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1、生生 物物 化化 学学Biochemistry第三周第三周 第二讲第二讲2010.9.302010.9.30蛋白质章节测验1班级、学号、姓名班级、学号、姓名问题一：问题一：u 如何通过样品中的含氮量（如何通过样品中的含氮量（N%）来大致地推测样品中）来大致地推测样品中粗蛋白的含量（粗蛋白的含量（Pro%）？u 解释这样推测的依据是什么？解释这样推测的依据是什么？问题二：问题二：u维持蛋白质一、二、三级结构的主要作用力分别有那些维持蛋白质一、二、三级结构的主要作用力分别有那些？问题三：问题三：u凝胶过滤分离蛋白质的依据和原理凝胶过滤分离蛋白质的依据和原理？通过本章的学习应该明确以下几个问题：通过
2、本章的学习应该明确以下几个问题：1 1、核酸的种类、基本组成单位是什么？、核酸的种类、基本组成单位是什么？ RNARNA的三种主要形式是什么？的三种主要形式是什么？ 它们分别承担什么样的生物功能？它们分别承担什么样的生物功能？2 2、DNADNA和和RNARNA的一级结构和二级结构分别有何特征？的一级结构和二级结构分别有何特征？3 3、什么是、什么是DNADNA的变性和复性？有何特征？的变性和复性？有何特征？第一节第一节 概述概述一、核酸的发现与发展一、核酸的发现与发展18691869年核酸最早分离自外科绷带脓细胞的年核酸最早分离自外科绷带脓细胞的细胞核细胞核，当时发现这种物质含磷量之高超过当
3、时发现的任何当时发现这种物质含磷量之高超过当时发现的任何一种有机物，并且一种有机物，并且含有很强的酸性含有很强的酸性，故得名核酸。，故得名核酸。19091909年其组成被研究清楚，年其组成被研究清楚，19441944年生物功能初步澄年生物功能初步澄清，后来在清，后来在X X射线衍射技术支持下建立双螺旋结构模射线衍射技术支持下建立双螺旋结构模型。型。核酸的分类及分布核酸的分类及分布 存在存在于细胞核于细胞核和线粒体内。和线粒体内。存在存在于胞核、胞液于胞核、胞液和线粒体和线粒体。(deoxyribonucleic acid, DNA)(ribonucleic acid, RNA)脱氧核糖核酸脱氧
4、核糖核酸 核糖核酸核糖核酸携带遗传信息，决定细胞和个携带遗传信息，决定细胞和个体的遗传型体的遗传型(genotype)。参与遗传信息的复制与表达。参与遗传信息的复制与表达。某些病毒某些病毒RNA也可作为遗传信也可作为遗传信息的载体。息的载体。DNARNA蛋白质蛋白质复制复制复制复制转录转录反转录反转录翻译翻译遗传信息传递的中心法则遗传信息传递的中心法则染色体的结构染色体的结构示意图示意图第二节第二节 核酸的组成核酸的组成核酸核酸核苷酸核苷酸磷酸磷酸核苷核苷戊糖戊糖碱基碱基水水解解核酸的化学组成核酸的化学组成除含除含C C、H H、O O、N N外，还含有较多的磷和少量的硫，含磷量在外，还含有较
5、多的磷和少量的硫，含磷量在9 91010一、磷酸（一、磷酸（phosphate） OH HO-P=O OH二、戊二、戊 糖糖（构成（构成RNA）核糖核糖(ribose)（构成（构成DNA）脱氧核糖脱氧核糖(deoxyribose)嘌呤嘌呤 嘧啶嘧啶 碱基碱基腺嘌呤（腺嘌呤（A）鸟嘌呤（鸟嘌呤（G）胞嘧啶（胞嘧啶（C）胸腺嘧啶（胸腺嘧啶（T）尿嘧啶（尿嘧啶（U）DNA、RNA均有均有DNA有有RNA有有每种核酸都含有四种碱基每种核酸都含有四种碱基 。三、碱基（nitrogenous base）嘌呤嘌呤(purine) 腺嘌呤腺嘌呤(adenine, A)鸟嘌呤鸟嘌呤(guanine, G)碱碱
6、基基嘧啶嘧啶(pyrimidine)胞嘧啶胞嘧啶(cytosine, C)尿嘧啶尿嘧啶(uracil, U)胸腺嘧啶胸腺嘧啶(thymine, T)四、四、核核苷（苷（nucleoside)nucleoside)核苷是核糖与碱基核苷是核糖与碱基( (嘌呤碱或嘧啶碱嘌呤碱或嘧啶碱) )结合物。结合物。 嘌呤核苷是嘌呤核苷是嘌呤的第嘌呤的第9 9位位N N与与核糖或核糖或脱氧核糖脱氧核糖第第1 1位碳位碳连接；连接； 嘧啶核苷是嘧啶核苷是嘧啶的的第嘧啶的的第1 1位位N N与与核糖或核糖或脱氧核脱氧核糖第糖第1 1位碳位碳连接；连接；碱基和核糖（或脱氧核糖）通过碱基和核糖（或脱氧核糖）通过糖苷键糖
7、苷键连连接形成接形成核苷核苷(nucleoside) （或脱氧核苷）。（或脱氧核苷）。核苷酸核苷酸：AMP, GMP, UMP, CMP脱氧脱氧核苷酸：核苷酸：dAMP, dGMP, dTMP, dCMP 核苷核苷（脱氧核苷）和磷酸以脱氧核苷）和磷酸以酯键酯键连接形成连接形成核核苷酸苷酸（脱氧核苷酸）。（脱氧核苷酸）。 核苷酸是核苷的磷酸酯。核苷酸是核苷的磷酸酯。 核糖核苷酸的磷酸酯有三种形式核糖核苷酸的磷酸酯有三种形式(2(2、33和和55位位) )； 脱氧核糖核苷酸的磷酸酯有两种形式脱氧核糖核苷酸的磷酸酯有两种形式(3(3和和55位位) )。八种核苷酸如下表所示八种核苷酸如下表所示 M-M
8、-M-M-单单单单( ( ( (D-D-D-D-二、二、二、二、T T T T三）；三）；三）；三）；P-P-P-P-磷酸磷酸磷酸磷酸RNARNA的名称为的名称为某苷某苷( (一磷一磷) )酸酸，DNADNA在在某前加脱氧某前加脱氧两字。两字。例如：例如：AMPAMP称腺苷一磷酸称腺苷一磷酸( (或腺苷酸），或腺苷酸）， dAMPdAMP称为脱氧腺苷一磷酸（脱氧腺苷酸）。称为脱氧腺苷一磷酸（脱氧腺苷酸）。稀有核苷酸与上类似；稀有核苷酸与上类似；l 多磷酸核苷酸：多磷酸核苷酸： NMP，NDP，NTP六、稀有组分六、稀有组分（Minor componentsMinor components）稀有
9、组分是稀有碱基和稀有核苷的总称。1 1、稀有碱基（、稀有碱基（Minor basesMinor bases） 次黄嘌呤(I)、黄嘌呤(X)、5-甲基胞嘧啶(m5C)、二氢尿嘧啶(Dhu )、 5-羟甲基胞嘧啶(hm5C)2 2、稀有核苷（稀有核苷（Minor nucleosideMinor nucleoside） 假尿嘧啶核苷()、次黄嘌呤核苷、二氢尿嘧啶核苷。一、核酸的一级结构一、核酸的一级结构 核酸的一级结构是指核苷酸的组成及排列核酸的一级结构是指核苷酸的组成及排列顺序（即碱基序列）。顺序（即碱基序列）。 DNADNA、RNARNA都是由许多核苷酸都是由许多核苷酸通过通过33、55磷酸二酯
10、键磷酸二酯键将前一个核苷酸与后一个核苷将前一个核苷酸与后一个核苷酸连接起来，形成酸连接起来，形成无分支无分支的多核苷酸链。的多核苷酸链。 在链的一端的一个戊糖的在链的一端的一个戊糖的33位上位上OHOH是游是游离存在的，另一端的戊糖其离存在的，另一端的戊糖其5 5位上连有一位上连有一个磷酸基团呈单磷酸酯状态，这两个末端个磷酸基团呈单磷酸酯状态，这两个末端分别称为分别称为33末端及末端及55末端末端。第三节第三节 核酸的结构核酸的结构5端端3端端核苷酸之间以核苷酸之间以3 , 5 -磷酸二酯键磷酸二酯键连接形成多连接形成多核苷酸链，即核酸。核苷酸链，即核酸。CGADNA一级结构的简写形式核苷酸顺
11、序又称碱基顺序，是蛋白质与RNA结构的生物语言。戊糖3-OH3-OH5-5-磷酸磷酸PA A核苷酸核苷酸核苷酸核苷酸53首端首端末端末端PPPPPP A G C T G CA G C T G C OH OH书写方法书写方法 DNA 与与RNA的区别的区别核酸核酸碱基碱基戊糖戊糖DNAA、G、C、T脱氧脱氧核糖核糖RNAA、G、C、U核糖核糖二、二、 DNADNA的二级结构的二级结构双螺旋结构双螺旋结构DNADNA双螺旋结构模型的要点双螺旋结构模型的要点(1) DNA(1) DNA分子是由分子是由两条两条反平行的反平行的多多聚聚脱氧核苷酸链脱氧核苷酸链，绕同一中心，绕同一中心轴盘旋形成的轴盘旋形
12、成的右手螺旋结构右手螺旋结构；(2) (2) 每条主链由每条主链由脱氧核糖与磷酸脱氧核糖与磷酸通过通过33、55磷酸二酯键连接磷酸二酯键连接而而成，并位于螺旋外侧。成，并位于螺旋外侧。碱基位碱基位于螺旋内侧，碱基平面与螺旋于螺旋内侧，碱基平面与螺旋中心轴垂直中心轴垂直。螺旋表面有两条。螺旋表面有两条螺旋形的凹槽螺旋形的凹槽大沟和小沟。大沟和小沟。(3) 两链间的碱基以氢键互相配对。两链间的碱基以氢键互相配对。A A与与T T配有两个配有两个氢键，氢键，G G与与C C配有三个氢键。配有三个氢键。DNADNA分子所含嘌呤碱基的总数等于嘧啶碱基的总数分子所含嘌呤碱基的总数等于嘧啶碱基的总数( (即
13、即A+G=T+C)A+G=T+C)碱基当量定律碱基当量定律。(4)维持双螺旋稳定的因素：横向为氢键，纵向为碱维持双螺旋稳定的因素：横向为氢键，纵向为碱基间的堆积力。基间的堆积力。DNADNA碱基组成的碱基组成的ChargaffChargaff规则规则（1 1）腺嘌呤和胸腺嘧啶的摩尔数相等，即）腺嘌呤和胸腺嘧啶的摩尔数相等，即A AT T（2 2）鸟嘌呤和胞嘧啶的摩尔数也相等，即鸟嘌呤和胞嘧啶的摩尔数也相等，即G GC C（3 3）含氨基的碱基含氨基的碱基( (腺嘌呤和胞嘧啶腺嘌呤和胞嘧啶) )总数等于含酮总数等于含酮基的碱基基的碱基( (鸟嘌呤和胸腺嘧啶鸟嘌呤和胸腺嘧啶) )总数，即总数，即A
14、+C=G+TA+C=G+T（4 4）嘌呤的总数等于嘧啶的总数，即嘌呤的总数等于嘧啶的总数，即A+G=C+TA+G=C+T所有所有DNADNA中碱基组成必定是中碱基组成必定是A=TA=T，G=CG=C这一规律这一规律暗示暗示A A与与T, GT, G与与C C相互配对的可能性，为相互配对的可能性，为WatsonWatson和和CrickCrick提出提出DNADNA双螺旋结构提供了重要根据。双螺旋结构提供了重要根据。DNA双螺旋结构的多样性双螺旋结构的多样性Z型型DNAB型型DNAA型型DNADNADNA的三级结构的三级结构 DNADNA的三级结构是指双螺旋的三级结构是指双螺旋DNADNA的扭曲
15、或再螺旋。的扭曲或再螺旋。生生 物物 化化 学学Biochemistry第四周第四周 第二讲第二讲2010.10.92010.10.9RNARNA（核糖核酸）核糖核酸）主要分布在细胞质中，与蛋白质合成密切相关主要分布在细胞质中，与蛋白质合成密切相关Ribosomal Ribosomal RNAsRNAs ( (rRNArRNA，核糖体核糖体RNARNA) )占占80%80%以上：与蛋以上：与蛋白质构成核糖体，是合成蛋白质的场所白质构成核糖体，是合成蛋白质的场所Messenger Messenger RNAsRNAs (mRNA (mRNA，信使信使RNARNA) ) 占占5%5%：合成蛋白质：
16、合成蛋白质的模板的模板Transfer Transfer RNAsRNAs ( (tRNAtRNA ，转运转运RNARNA) )占占15%15%：在蛋白质合：在蛋白质合成中运输氨基酸成中运输氨基酸三、三、RNARNA的结构的结构RNARNA分子的基本结构是一条线性的多核苷酸链，由分子的基本结构是一条线性的多核苷酸链，由四四种核糖核苷酸种核糖核苷酸以以3 3，5 5- -磷酸二酯键连接而成。磷酸二酯键连接而成。（一）、信使（一）、信使RNARNA的结构与功能的结构与功能2、其结构模式为、其结构模式为 5-帽子帽子-5非编码区非编码区-编码区编码区-3非编码区非编码区- 3多聚多聚A1、真核、真核
17、mRNA链翻译产生一条多肽链。链翻译产生一条多肽链。5-帽子结构帽子结构(1) 大大多多数数真真核核mRNA的的5末末端端均均在在转转录录后后加加上上一一个个7-甲甲基基鸟鸟苷苷，经经焦焦磷磷酸酸与与mRNA的的5-末末端端核核苷苷酸酸相相连连，形形成成5，5-磷磷酸酸酯酯键键。同同时时第第一一个个核核苷苷酸酸的的C2可可能能也也是是甲甲基基化化，形成形成帽子结构帽子结构（甲基鸟苷三磷酸）：（甲基鸟苷三磷酸）：m7GpppN-。* mRNA结构特点结构特点(2) 大多数真核大多数真核mRNA的的3末端有一个多聚腺苷酸末端有一个多聚腺苷酸 (polyA)结构，称为多聚结构，称为多聚A尾。尾。多聚
18、腺苷酸（多聚腺苷酸（多聚多聚A)的尾的作用可能是延长的尾的作用可能是延长mRNA的寿的寿命，从而可以增加蛋白质合成的数量。命，从而可以增加蛋白质合成的数量。此外，还可能有助于此外，还可能有助于mRNA穿过核膜，进入细胞质执行穿过核膜，进入细胞质执行其模板功能其模板功能.mRNA核内向胞质的转位核内向胞质的转位mRNA的稳定性维系的稳定性维系翻译起始的调控翻译起始的调控 帽子结构和帽子结构和多聚多聚A尾的功能尾的功能mRNA的功能：的功能：作为蛋白质合成的模板。作为蛋白质合成的模板。* * tRNAtRNA的一级结构特点的一级结构特点 含稀有碱基较多含稀有碱基较多 3 3 末端为末端为 CCA-
19、OH CCA-OH 5 5末端大多数为末端大多数为G G 由由70-9070-90个核苷酸组成个核苷酸组成( (二）、转运二）、转运RNARNA的结构与功能的结构与功能 稀有碱基稀有碱基 * tRNA的二级结构的二级结构三叶草形三叶草形氨基酸氨基酸臂臂额外环额外环* tRNA的三级结构的三级结构 倒倒L形形* tRNA的功能的功能活活化化、搬搬运运氨氨基基酸酸到到核核糖糖体体，参参与与蛋蛋白白质质的翻译。的翻译。* rRNA的结构的结构（三）、核糖体（三）、核糖体RNARNA的结构与功能的结构与功能* rRNA的功能的功能参参与与组组成成核核糖糖体体，作作为为蛋蛋白白质质生生物物合合成成的场所
20、。的场所。核糖体的组成核糖体的组成原核生物原核生物真核生物真核生物小亚基小亚基30S30S40S40SrRNArRNA16S16S18S18S蛋白质蛋白质2121种种3333种种大亚基大亚基50S50S60S60SrRNArRNA23S23S5S5S28S28S5.8S5.8S5S5S蛋白质蛋白质3333种种4949种种核糖体核糖体70S70S80S80S第四节第四节 核酸及核苷酸的性质核酸及核苷酸的性质一、一般理化性质一、一般理化性质 核酸为多元酸，具有较强的核酸为多元酸，具有较强的酸性酸性；DNADNA是线性高分子，是线性高分子，粘度极大粘度极大均为极性化合物，难溶于有机溶剂。均为极性化合
21、物，难溶于有机溶剂。嘌呤碱和嘧啶碱均含有共轭双键，因此，核苷、核苷酸、嘌呤碱和嘧啶碱均含有共轭双键，因此，核苷、核苷酸、DNADNA和和RNARNA在在240240290nm290nm范围内均有紫外吸收。范围内均有紫外吸收。最大吸收峰在最大吸收峰在260nm260nm左右。左右。二、紫外吸收性质二、紫外吸收性质 核酸的紫外吸收性质可以用于鉴定核酸的紫外吸收性质可以用于鉴定DNADNA和和RNARNA的纯度，的纯度，常用常用A A260260/A/A280280比值来判断。比值来判断。纯纯DNA ADNA A260260/A/A280280=1.8=1.8纯纯RNAARNAA260260/A/A
22、280280=2.0=2.0若样品的蛋白质含量增加，若样品的蛋白质含量增加，A A260260/A/A280280比值怎样变化？比值怎样变化？增色效应增色效应( (hyperchromichyperchromic effect) effect)当核酸变性或当核酸变性或降解时，其紫外吸收显著增强，这就是核酸的降解时，其紫外吸收显著增强，这就是核酸的增色效应。增色效应。减色效应减色效应( (hypochromichypochromic effect) effect)当变性的核酸当变性的核酸在一定条件下恢复其原有的性质时，其紫外吸在一定条件下恢复其原有的性质时，其紫外吸收的强度又可恢复到原有的水平，
23、这种现象称收的强度又可恢复到原有的水平，这种现象称为减色效应。为减色效应。三、核酸和核苷酸的两性解离三、核酸和核苷酸的两性解离 在核酸和核苷酸分子在核酸和核苷酸分子中，既含有可以给出中，既含有可以给出H+H+的磷酸基团，又含的磷酸基团，又含有可以得到有可以得到H+H+的碱性的碱性基团基团( (碱基上的碱基上的-N=-N=，如嘌呤的如嘌呤的N N1 1和和N N7 7，胞嘧胞嘧啶的啶的N N3 3) )，所以核酸和所以核酸和核苷酸是两性化合物，核苷酸是两性化合物，有等电点。有等电点。5 脱氧腺苷一磷酸脱氧腺苷一磷酸四、核酸的变性、复性和分子杂交四、核酸的变性、复性和分子杂交1 1、变性、变性(1
24、) (1) 概念概念核酸变性是指核酸分子中核酸变性是指核酸分子中双螺旋双螺旋区域的区域的碱基对之碱基对之间的氢键间的氢键受受某些理化因素的作用某些理化因素的作用而破坏，变成而破坏，变成单单链的过程。链的过程。 核酸变性不涉及共价键的断裂，所以变性后核酸变性不涉及共价键的断裂，所以变性后相对分子量不变，但其理化性质和生物功能相对分子量不变，但其理化性质和生物功能都会发生变化，最重要的表现为都会发生变化，最重要的表现为溶液粘度降低溶液粘度降低沉降速率增加沉降速率增加紫外吸收显著增强紫外吸收显著增强DNADNA可增加可增加20-25%20-25% RNA RNA可增加可增加10%10%左右。左右。生
25、物功能丧失或减弱生物功能丧失或减弱。DNADNA变性的本变性的本质：双链间质：双链间氢键的断裂氢键的断裂(2) (2) 引起核酸变性的因素引起核酸变性的因素高温极端pH (pH10或pH4)变性剂(如尿素等)(3) DNA(3) DNA的变性温度的变性温度(T(Tm m):):DNADNA的变性不是随温度升高而逐步发生的，而的变性不是随温度升高而逐步发生的，而是当温度达到某一数值时，在是当温度达到某一数值时，在很窄的温度范围很窄的温度范围内，内，变性突然发生并迅速完成，就象晶体物质达到熔变性突然发生并迅速完成，就象晶体物质达到熔点时突然融化一样，这一温度就称为点时突然融化一样，这一温度就称为D
26、NADNA的变性温的变性温度，也称为度，也称为DNADNA的熔点，用的熔点，用T Tm m来表示来表示。实际上，实际上，T Tm m是增色效应达到最大值的是增色效应达到最大值的50%50%时的温度。时的温度。也就是说，也就是说，DNADNA溶液的温度达到溶液的温度达到T Tm m时，将有时，将有50%50%的的DNADNA双链处于解链状态。双链处于解链状态。DNADNA的的T Tm m一般为一般为82829 955。T Tm m随随DNADNA分子中分子中G-CG-C碱基对含量的增加而升高碱基对含量的增加而升高。它。它也与溶液的也与溶液的离子强度离子强度有关，一般情况下，离子强有关，一般情况下
27、，离子强度低，度低，T Tm m值值小。小。2 2、DNADNA的复性的复性变性的变性的DNADNA在适当条件下，两条彼此分开的互补在适当条件下，两条彼此分开的互补单链又可以恢复碱基配对，重新成为双螺旋，这个单链又可以恢复碱基配对，重新成为双螺旋，这个过程称为过程称为DNADNA的复性的复性（DNA DNA renaturationrenaturation）。复性后的复性后的DNADNA的某些理化性质和生物活性也可以的某些理化性质和生物活性也可以得到部分或全部恢复。如得到部分或全部恢复。如减色效应。减色效应。退火（退火（annealingannealing）: : 即即DNADNA由单链复性变
28、成双链结构的过程。来源由单链复性变成双链结构的过程。来源相同的相同的DNADNA单链经退火后完全恢复双链结构，不同单链经退火后完全恢复双链结构，不同源源DNADNA之间、之间、DNADNA和和RNARNA之间退火后形成杂交分子。之间退火后形成杂交分子。 一定条件下，去除变性因素后，核酸一定条件下，去除变性因素后，核酸恢复二级结构恢复二级结构及生物活性的现象及生物活性的现象高温变性高温变性缓缓慢慢冷冷却却热复性热复性急急速速冷冷却却复性失败复性失败退火（退火（annealingannealing）(1) (1) 降温速度降温速度。若热变性的。若热变性的DNADNA从高温从高温(T(Tm m) )
29、迅速冷迅速冷却至低温却至低温(4(4以下以下) )，则不能复性，此过程称，则不能复性，此过程称为为淬火淬火。(2) DNA(2) DNA溶液的溶液的浓度浓度越大，互补越大，互补DNADNA链片段碰撞机链片段碰撞机会越多容易发生复性。会越多容易发生复性。(3) DNA(3) DNA片段片段越大，越大，DNADNA内部的顺序越复杂，扩散内部的顺序越复杂，扩散速度也越慢，互补链的相遇机会也越小，复性速度也越慢，互补链的相遇机会也越小，复性也越难。也越难。与复性有关的因素与复性有关的因素 3 3、分子杂交、分子杂交（Hybridization Hybridization ） 不同来源的变性不同来源的变
30、性DNADNA，若彼此之间有部分互补的若彼此之间有部分互补的核苷酸顺序核苷酸顺序，当它们在同一溶液中进行热变性和，当它们在同一溶液中进行热变性和退火处理时，分子间退火处理时，分子间部分配对成双链部分配对成双链，这个过程，这个过程称为称为分子杂交分子杂交。将胶浸泡在碱溶液中使DNA进行变性，然后将变性DNA转移到硝酸纤维素膜上（硝酸纤维素膜只吸附变性DNA)，在80烤46小时，使DNA牢固地吸附在硝酸纤维素膜上。然后与放射性同位素标记的变性后的DNA探针进行杂交。杂交须在较高的盐浓度及适当的温度(68)下进行数小时或十余小时。Southern印迹法 (Southern blotting)应用类似
31、的方法也可用于分析应用类似的方法也可用于分析RNARNA、蛋白质。蛋白质。将将RNARNA变性后转移到硝酸纤维素膜再进行杂交，这变性后转移到硝酸纤维素膜再进行杂交，这方法称方法称NorthernNorthern印迹法印迹法(Northern blotting)(Northern blotting)。根据抗体与抗原可以结合的原理，也可以分析蛋白根据抗体与抗原可以结合的原理，也可以分析蛋白质。这个方法称质。这个方法称WesternWestern印迹法印迹法(Western (Western blotting)blotting)核酸分子中含有核糖和磷酸，它们可以分别与专一核酸分子中含有核糖和磷酸，它
32、们可以分别与专一性的化学试剂发生颜色反应，作为定性、定量检测性的化学试剂发生颜色反应，作为定性、定量检测核酸的依据。核酸的依据。 六、核酸的呈色反应六、核酸的呈色反应(1) 核糖的地衣酚核糖的地衣酚(3，5-二羟基甲苯二羟基甲苯)反应反应 用于定量测定用于定量测定RNARNA的含量。的含量。(2) (2) 脱氧核糖的二苯胺反应脱氧核糖的二苯胺反应 用于定量测定用于定量测定DNADNA的含量。的含量。(3) (3) 核酸中磷酸的定量测定核酸中磷酸的定量测定经典的钼蓝法经典的钼蓝法 磷酸与钼酸铵作用产生磷钼酸，其在还原剂的作用下形成蓝色的钼蓝 RNA和DNA的含磷量分别为9.2%和9.5%。核酸的分离和纯化核酸的分离和纯化核酸碱基顺序分析核酸碱基顺序分析聚合酶链式反应聚合酶链式反应（自学内容）（自学内容）Frederick Sanger Kary Mullis
