细菌检查与防治

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1、课程名称课程名称：医医 学学 微微 生生 物物 学学教学内容教学内容： 细菌感染的检查 方法及防治原则学学 时：时： 学时学时教学目的教学目的： 掌握掌握临床细菌标本的采集、送检原则临床细菌标本的采集、送检原则,革兰染革兰染色法的步骤色法的步骤 熟悉熟悉病原菌的检验程序、常用血清学试验的原病原菌的检验程序、常用血清学试验的原理理 了解了解细菌学检查在临床诊断中的重要性细菌学检查在临床诊断中的重要性教学方法教学方法：理论：理论教学重点、难点、关键教学重点、难点、关键：病原菌的检验程序病原菌的检验程序细菌学诊断细菌学诊断 (bacteriological diagnosis)示踪性检测示踪性检测l

2、形态学检查形态学检查 l分离培养分离培养l生化试验生化试验 l血清学鉴定血清学鉴定致病力和药敏测定致病力和药敏测定l动物实验动物实验l毒力检测毒力检测l药物敏感试验药物敏感试验病原微生物感染的检查法临床细菌标本的采集、送检原则临床细菌标本的采集、送检原则1.无菌操作无菌操作:避免人为污染避免人为污染 2.选准部位选准部位:根据疾病种类和病程不同根据疾病种类和病程不同, 采集不同标本采集不同标本(specimens) 如如: 伤寒伤寒 第一周第一周 取血取血 第二、三周第二、三周 取大、小便、骨髓取大、小便、骨髓3.早期取材早期取材 (1)疾病早期疾病早期 (2)使用抗菌药物之前使用抗菌药物之前

3、,如已用抗生素如已用抗生素,应停应停 用用12天天 (3)机体免疫因素形成之前机体免疫因素形成之前 (4)未出现合并或继发感染之前未出现合并或继发感染之前4. 快速送检快速送检 : 大多数细菌低温送检大多数细菌低温送检,但奈瑟球菌但奈瑟球菌须须30-40保温送检保温送检 标本采集的准确性是检查结果标本采集的准确性是检查结果可靠性的保证可靠性的保证1、直接涂片镜检直接涂片镜检n n形态与染色性具有特征的病原菌可直形态与染色性具有特征的病原菌可直接染色镜检，根据典型形态、排列、接染色镜检，根据典型形态、排列、染色性做初步诊断染色性做初步诊断(一一) 、病原菌分离鉴定的一般程序：病原菌分离鉴定的一般

4、程序： 一、形态学检查(1)不染色标本的检查不染色标本的检查 主要用于观察病原菌的某些形态特点主要用于观察病原菌的某些形态特点及运动性及运动性 常用的方法有压滴法和悬滴法常用的方法有压滴法和悬滴法 如如: :用压滴法观察霍乱弧菌的用压滴法观察霍乱弧菌的“鱼群样运动鱼群样运动”n n暗视野检查暗视野检查uu用于检查活菌、螺旋体及其动力用于检查活菌、螺旋体及其动力用于检查活菌、螺旋体及其动力用于检查活菌、螺旋体及其动力(2)染色标本的检查染色标本的检查染色染色单染单染复染复染正染正染负染负染 (negative staining)革兰染色法革兰染色法革兰染色法革兰染色法抗酸染色法抗酸染色法抗酸染色

5、法抗酸染色法荧光染色荧光染色荧光染色荧光染色单染色单染色:只用一种染料进行染色只用一种染料进行染色. 可分为可分为: 正染正染:标本着色标本着色,背景不着色背景不着色 负染负染:标本不着色标本不着色,背景着色背景着色 用于形态的观察用于形态的观察,不能鉴别染色性不能鉴别染色性复染色复染色:用两种或两种以上的染料进行用两种或两种以上的染料进行 染色染色目前常用的有目前常用的有:革兰染色法、抗酸染革兰染色法、抗酸染色法、荧光染色、特殊色法、荧光染色、特殊染色法染色法既可观察形态结构既可观察形态结构,又可鉴别染色性又可鉴别染色性革兰染色法步骤革兰染色法步骤:制片制片: 涂片涂片染色染色:结晶紫初染结

6、晶紫初染1分钟分钟水水冲洗冲洗碘液碘液媒染媒染1分钟分钟水水冲洗冲洗95%乙醇脱色乙醇脱色30秒左右秒左右水水冲洗冲洗稀释复红复染稀释复红复染30秒秒水水冲洗冲洗干后油镜下观察干后油镜下观察干燥干燥固定固定 涂涂 片片 干干 燥燥固固 定定 染染 色色镜镜 检检结果结果: 染成染成紫色紫色称革兰染色阳性称革兰染色阳性 G G+ + 染成染成红色红色称革兰染色阴性称革兰染色阴性 G G- - 原理原理: (1)等电点学说等电点学说 结晶紫为碱性染料结晶紫为碱性染料(2)化学学说化学学说 GG+ +含有核糖核酸镁盐含有核糖核酸镁盐, ,能与结晶紫能与结晶紫形成牢固的复合物形成牢固的复合物(3)通透

7、性学说通透性学说 GG+ + G G- -P I 23 46核糖核酸镁盐核糖核酸镁盐 + -+ -通透性通透性 小小 大大脂质脂质 少少 多多意义意义 : (1)鉴别细菌鉴别细菌 (2)指导临床用药指导临床用药 (3)了解细菌的致病性了解细菌的致病性二二、分离培养分离培养纯培养：纯培养： 根据不同标本采取不同培养基。根据不同标本采取不同培养基。 分离化脓性球菌如链球菌、肺炎球菌分离化脓性球菌如链球菌、肺炎球菌可采用血平板；分离脑膜炎球菌可采用巧可采用血平板；分离脑膜炎球菌可采用巧克力平板克力平板 菌落形态观察菌落形态观察: 大小、表面、透明度、边大小、表面、透明度、边缘、高度、色素、溶血等缘、

8、高度、色素、溶血等三三、生化反应：生化反应： 通过检测细菌代谢产物的生化反应通过检测细菌代谢产物的生化反应鉴定细菌的种类鉴定细菌的种类 乳糖发酵试验、甲基红试验、硫化氢试验等。乳糖发酵试验、甲基红试验、硫化氢试验等。 四四 、血清学鉴定血清学鉴定:(serological identification)： 用已知抗体检测标本中分离得到用已知抗体检测标本中分离得到的病原菌的血清型别，采用玻片凝集的病原菌的血清型别，采用玻片凝集法。法。 原理：原理： 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸

9、收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。呈负相关。 纸片扩散法纸片扩散法（Kirby-Bauer法） 五五 、药敏试验：药敏试验： 抑菌圈抑菌圈 或抑菌环或抑菌环纸片扩散法纸片扩散法原理：原理： 聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物

10、，实验时聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时加入加入100l100l浓度为浓度为10105 5 CFU/ml CFU/ml的菌液，盖上盖板，的菌液，盖上盖板，3535161620h20h观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，通过通过CLSICLSI标准判断其敏感和耐药。再取标准判断其敏感和耐药。再取0.01ml0.01ml容量接种容量接种环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代培养，经培养，经35

11、35过夜培养后观察最低抗菌药物浓度能杀死过夜培养后观察最低抗菌药物浓度能杀死99.999.9原始种入的细菌即为该菌的最低杀菌浓度原始种入的细菌即为该菌的最低杀菌浓度(MBC)(MBC)。 微量液体稀释法微量液体稀释法 (microdilution test) 用微量加样器接种用微量加样器接种100l100l 到到9696孔中，盖上盖板。孔中，盖上盖板。 同时作阳性、阴性对照。同时作阳性、阴性对照。 手工看浊度或仪器自动手工看浊度或仪器自动 判读。按照判读。按照CLSICLSI标准报标准报 告细菌对某抗菌药物为告细菌对某抗菌药物为 敏感、耐药和中介。敏感、耐药和中介。 原理：原理： E试条是一条

12、试条是一条5mm50mm无孔试剂载体，一面无孔试剂载体，一面固定有一系列预先制备的浓度呈连续指数增长稀释抗固定有一系列预先制备的浓度呈连续指数增长稀释抗菌药物，另一面有读数和判别的刻度。抗菌药物的梯菌药物，另一面有读数和判别的刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有度可覆盖有20个个MIC对倍稀释浓度的宽度范围。将对倍稀释浓度的宽度范围。将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度，的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑

13、菌浓度，对照对照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。标准判断其敏感、耐药、中介。 E-TEST 孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交 处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC) 。六、细菌成分的检测六、细菌成分的检测(detection of bacterial antigens)： 目前应用最为广泛的是细菌抗原的检测目前应用最为广泛的是细菌抗原的检测 如如: 协同凝集试验、间接凝集试验、协同凝集试验、间接凝集试验、 荧光抗体法、酶免疫法、核酸杂交、荧光抗体法、酶免疫法、核酸杂交、 聚合酶链反应

14、等聚合酶链反应等 七、检测细菌相应抗体七、检测细菌相应抗体 均为免疫学方法均为免疫学方法 经典方法如经典方法如: 凝集试验、沉淀反应、补体结合试验凝集试验、沉淀反应、补体结合试验 现代快速方法主要是免疫标记技术现代快速方法主要是免疫标记技术 通常采用取双份血清，其间间隔通常采用取双份血清，其间间隔12周。周。后一份血清抗体效价比前一份升高后一份血清抗体效价比前一份升高4倍以上倍以上有诊断意义。有诊断意义。 细菌感染的实验诊断细菌感染的实验诊断病原微生物感染的防治原则病原微生物感染的防治原则 微生物感染所导致的感染性疾病微生物感染所导致的感染性疾病的控制由预防和治疗两方面组成的控制由预防和治疗两

15、方面组成预防预防:对病原微生物传播的各个环节进对病原微生物传播的各个环节进 行控制行控制治疗治疗:是通过抗微生物药物和新医疗技是通过抗微生物药物和新医疗技 术来控制传染病的扩散和发展术来控制传染病的扩散和发展病原微生物感染的防治原则病原微生物感染的防治原则特异性免疫的分类特异性免疫的分类n n自然免疫n n人工免疫uu自然自然主动主动免疫：隐性或显性感染免疫：隐性或显性感染uu自然自然被动被动免疫：通过胎盘或初乳获得母体抗体免疫：通过胎盘或初乳获得母体抗体uu人工人工主动主动免疫：接种疫苗或类毒素等免疫：接种疫苗或类毒素等uu人工人工被动被动免疫：注射抗毒素或丙种球蛋白等免疫：注射抗毒素或丙种

16、球蛋白等第6章 细菌耐药性细菌耐药性第一节第一节 抗菌药物的种类及其作用机制抗菌药物的种类及其作用机制一一、抗菌药物概念抗菌药物概念 1.1.抗菌药物（抗菌药物（antibacterial agentsantibacterial agents） 指指对对病病原原菌菌具具有有抑抑制制或或杀杀灭灭作作用用、用用于于预预防防和和治治疗疗细细菌菌性性感感染染的的药药物物，包包括括抗抗生生素素（antibioticsantibiotics）和化学合成的药物。和化学合成的药物。2.抗生素（抗生素（antibiotic agents）：）： 微生物在其代谢过程中产生的能杀微生物在其代谢过程中产生的能杀灭或抑

17、制其它特异病原微生物的产物。灭或抑制其它特异病原微生物的产物。抗生素分子量小，低浓度就能发挥其生抗生素分子量小，低浓度就能发挥其生物活性，有天然和人工半合成两类。物活性，有天然和人工半合成两类。 二二、抗菌药物的种类抗菌药物的种类 （一）按抗菌药物化学结构和性质分类：（一）按抗菌药物化学结构和性质分类： 1.-内酰胺类内酰胺类（-lactam）青霉素青霉素青霉素青霉素（penicillinpenicillinpenicillinpenicillin）类：青霉素类：青霉素类：青霉素类：青霉素G GG G、甲氧西林等。、甲氧西林等。、甲氧西林等。、甲氧西林等。 头孢菌素头孢菌素头孢菌素头孢菌素（c

18、ephalosporincephalosporincephalosporincephalosporin）类：头孢唑啉等。类：头孢唑啉等。类：头孢唑啉等。类：头孢唑啉等。 头霉素：如头孢西丁。头霉素：如头孢西丁。头霉素：如头孢西丁。头霉素：如头孢西丁。 单环单环单环单环-内酰胺类：如氨曲南。内酰胺类：如氨曲南。内酰胺类：如氨曲南。内酰胺类：如氨曲南。 碳青霉素烯类：亚胺培南与西司他丁合用称泰能。碳青霉素烯类：亚胺培南与西司他丁合用称泰能。碳青霉素烯类：亚胺培南与西司他丁合用称泰能。碳青霉素烯类：亚胺培南与西司他丁合用称泰能。 -内酰胺酶抑制剂：如舒巴坦棒酸使酶失活。内酰胺酶抑制剂：如舒巴坦棒酸使

19、酶失活。内酰胺酶抑制剂：如舒巴坦棒酸使酶失活。内酰胺酶抑制剂：如舒巴坦棒酸使酶失活。 2 2. .大环内酯类大环内酯类（macrolidesmacrolides） 红霉素、螺旋霉素等。红霉素、螺旋霉素等。3 3. .氨基糖苷类氨基糖苷类（aminoglycosidesaminoglycosides） 链霉素、庆大霉素链霉素、庆大霉素4 4. .四环素类四环素类（tetracyclinetetracycline） 四环素、强力霉素等。四环素、强力霉素等。5 5. .氯霉素类氯霉素类（chloramphenicchloramphenic） 包括氯霉素、甲砜霉素。包括氯霉素、甲砜霉素。6 6. .化

20、学合成的抗菌药物化学合成的抗菌药物 磺胺类：磺胺嘧啶磺胺类：磺胺嘧啶（SDSD）、复方新诺明、复方新诺明 （SMZcoSMZco）等。等。 喹诺酮喹诺酮（fluroqinolonefluroqinolone）类：包括氟哌类：包括氟哌 酸、环丙沙星等酸、环丙沙星等。7 7. .其他其他 抗结核药物抗结核药物：利福平、异烟肼、乙胺丁醇、利福平、异烟肼、乙胺丁醇、吡嗪酰胺等。吡嗪酰胺等。 多肽类抗生素多肽类抗生素：多粘菌素类、万古霉素、多粘菌素类、万古霉素、杆菌肽、林可霉素和克林霉素等。杆菌肽、林可霉素和克林霉素等。（二）按生物来源分类（二）按生物来源分类 1 1 1 1. . . .细菌产生的抗生

21、素细菌产生的抗生素细菌产生的抗生素细菌产生的抗生素 如多粘菌素和杆菌肽。如多粘菌素和杆菌肽。如多粘菌素和杆菌肽。如多粘菌素和杆菌肽。 2 2 2 2. . . .真真真真菌菌菌菌产产产产生生生生的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素 如如如如青青青青霉霉霉霉素素素素及及及及头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素，现现现现在在在在多用其半合成产物。多用其半合成产物。多用其半合成产物。多用其半合成产物。 3 3 3 3. . . .放放放放线线线线菌菌菌菌产产产产生生生生的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素 放放放放线线线线菌菌菌菌是是是是生生生生产产产产抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的主主主主要要要要来来来来源

22、源源源。其其其其中中中中链链链链霉霉霉霉菌菌菌菌和和和和小小小小单单单单孢孢孢孢菌菌菌菌产产产产生生生生的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素最最最最多多多多。常常常常见见见见的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素包包包包括括括括链链链链霉霉霉霉素素素素、卡卡卡卡那那那那霉霉霉霉素素素素、四四四四环环环环素素素素、红红红红霉素、两性霉素霉素、两性霉素霉素、两性霉素霉素、两性霉素B B B B等。等。等。等。 根根根根据据据据对对对对病病病病原原原原菌菌菌菌的的的的作作作作用用用用靶靶靶靶位位位位，将将将将抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的作作作作用机制分为四类用机制分为四类用机制分为四类用机制分为四类（表（

23、表（表（表6-16-16-16-1）。 1.1.1.1.抑制细菌细胞壁合成抑制细菌细胞壁合成抑制细菌细胞壁合成抑制细菌细胞壁合成 2.2.2.2.影响胞浆膜通透性（多粘菌素）影响胞浆膜通透性（多粘菌素）影响胞浆膜通透性（多粘菌素）影响胞浆膜通透性（多粘菌素） 3.3.3.3.抑制蛋白质合成抑制蛋白质合成抑制蛋白质合成抑制蛋白质合成（大环内酯类、氨基糖甙大环内酯类、氨基糖甙大环内酯类、氨基糖甙大环内酯类、氨基糖甙类）类）类）类） 4.4.4.4.抑制核酸代谢：叶酸代谢；核酸合成（喹抑制核酸代谢：叶酸代谢；核酸合成（喹抑制核酸代谢：叶酸代谢；核酸合成（喹抑制核酸代谢：叶酸代谢；核酸合成（喹诺酮、磺

24、胺类）诺酮、磺胺类）诺酮、磺胺类）诺酮、磺胺类）三三、抗菌药物的作用机制、抗菌药物的作用机制 表表表表6-1 6-1 6-1 6-1 抗菌药物的主要作用部位抗菌药物的主要作用部位抗菌药物的主要作用部位抗菌药物的主要作用部位喹诺酮类喹诺酮类林可霉素类林可霉素类氨基糖苷类氨基糖苷类酮康唑酮康唑环丝氨酸环丝氨酸利福平利福平红霉素红霉素制霉菌素制霉菌素杆菌肽杆菌肽甲氧苄胺嘧啶甲氧苄胺嘧啶四环素类四环素类两性霉素两性霉素B万古霉素万古霉素磺胺药磺胺药氯霉素氯霉素多粘菌素类多粘菌素类-内酰胺类内酰胺类核酸合成核酸合成细胞蛋白合成细胞蛋白合成细胞膜渗透性细胞膜渗透性细胞壁细胞壁一、细菌的耐药性一、细菌的耐药

25、性（一）细（一）细菌耐药性（菌耐药性（drug resistancedrug resistance） 亦亦亦亦称称称称抗抗抗抗药药药药性性性性，是是是是指指指指细细细细菌菌菌菌对对对对某某某某抗抗抗抗菌菌菌菌药药药药物物物物（抗抗抗抗生生生生素素素素或或或或消消消消毒毒毒毒剂剂剂剂）的的的的相相相相对对对对抵抵抵抵抗抗抗抗性性性性。指指指指病病病病原原原原体体体体或或或或肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤细细细细胞胞胞胞对对对对反反反反复复复复应应应应用用用用的的的的化化化化学学学学治治治治疗疗疗疗药药药药物物物物敏敏敏敏感感感感性性性性降降降降低低低低或或或或消消消消失失失失的的的的现象。现象。现象。现象。（

26、二）耐（二）耐药性的程度药性的程度 用用用用某某某某药药药药物物物物对对对对细细细细菌菌菌菌的的的的最最最最小小小小抑抑抑抑菌菌菌菌浓浓浓浓度度度度（MICMICMICMIC）表表表表示示示示。临临临临床床床床上上上上有有有有效效效效药药药药物物物物治治治治疗疗疗疗剂剂剂剂量量量量在在在在血血血血清清清清中中中中浓浓浓浓度度度度大大大大于于于于最最最最小小小小抑菌浓度称为敏感，反之称为耐药。抑菌浓度称为敏感，反之称为耐药。抑菌浓度称为敏感，反之称为耐药。抑菌浓度称为敏感，反之称为耐药。(三三)耐药性产生的机制耐药性产生的机制1.产生水解酶和钝化酶产生水解酶和钝化酶2.改变细胞膜的通透性改变细胞

27、膜的通透性3.改变药物作用位点改变药物作用位点4.主动外排泵的作用主动外排泵的作用5.生物膜形成生物膜形成(四四)控制控制耐药性的策略耐药性的策略1.合理用药合理用药2.严格执行消毒隔离制度严格执行消毒隔离制度3.研制新的抗菌药物研制新的抗菌药物 4.破坏耐药基因破坏耐药基因药敏实验等指导药敏实验等指导(四四)控制控制耐药性的策略耐药性的策略l l1.合理使用抗菌药物合理使用抗菌药物l l 制定抗生素用药常规，教育医务工制定抗生素用药常规，教育医务工作者和病人规范化用药，供临床选用抗作者和病人规范化用药，供临床选用抗菌药物参考。菌药物参考。l l 严格根据适应证选用药物严格根据适应证选用药物l

28、 l病人用药前应尽可能进行病原学检测，病人用药前应尽可能进行病原学检测，并进行药敏试验，作为调整用药的参考。并进行药敏试验，作为调整用药的参考。l l 按药物的药动学特性，制定合理的用按药物的药动学特性，制定合理的用药方案药方案。l l 用药疗程应尽量缩短，一种抗菌药物用药疗程应尽量缩短，一种抗菌药物可以控制的可以控制的感染感染则不任意采用多种药物联则不任意采用多种药物联合。合。l l 严格掌握抗菌药物的局部应用、预防严格掌握抗菌药物的局部应用、预防应用和联合用药，避免滥用。应用和联合用药，避免滥用。2.严格执行消毒隔离制度严格执行消毒隔离制度3.加强药政管理加强药政管理4.研发新抗菌药物研发

29、新抗菌药物 5.破坏耐药基因破坏耐药基因 传染病控制传染病控制三大原则三大原则:1.查明和控制传染源查明和控制传染源2.切断传播途径切断传播途径3.提高健康人群的免疫力提高健康人群的免疫力消毒与灭菌是控制传染源的重要手段消毒与灭菌是控制传染源的重要手段消毒与灭菌消毒与灭菌 消毒消毒（disinfection）：）： 杀死物体上病原杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽孢微生物的方法，并不一定能杀死含芽孢的细菌或非病原微生物。的细菌或非病原微生物。灭菌（灭菌（sterilization）: 杀死物体上所有微生物的方法。杀死物体上所有微生物的方法。 包括致病菌、非致病菌、繁殖包括致病菌、非

30、致病菌、繁殖体和芽胞。体和芽胞。 抑菌：抑菌： 抑制体内或体外细菌的生长。抑制体内或体外细菌的生长。 防腐：防腐： 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法 无菌（无菌（asepsis）：）： 没有活菌的意思。没有活菌的意思。无菌状态是灭菌的结果。无菌状态是灭菌的结果。 无菌操作（无菌操作（antiseptic technique）：）： 防止细菌进入人体或其他物品防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。的操作技术。 物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法一、热力灭菌法一、热力灭菌法热力灭菌法有干热灭菌和湿热灭菌两大类热力灭菌法有干热灭菌和湿热灭菌两大类 在同一温度下，后者比前者的

31、效力在同一温度下，后者比前者的效力大。大。 这是这是因为因为： *湿热中菌体蛋白较易凝固。湿热中菌体蛋白较易凝固。 *湿热的穿透力比干热大。湿热的穿透力比干热大。 *湿热的蒸汽有潜热存在湿热的蒸汽有潜热存在。为什么为什么湿热灭菌比干热灭菌效力大湿热灭菌比干热灭菌效力大干热灭菌干热灭菌 ： 干热的杀菌作用是通过脱水干干热的杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性。燥和大分子变性。 1.焚烧法：直接点燃或在焚烧炉内焚烧。焚烧法：直接点燃或在焚烧炉内焚烧。 是一种彻底的灭菌方法。是一种彻底的灭菌方法。 适用于废弃物品或动物尸体。适用于废弃物品或动物尸体。 2.烧灼法烧灼法：直接用火焰灭菌直接用火焰灭菌。

32、适用于接种环，试管口等的灭菌。适用于接种环，试管口等的灭菌。 3.干烤法：将物品置干烤箱内，加热至干烤法：将物品置干烤箱内，加热至 160170 0C 2h。 适用于高温下不变质、不损坏、不适用于高温下不变质、不损坏、不 蒸发的物品。蒸发的物品。 4.红外线：利用电磁波的热效应灭菌。红外线：利用电磁波的热效应灭菌。 110 m波长的热波长的热效应最强。效应最强。 适用于医疗器械的灭菌。适用于医疗器械的灭菌。 湿热灭菌：湿热灭菌： 利用热蒸汽的高温使微生物利用热蒸汽的高温使微生物的蛋白质变性。的蛋白质变性。 1.巴氏消毒法：巴氏消毒法： 用较低温度用较低温度61.162.80c c ，30min

33、; 71.70c c , 1530s杀灭液体中的病原杀灭液体中的病原 微生物或特微生物或特 定的微生物，而仍保持物品中所需的不定的微生物，而仍保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法。耐热成分不被破坏的消毒方法。 用于牛乳制品、酒类等的消毒用于牛乳制品、酒类等的消毒 2.煮沸法煮沸法: 100 0c c , 水浴，30min30min。 食具、一般外科器械消毒。食具、一般外科器械消毒。 杀死芽胞需杀死芽胞需13小时。小时。 3.流动蒸气消毒法：流动蒸气消毒法： 100 0c ,c ,汽浴，30min30min 可杀死细菌繁殖体，但不能杀死芽胞可杀死细菌繁殖体，但不能杀死芽胞。 4.间歇蒸汽

34、灭菌法：间歇蒸汽灭菌法： 100 0c c,汽浴,30min/30min/次次 流流通通蒸蒸汽汽消消毒毒法法重重复复三三次次，每每次次间间歇歇期期置置3737温温箱箱过过夜夜，促促使使芽芽胞胞发发芽芽变变为为繁繁殖殖体体，被下一次蒸汽灭菌时杀灭。被下一次蒸汽灭菌时杀灭。 主主要要用用于于营营养养培培养养基基的的灭灭菌菌，可可杀杀死死芽芽胞。胞。 5.高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法： 121.3 0c c 汽浴（汽浴（103.4kPa），），1520min可可杀灭包括细菌芽孢在内的所有微生物杀灭包括细菌芽孢在内的所有微生物 用于培养基、生理盐水、手术敷料用于培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温、耐

35、湿物品的灭菌。等耐高温、耐湿物品的灭菌。 灭菌效果最好、应用最广泛的灭菌方法。灭菌效果最好、应用最广泛的灭菌方法。 二、辐射杀菌法二、辐射杀菌法（一）紫外线（一）紫外线（ultraviolet ray，UV）杀菌杀菌 波长波长200300nm的紫外线有杀菌作用，的紫外线有杀菌作用， 其中以其中以260266nm最强。最强。*杀菌机制：杀菌机制：干扰干扰DNA的复制与转录。的复制与转录。 *杀菌作用特点：杀菌作用特点：杀菌作用强杀菌作用强,穿透力弱。穿透力弱。 *适用范围：适用范围： 手术室、传染病房、细菌实手术室、传染病房、细菌实验室的空气消毒验室的空气消毒,或不耐热物品的表或不耐热物品的表面

36、消毒面消毒。（二）电离辐射二）电离辐射 ：高速电子、射线、高速电子、射线、r r射线等。射线等。应用范围：一次性医用塑料制品；食品。应用范围：一次性医用塑料制品；食品。 三、三、过滤除菌法过滤除菌法（filtration） 用物理阻留的方法将液体或空气用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以达到无菌的目的。中的细菌除去，以达到无菌的目的。 血清、抗生素、抗毒素等除菌。血清、抗生素、抗毒素等除菌。 四、干燥与低温抑菌法四、干燥与低温抑菌法 保存菌种保存菌种:冷冻真空干燥法冷冻真空干燥法 lyophilization 五、超声波杀菌法五、超声波杀菌法第二节第二节 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法一

37、、化学消毒剂的杀菌机制一、化学消毒剂的杀菌机制二、消毒剂的主要种类二、消毒剂的主要种类 醇类醇类-乙醇（乙醇（7075%） 碘酒碘酒 2%2.5% 、 新洁尔灭新洁尔灭 0.05%0.1%第三节第三节 影响消毒灭菌效果的因素影响消毒灭菌效果的因素一、消毒剂的性质、浓度与作用时间一、消毒剂的性质、浓度与作用时间二、微生物的种类与数量二、微生物的种类与数量三、温度三、温度 四、酸碱度四、酸碱度 五、有机物五、有机物病病原微生物实验室生物安全原微生物实验室生物安全 生生物物安安全全（biosafetybiosafety）是是生生物物技技术术安安全全（safety safety of of biote

38、chnologybiotechnology）的简称。的简称。 狭狭义义地地指指现现代代生生物物技技术术的的研研究究、开开发发、应应用用及及转转基基因因生生物物可可能能对对生生物物多多样样性性、生生态态环环境境和和人人类类健健康康产产生生潜潜在在的危害。的危害。 广广义义地地指指与与生生物物有有关关的的各各种种因因素素对对社社会会、经经济济、人人类类健健康康及及生生态态环环境境所所产生的危害或潜在风险。产生的危害或潜在风险。 一、病原微生物的分类一、病原微生物的分类 根根据据传传染染性性、感感染染后后对对个个体体或或者者群群体体的危害程度，病原微生物分为四类：的危害程度，病原微生物分为四类： 第

39、第一一类类是是指指能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物非非常常严严重重疾疾病病的的微微生生物物，以以及及我我国国尚尚未未发发现现或或者者已经宣布消灭的微生物。已经宣布消灭的微生物。 第第二二类类是是指指能能够够引引起起人人类类或或者者动动物物严严重重疾疾病病，比比较较容容易易直直接接或或者者间间接接在在人人与与人人、动动物与人、动物与动物间传播的微生物。物与人、动物与动物间传播的微生物。 第第三三类类是是指指能能够够引引起起人人或或动动物物疾疾病病，但但一一般般情情况况下下对对人人、动动物物或或环环境境不不构构成成严严重重危危害害，传传播播风风险险有有限限，实实验验室室感感染染后后很很少少

40、引引起起严严重重疾疾病病，并并且且具具备备有有效效治治疗疗和和预预防防措措施施的的微微生生物。物。 第第四四类类是是指指在在通通常常情情况况下下不不会会引引起起人人或或动动物物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。 第第一一类类、第第二二类类统统称称为为高高致致病病性性病病原原微微生生物物。 二、病原微生物实验室的分级二、病原微生物实验室的分级级别级别处理对象处理对象一级一级对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子人、动植物致病的致病因子。二级二级对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危对

41、人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，成严重危害，具具有有效的预防和治疗措施有有效的预防和治疗措施。三级三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施预防治疗措施。四级四级 对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶

42、胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗措施子。没有预防治疗措施。 一一、二二级级实实验验室室不不得得从从事事高高致致病病性性病病原原微微生生物物实实验验活活动动。三三级级、四四级级实实验验室从事高致病性病原微生物实验活动。室从事高致病性病原微生物实验活动。 从从事事高高致致病病性性病病原原微微生生物物相相关关实实验验活活动动应应当当有有名名以以上上的的工工作作人人员员共共同同进进行行。在在同同一一个个实实验验室室的的同同一一个个独独立立安安全全区区域域内内，只只能能同同时时从从事事一一种种高高致致病病性性病病原原微微生生物物的的

43、相相关关实实验验活活动动。应应有有健健全全安安全全保保卫制度卫制度 。 生物安全生物安全三、实验室感染的控制以及三、实验室感染的控制以及监督和法律责任监督和法律责任 实实验验室室感感染染控控制制工工作作包包括括定定期期检检查查实实验验室室的的生生物物安安全全防防护护、病病原原微微生生物物菌菌（毒毒）种种和和样样本本保保存存与与使使用用、安安全全操操作作、实实验验室室排排放放的的废废水水和和废废气气以以及及其其他他废废物物处处置置等等实实施情况。施情况。 实实验验室室发发生生高高致致病病性性病病原原微微生生物物泄泄漏漏时时，预预防防、控控制制措措施施包包括括：封封闭闭被被病病原原微微生生物物污污

44、染染的的实实验验室室或或可可能能造造成成病病原原微微生生物物扩扩散散的的场场所所；开开展展流流行行病病学学调调查查；对对病病人人进进行行隔隔离离治治疗疗，对对相相关关人人员员进进行行医医学学检检查查；对对密密切切接接触触者者进进行行医医学学观观察察；进进行行现现场场消消毒毒；对对染染疫疫或或者者疑疑似似染染疫疫的的动动物物采采取隔离、扑杀等措施。取隔离、扑杀等措施。第十六章第十六章 螺旋体螺旋体要求掌握：要求掌握：1、掌握掌握钩端螺旋体的致病性及防钩端螺旋体的致病性及防治原则；治原则；2、熟悉熟悉梅毒螺旋体的致病性，检梅毒螺旋体的致病性，检验方法及防治原则；验方法及防治原则；3、了解了解螺旋体

45、的概念，对人类有螺旋体的概念，对人类有致病性的螺旋体属。致病性的螺旋体属。一、概念一、概念螺螺旋旋体体（spirochete）是是一一类类细细长长、柔柔软软、呈呈螺螺旋旋形形弯弯曲曲，运运动活泼的原核细胞型微生物。动活泼的原核细胞型微生物。二、种属：二、种属：螺旋体属名螺旋体属名螺旋特征螺旋特征代表株代表株致致 病病疏螺旋体属疏螺旋体属(Borrelia)3-10不规则不规则伯氏螺旋体回伯氏螺旋体回归热螺旋体归热螺旋体流行性回流行性回归热归热密螺旋体属密螺旋体属(Treponema)8-14规则细密，规则细密，两端尖直两端尖直苍白螺旋体苍白螺旋体雅司螺旋体雅司螺旋体梅毒梅毒钩端螺旋体钩端螺旋体

46、属属(Leptospira)规则更多更细密，规则更多更细密，一端或两端钩状一端或两端钩状问号钩端螺旋问号钩端螺旋体体钩端螺旋钩端螺旋体病体病一、生物学性状一、生物学性状 1 1、形态、结构及染色、形态、结构及染色 细长，螺旋密而规则细长，螺旋密而规则 一端或两端弯曲一端或两端弯曲呈钩状，呈呈钩状，呈C C、S S形形 外膜与肽聚糖层之间有两根轴丝（与运动外膜与肽聚糖层之间有两根轴丝（与运动 有关）有关） 革兰阴性，着色难，常用革兰阴性，着色难，常用于于FontanaFontana镀银镀银 染色染色（棕褐色）（棕褐色）第一节钩端螺旋体第一节钩端螺旋体 （钩体）（钩体） 黄疸出血热群钩端螺旋体黄疸

47、出血热群钩端螺旋体2 2、培养特性、培养特性 钩体是目前钩体是目前唯一唯一能人工培养的螺能人工培养的螺旋体旋体 常用常用Korthof （柯索夫）柯索夫）培养基培养基 生生长长最最适适温温度度为为2830，2周周后后出现云雾状出现云雾状 动物培养（小鼠）动物培养（小鼠）3 3、抵抗力、抵抗力 对热敏感，对热敏感，5656，1010分钟即死亡分钟即死亡 对消毒剂敏感对消毒剂敏感 对对青霉素青霉素、金霉素敏感，治疗首选、金霉素敏感，治疗首选二、致病性二、致病性 1、致病物质、致病物质 溶血毒素溶血毒素 细胞毒性因子细胞毒性因子CTF 内毒素样物质（脂多糖样物质）内毒素样物质（脂多糖样物质） 细胞致

48、病作用细胞致病作用（CPE）物质物质 其他酶类（脂酶，脱氢酶其他酶类（脂酶，脱氢酶）2、所致疾病、所致疾病钩端螺旋体病（钩体钩端螺旋体病（钩体病）俗称打谷黄，属自然疫源病）俗称打谷黄，属自然疫源性疾病。性疾病。传传 染染 源：源：鼠、猪（我国是幼猪）鼠、猪（我国是幼猪）传播途径：传播途径：经健康或破损皮肤粘膜经健康或破损皮肤粘膜3、致病机制：、致病机制：钩体钩体经皮肤粘膜进入人体经皮肤粘膜进入人体在局部迅速繁殖在局部迅速繁殖引起钩体血症、败血症引起钩体血症、败血症向全身毛细血管内皮细胞扩散向全身毛细血管内皮细胞扩散至肝、肾、心肺、脑、肌肉损害至肝、肾、心肺、脑、肌肉损害 4 4、表现：、表现：

49、 起病急、高热、乏力、头痛、全身酸起病急、高热、乏力、头痛、全身酸痛、眼结膜充血、腓肠肌触痛、浅表淋巴痛、眼结膜充血、腓肠肌触痛、浅表淋巴结肿大，严重者、有出血、黄疸、休克、结肿大，严重者、有出血、黄疸、休克、DIC、伴心、肾功能不全。伴心、肾功能不全。 寒热酸痛一身乏寒热酸痛一身乏 眼红腿痛淋巴大眼红腿痛淋巴大5、临床类型：、临床类型：黄疸出血型黄疸出血型-最常见最常见流感伤寒型流感伤寒型肺出血型肺出血型-最严重最严重脑膜脑炎型脑膜脑炎型肾功能衰竭型肾功能衰竭型 三、微生物学检查三、微生物学检查 1 1、病原体检查、病原体检查 直接镜检：直接镜检：暗视野观察活体、镀银染色片暗视野观察活体、镀

50、银染色片 分离培养：分离培养：标本接种标本接种于于KorthofKorthof培养基培养基 动物接种：动物接种： 核酸检测核酸检测：PCRPCR、DNADNA探针探针 2 2、血清学诊断、血清学诊断 显微凝集试验（凝集溶解）：显微凝集试验（凝集溶解）： 已知钩体已知钩体+ +血清血清 小蜘蛛样凝集小蜘蛛样凝集 血清中补体含量高血清中补体含量高 凝集稍后溶解凝集稍后溶解 1:4001:400，4 4倍倍 补体结合试验：补体结合试验： 1:201:20四、防治原则四、防治原则 （一）控制传染源（一）控制传染源 （1）灭鼠）灭鼠 （2）加强家畜管理保护水源）加强家畜管理保护水源 （二）接种疫苗（二）

51、接种疫苗 （三）治疗青霉素（三）治疗青霉素首选首选第二节密螺旋体属第二节密螺旋体属一、生物学特性一、生物学特性 1、形态结构、形态结构（同前、略）（同前、略） 2、培养特性：、培养特性：不能进行人工培养不能进行人工培养 3、抵抗力：、抵抗力：极弱，对温度、干燥、极弱，对温度、干燥、 化学消毒剂、抗生素等均敏感化学消毒剂、抗生素等均敏感与人类疾病密切相关的代表株是引起与人类疾病密切相关的代表株是引起梅毒梅毒的的苍白螺旋体苍白螺旋体苍白亚种。苍白亚种。二、致病性二、致病性 1、梅毒螺旋体在自然情况下只感染人，、梅毒螺旋体在自然情况下只感染人，人是梅毒螺旋体的人是梅毒螺旋体的唯一宿主唯一宿主，也是梅

52、毒的，也是梅毒的唯唯一传染源。一传染源。 2、梅毒按传播途径分梅毒按传播途径分先天梅毒先天梅毒（胎传梅（胎传梅毒）和毒）和后天梅毒后天梅毒（获得性梅毒）。（获得性梅毒）。 3、获得性梅毒，经获得性梅毒，经性接触传播性接触传播，以反复，以反复隐伏和再发为特征，临床分为三期。隐伏和再发为特征，临床分为三期。期梅毒（初期）又称初疮期梅毒（初期）又称初疮 破坏性小，破坏性小，感染性极强感染性极强 感染感染后后3周左右，局部出现，周左右，局部出现，无痛性硬结无痛性硬结称称“硬下疳硬下疳” 多见于外生殖器多见于外生殖器 48周后，不治自愈周后，不治自愈期梅毒期梅毒 硬下疳自愈后，经过硬下疳自愈后，经过23

53、23个月无症状潜伏个月无症状潜伏期后进入期后进入期期 破坏性小，感染性强破坏性小，感染性强 出现苍白亚种螺旋体血症出现苍白亚种螺旋体血症 全身皮肤粘膜梅毒疹全身皮肤粘膜梅毒疹 全身淋巴结肿大，并向骨、关节、眼和其全身淋巴结肿大，并向骨、关节、眼和其他脏器扩散他脏器扩散期梅毒期梅毒 发性于感染发性于感染后后2 2年左右，也有长达年左右，也有长达10151015年之久年之久 感染性小，破坏性大感染性小，破坏性大 病变播及全身组织器官（皮肤、肝、病变播及全身组织器官（皮肤、肝、脾、骨骼）脾、骨骼） 慢性肉芽肿，损害进展和消退常交替慢性肉芽肿，损害进展和消退常交替出现出现 严重者危及生命严重者危及生命

54、4、先天梅毒（胎传梅毒）、先天梅毒（胎传梅毒）多发于在妊娠多发于在妊娠4个月之后个月之后 引引起起胎胎儿儿全全身身感感染染导导致致流流产产、早早产产和和死胎死胎 出出生生梅梅毒毒婴婴儿儿，可可表表现现为为马马鞍鞍鼻鼻、锯锯齿齿形形牙牙，间间质质性性角角膜膜炎炎、先先天天性耳聋等。性耳聋等。三、微生物学检查三、微生物学检查（一）标本（一）标本期梅毒期梅毒硬下疳渗出物硬下疳渗出物期梅毒期梅毒梅毒疹渗出物，淋梅毒疹渗出物，淋巴结抽取液巴结抽取液（二）方法（二）方法、显微镜检查、显微镜检查2、血清学诊断、血清学诊断 非特异性血清学试验非特异性血清学试验 抗原抗原为（正常牛心肌的心脂质）为（正常牛心肌的

55、心脂质） 血清中的反应素为抗脂质血清中的反应素为抗脂质抗体抗体。 方法方法有有VDRL（性病研究实验室试验）性病研究实验室试验） Veneral Disease Research Laboratory RPR（快速血浆反应素试验）快速血浆反应素试验） Rapid Plasma Reagin 适用于大量筛选适用于大量筛选特异性血清学试验特异性血清学试验抗原抗原为为（NicholsNichols株螺旋体）株螺旋体）抗体抗体为螺旋体特异性抗体为螺旋体特异性抗体方方法法有有FTA-ABSFTA-ABS试试验验（荧荧光光梅梅毒螺旋体抗体吸收试验）毒螺旋体抗体吸收试验）优点：优点：特异性强，可用于梅毒螺特

56、异性强，可用于梅毒螺 旋体旋体证实试验证实试验第十七章第十七章 支原体支原体要求掌握：要求掌握：1、掌握支原体的概念、形态结构特点、掌握支原体的概念、形态结构特点及培养特性；及培养特性；2、掌握主要病原性支原体的传播途径、掌握主要病原性支原体的传播途径及所致疾病；及所致疾病；3、熟悉支原体与、熟悉支原体与L型细菌的区别。型细菌的区别。第一节第一节 支原体的概念及种类支原体的概念及种类一、概念：一、概念： 支原体（支原体（MycoplasmaMycoplasma）是一类是一类无无细胞壁细胞壁、形态上呈、形态上呈多形性多形性、可、可通过除菌通过除菌滤器滤器、能在无生命的、能在无生命的培养基中生长培

57、养基中生长繁殖繁殖的的最小最小的的原核细胞型微生物原核细胞型微生物。支支原原体体属属于于柔柔膜膜体体纲纲中中的的支支原原体体目目，下下分三个科：分三个科：支原体科支原体科Mycoplasmataceae螺原体科螺原体科Spiroplasmataceae无胆甾原体科无胆甾原体科Acholeplasmataceae支原体科支原体科支原体属支原体属64个种个种脲原体属脲原体属2个种个种对人类主要致病性支原体包括：对人类主要致病性支原体包括： 支原体支原体 致病性致病性肺炎支原体肺炎支原体 Mpneumoniae 肺炎、支气管炎肺炎、支气管炎人型支原体人型支原体 Mhominis 泌尿生殖道感染泌尿生

58、殖道感染生殖支原体生殖支原体 Mgenitalium 泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染穿透支原体穿透支原体 Mpenetraus 多继发于艾滋病多继发于艾滋病溶脲脲原体溶脲脲原体 Uurealyticum 泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染二、生物学性状二、生物学性状（一）形态结构（一）形态结构 体体 积：积：最小最小0.20.3m，能能通过除菌滤器通过除菌滤器 形形 态：态：球形、丝状等球形、丝状等 肺炎支原体肺炎支原体 结结 构：构：细胞膜由三层含蛋白质和脂细胞膜由三层含蛋白质和脂 质成分构成，内外两层为蛋白质，中层质成分构成，内外两层为蛋白质，中层 为脂质为脂质 （含固醇）细胞膜外有荚膜（致（含固

59、醇）细胞膜外有荚膜（致 病因素），还有特殊的顶端结构（具有病因素），还有特殊的顶端结构（具有 粘附细胞），微丝粘附细胞），微丝网（与运动有关）网（与运动有关） 没有细胞壁没有细胞壁 染染 色色 性：性：革兰染色革兰染色阴性阴性，Giemsa染染 色呈色呈淡紫色淡紫色。（二）培养特性（二）培养特性 营养要求比细菌高（人和动物血浆）营养要求比细菌高（人和动物血浆） 生长缓慢，数日至数周后出现菌落生长缓慢，数日至数周后出现菌落 油煎荷包蛋样菌落油煎荷包蛋样菌落 、“T”株株（三）生化反应（三）生化反应支原体名称支原体名称葡萄糖葡萄糖精氨酸精氨酸尿素尿素肺炎支原体肺炎支原体+人型支原体人型支原体+生殖

60、支原体生殖支原体+穿透支原体穿透支原体+溶脲脲原体溶脲脲原体+（四）抵抗力（四）抵抗力n n对理化因素的抵抗力较细菌弱对理化因素的抵抗力较细菌弱 对抑制对抑制细胞壁细胞壁合成的抗生素耐受合成的抗生素耐受 对干扰对干扰蛋白质蛋白质合成的抗生素敏感合成的抗生素敏感（五）支原体（五）支原体与与L型细菌的区别型细菌的区别性状性状支支 原原 体体L-型细菌型细菌细胞壁细胞壁没没 有有缺缺 少少分分 布布自然界广泛自然界广泛多在诱导因素下形成多在诱导因素下形成胆固醇胆固醇生长时需要生长时需要不需要不需要遗传性遗传性与细菌无关与细菌无关与原细菌有关与原细菌有关变异性变异性不能变异不能变异可回复为原菌可回复为

61、原菌第二节第二节 主要致病性支原体主要致病性支原体一、肺炎支原体一、肺炎支原体-所致疾病所致疾病支原体肺炎支原体肺炎n n传播途径传播途径 - 经飞沫传播经飞沫传播n n发病年龄发病年龄 - - 儿童及青少年多见儿童及青少年多见n n潜伏期潜伏期 - - 2 23W3Wn n临床表现临床表现-发热发热（约（约3939）、头痛、）、头痛、持续持续 性顽固咳嗽性顽固咳嗽、胸痛等。一般经、胸痛等。一般经3 310d10d主要主要 症状消失，但咳嗽可以持续症状消失，但咳嗽可以持续1 1个月之久。个月之久。二、脲原体属二、脲原体属n n解脲脲原体（解脲脲原体（U. urealyticum） 亦称溶脲脲原

62、体亦称溶脲脲原体n n非淋菌性尿道炎（非淋菌性尿道炎（nongonococcal urethritis NGU）n n现已被列为性传播疾病的病原体。现已被列为性传播疾病的病原体。第十八章立克次体第十八章立克次体重点要求：重点要求：1、掌握立克次体的概念，主要种类、掌握立克次体的概念，主要种类及致病特点及致病特点2、熟悉立克次体的共同特点、熟悉立克次体的共同特点一、概念一、概念立克次体立克次体（Rickettsia）是一类是一类严格活细胞内寄生，以节肢动物为严格活细胞内寄生，以节肢动物为传播媒介的原核细胞型微生物。传播媒介的原核细胞型微生物。第十八章立克次体第十八章立克次体二、特点二、特点1、大

63、小介于细菌与病毒之间，多形态，、大小介于细菌与病毒之间，多形态，革兰阴性；革兰阴性；2、含、含RNA和和DNA两种核酸；两种核酸；3、缺乏酶系统，严格、缺乏酶系统，严格活细胞内寄生活细胞内寄生；4、以、以二分裂二分裂方式繁殖；方式繁殖；5、以、以节肢动物节肢动物为媒介；为媒介；6、多为、多为自然疫源性自然疫源性疾病；疾病；7、对多种、对多种抗生素敏感抗生素敏感。致病机制致病机制致病物质：致病物质：致病机制：致病机制：病理部位：病理部位：内毒素、磷脂酶内毒素、磷脂酶A节肢动物节肢动物叮咬或粪便叮咬或粪便局部（淋巴组织、小血管）局部（淋巴组织、小血管）全身小血管内皮细胞全身小血管内皮细胞高热、头痛

64、、皮疹高热、头痛、皮疹血管血管第一次菌血症第一次菌血症第二次菌血症第二次菌血症普氏立克次体普氏立克次体（R.prowazekii）传染源：传染源：病人病人传播媒介：传播媒介：体虱体虱 人虱人虱人虱人虱人虱人虱人人人人流行性斑疹伤寒流行性斑疹伤寒传播方式传播方式恙虫病立克次体恙虫病立克次体（R.tsutsugamushi）恙虫病恙虫病的的传播方式传播方式传播媒介，储存宿主：传播媒介，储存宿主：恙螨恙螨鼠等鼠等幼虫幼虫卵卵成虫成虫稚虫稚虫稚虫稚虫成虫成虫卵卵稚虫稚虫(第二第二代代)人等人等莫氏立克次体莫氏立克次体（R.typhi）地方性斑疹伤寒（鼠型斑疹伤寒）地方性斑疹伤寒（鼠型斑疹伤寒）传播方式

65、传播方式鼠鼠鼠虱鼠虱鼠鼠鼠蚤鼠蚤鼠蚤鼠蚤人人 种类种类 传染源传染源 媒介昆虫媒介昆虫 主要临床表现主要临床表现 免疫力免疫力 普氏普氏立克次体立克次体 人人 人体虱人体虱 发热、头痛、皮疹发热、头痛、皮疹 持久持久（流行性（流行性斑疹伤寒）斑疹伤寒） 神经系统、心血管神经系统、心血管 系统损伤系统损伤莫氏立克氏体莫氏立克氏体 鼠等鼠等 鼠蚤鼠蚤 发热、头痛、皮疹发热、头痛、皮疹 持久持久（地方性（地方性斑疹伤寒）斑疹伤寒）恙虫病立恙虫病立克次体克次体 鼠等鼠等 恙螨恙螨 局部黑色焦痂局部黑色焦痂 持久持久（恙虫热）（恙虫热） 发热、头痛、皮发热、头痛、皮 疹疹 内脏损害内脏损害主要病原性立克

66、次体主要病原性立克次体外斐反应外斐反应（Weil-Felix reaction）立克次体立克次体变形杆菌菌株变形杆菌菌株OX19OX2OXK普氏立克次体普氏立克次体+-斑疹伤寒立克次体斑疹伤寒立克次体+-恙虫病立克次体恙虫病立克次体-+外斐反应外斐反应（Weil-Felix reaction） 部部分立克次体的脂多糖分立克次体的脂多糖与与变形菌变形菌OX19、OX2、Oxk等的菌体抗原有等的菌体抗原有共共同成分同成分。由于变形菌抗原易于制备，。由于变形菌抗原易于制备，其凝集反应结果又便于观察，因此常其凝集反应结果又便于观察，因此常用这类变形菌抗原代替立克次体抗原用这类变形菌抗原代替立克次体抗原

67、进行进行非特异性凝集反应非特异性凝集反应。用于检测血。用于检测血清中有无相应抗体，供清中有无相应抗体，供立克次体病立克次体病的的辅助诊断。此试验称为辅助诊断。此试验称为外斐试验外斐试验第十九章第十九章 衣原体衣原体要求掌握：要求掌握：1、衣原体的概念、衣原体的概念2、沙眼衣原体亚种和所致疾病、沙眼衣原体亚种和所致疾病3、衣原体的独特繁殖周期、衣原体的独特繁殖周期一、概念一、概念衣原体衣原体（Chlamydia）是一类是一类严格严格真核细胞内寄生真核细胞内寄生，具有，具有独特发育周期独特发育周期，能能通过细菌滤器通过细菌滤器的的原核细胞型微生物原核细胞型微生物。n n衣原体属分为四个种衣原体属分

68、为四个种uu沙眼衣原体沙眼衣原体uu肺炎衣原体肺炎衣原体uu鹦鹉热衣原体鹦鹉热衣原体uu兽类衣原体兽类衣原体l对多种抗生素敏感对多种抗生素敏感衣原体的共同特征衣原体的共同特征l革兰阴性，圆形或椭圆形体革兰阴性，圆形或椭圆形体l具有细胞壁，其组成与革兰阴性菌相似具有细胞壁，其组成与革兰阴性菌相似l含有含有DNADNA和和RNARNA两类核酸两类核酸l有核糖体和较复杂的酶类，能进行多种代谢有核糖体和较复杂的酶类，能进行多种代谢l专性细胞内寄生专性细胞内寄生，二分裂方式繁殖，二分裂方式繁殖l有独特的发育周期有独特的发育周期始体始体（initial body , IB）或或 网状网状体体（reticu

69、late body, RB）：）：二、生物学特性二、生物学特性（一）形态染色：（一）形态染色：原体原体（elementary body, EB）: 形态小而致密者形态小而致密者形态大而疏松者形态大而疏松者包涵体包涵体易感细胞内含繁殖的易感细胞内含繁殖的始体和子代原体的空泡始体和子代原体的空泡原体与始体的比较原体与始体的比较原原 体体始始 体体大大 小小较小较小0.20.4较大较大0.51.0结结 构构有致密类核结构有致密类核结构密度较低密度较低有细胞壁有细胞壁无细胞壁无细胞壁染色性染色性Giemsa染色呈紫红色染色呈紫红色深兰色深兰色 Macchiavello染色呈红色染色呈红色兰兰 色色繁殖

70、能力繁殖能力无无代谢活跃，二分裂繁殖代谢活跃，二分裂繁殖胞外稳定性胞外稳定性强强弱弱感染性感染性有毒力，感染性强有毒力，感染性强无毒力，无感染性无毒力，无感染性（二）培养特性二）培养特性专性细胞内寄生，常用鸡胚、小鼠和细胞培养专性细胞内寄生，常用鸡胚、小鼠和细胞培养（三）抵抗力（三）抵抗力uu对热、消毒剂敏感对热、消毒剂敏感uu耐低温：耐低温：-70-70度保存数年度保存数年uu抗生素：红霉素，强力霉素，四环素敏感抗生素：红霉素，强力霉素，四环素敏感四种衣原体性状比较四种衣原体性状比较第一节沙眼衣原体第一节沙眼衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体(chlamydia trachomatis)是是引起人类

71、沙眼的病原体。引起人类沙眼的病原体。一、致病特点：一、致病特点：1、传播方式：、传播方式：眼眼眼，眼眼，眼手手眼；眼；2、传播媒介：、传播媒介：毛巾、玩具、扶手等。毛巾、玩具、扶手等。3、感染方式：、感染方式：原体原体眼结膜上皮细胞眼结膜上皮细胞形成包涵体形成包涵体局部炎症反应局部炎症反应感染感染增殖增殖4、临床表现：、临床表现：早期早期流泪、有粘液脓性分泌物、流泪、有粘液脓性分泌物、 结膜充血及滤泡增生结膜充血及滤泡增生中期中期 眼睑内翻、倒睫、角膜炎症眼睑内翻、倒睫、角膜炎症 晚期晚期角膜血管翳、云翳、致盲角膜血管翳、云翳、致盲引起泌尿生殖道感染称引起泌尿生殖道感染称“非淋非淋”。所致疾病

72、所致疾病n n沙眼沙眼 n n包涵体结膜炎包涵体结膜炎n n泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染 uu男性尿道炎男性尿道炎uu子宫颈炎和宫内膜炎子宫颈炎和宫内膜炎 男性：男性：腹股沟淋巴结炎症腹股沟淋巴结炎症慢性淋巴肉芽慢性淋巴肉芽 肿肿瘘管。瘘管。 女性：女性：会阴会阴肛门肛门直肠，导致狭窄或梗直肠，导致狭窄或梗 阻、直肠瘘管。阻、直肠瘘管。n n性病淋巴肉芽肿性病淋巴肉芽肿-淋巴组织损害淋巴组织损害uu人是性病淋巴肉芽肿衣原体的自然宿主人是性病淋巴肉芽肿衣原体的自然宿主uu通过性接触传播，为性传播疾病通过性接触传播，为性传播疾病（STDSTD）二、微生物学检查二、微生物学检查标本：标本： 眼结膜刮

73、片眼结膜刮片 眼穹隆部或眼结膜分泌物眼穹隆部或眼结膜分泌物 生殖道拭子或宫颈刮片生殖道拭子或宫颈刮片 病灶部活组织病灶部活组织 方法：方法： 直接涂片、染色、镜检：直接涂片、染色、镜检：查包涵体查包涵体 分离培养分离培养 : 鸡胚卵黄囊或传代细胞鸡胚卵黄囊或传代细胞 抗原检测：抗原检测：免疫荧光，酶免疫法免疫荧光，酶免疫法 核酸检测核酸检测三、防治原则三、防治原则 注意个人卫生注意个人卫生 抗生素、眼药水抗生素、眼药水 拨睫毛拨睫毛 睑外翻术睑外翻术 角膜移植角膜移植待过滤的液体 滤膜接负压吸引抽滤机A:螺旋状菌丝螺旋状菌丝 B:球拍状菌丝球拍状菌丝 C:结节状菌丝结节状菌丝D:鹿角状菌丝鹿角

74、状菌丝 E:梳状菌丝梳状菌丝 B:关节状菌丝关节状菌丝 真菌菌落n n酵母型菌落酵母型菌落（yeast colonyyeast colony） uu菌落光滑、湿润。无菌丝菌落光滑、湿润。无菌丝uu隐球菌菌落隐球菌菌落n n类酵母型菌落类酵母型菌落（yeast-like colonyyeast-like colony） uu外观和酵母型菌落相似，显微镜下可外观和酵母型菌落相似，显微镜下可看到看到假菌丝假菌丝uu白色念株菌菌落白色念株菌菌落n n丝状型菌落丝状型菌落（filamentous colonyfilamentous colony）uu菌落系由多细胞菌丝体所组成菌落系由多细胞菌丝体所组成uu大多数丝状真菌或霉菌的菌落大多数丝状真菌或霉菌的菌落图图2. 细菌菌落细菌菌落菌落：菌落：在固体在固体培养基上，由培养基上，由单个细菌生长单个细菌生长繁殖形成的繁殖形成的肉肉眼可见的细菌眼可见的细菌集落称为集落称为菌落。菌落。 油煎荷包蛋样菌落油煎荷包蛋样菌落主主 讲讲主主 讲讲