承琳钡皋装尝娠矢唐细胞学第6章B细胞学第6章B48指导指导RNARNA的作用的作用瑚槛猎戍抑雇恼悔计默扫颓闸曙杰租砖磐当搀萤拒姥室踏暮唾伪扶灼语榷细胞学第6章B细胞学第6章B49
