药物分析第11章A抗生素类药物的分析ppt课件

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1、第十一章第十一章抗生素抗生素类药物物的分析的分析进入进入前往主目录前往主目录思索与练习第一节 概 述第二节 内酰胺类抗生素 第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素第五节 抗生素类药物中高分 子杂质的检查根本要求根本要求根本要求根本要求一一、掌掌握握抗抗生生素素类类药药物物的的构构造造特特点点与与分分析析方方法法之间的关系。之间的关系。二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。三三、掌掌握握抗抗生生素素类类药药物物法法定定含含量量测测定定方方法法的的原原理、测定方法与计算。理、测定方法与计算。四、熟习抗生素类药物

2、杂质检查的方法。四、熟习抗生素类药物杂质检查的方法。五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。返返 回回第一节第一节 概述概述1. 抗生素药物的特点抗生素药物的特点化学纯度较低化学纯度较低活性组分易发生变异活性组分易发生变异稳定性差稳定性差2. 微生物学法与理化法的比较微生物学法与理化法的比较微生物检定法微生物检定法理化法理化法以抗生素对微生物的杀伤或抑制程以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为目的衡量抗生素的生物效价度为目的衡量抗生素的生物效价 根据抗生素构造特点，利用其根据抗生素构造特点，利用其特有的理化性质测定其含量特有的理化性质测定其含量知或新发现的抗

3、生素、精致品或知或新发现的抗生素、精致品或粗制品均能测定粗制品均能测定 测定化学构造知、已提纯的测定化学构造知、已提纯的抗生素抗生素灵敏度高、样品需用量小、反映抗灵敏度高、样品需用量小、反映抗生素的医疗价值，但操作步骤多、生素的医疗价值，但操作步骤多、费时、误差大费时、误差大 迅速、准确、专属性高、样品迅速、准确、专属性高、样品需用量小、操作简单、省时需用量小、操作简单、省时3.3.抗生素的活性以效价单位来表示：抗生素的活性以效价单位来表示： 每每mlml或每或每mgmg中含有某种抗生素的有效成中含有某种抗生素的有效成分的多少，用分的多少，用单位位u u或或g g 表示。表示。 1mg 1mg

4、青霉素青霉素G G钠盐定定为16671667单位位 1mg 1mg青霉素青霉素G G钾盐的的单位位u u =1667356.4/372.5=1595u/mg=1667356.4/372.5=1595u/mg分分类按构造与性按构造与性质： 内内酰胺胺类、氨基糖苷、氨基糖苷类、 四四环素素类、大、大环内内酯类、 氯霉素霉素类、多、多肽类、抗、抗肿瘤瘤类 林可霉素林可霉素类、其他抗生素、其他抗生素类返返 回回第二第二节 内内酰胺胺类抗生素抗生素 青霉素青霉素类NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核母核6-6-氨基青霉烷酸氨基青霉烷酸AB头孢菌素菌素类AB青霉素青霉素青霉素钾、钠青霉素

5、钾、钠氨苄西林氨苄西林氨苄青霉素氨苄青霉素阿莫西林阿莫西林羟氨苄青霉素羟氨苄青霉素普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素头孢氨苄头孢氨苄头孢拉啶头孢拉啶头孢羟氨苄头孢羟氨苄头孢噻吩钠头孢噻吩钠酸性酸性构造特点与性质构造特点与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na+(Na+、K+)K+)成成盐 一羧基一羧基 易溶于水易溶于水 与有机碱与有机碱( (普鲁卡因普鲁卡因) )成盐成盐 难溶于水溶于水普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素二手性二手性C C 头孢菌素菌素类 C6 C7青霉素青霉素类 C3 C5 C3 C5 C6 C6 旋光性旋光性 三共轭体系三共轭体系 头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系

6、 青霉素青霉素类 母核无明母核无明显UVUV 多数有苯多数有苯环取代基取代基 UV四四内内酰胺胺环 水溶液水溶液 不不稳定定 枯燥枯燥纯真真 稳定定 不不稳定定性要素性要素四元四元环张力大力大 酰胺胺键易水解易水解 青霉素类青霉素类 某些氧化剂某些氧化剂酸、碱、青霉素酶酸、碱、青霉素酶某些金属离子某些金属离子 温度温度降解降解失效失效例例青霉素的降解反响青霉素的降解反响青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉青霉噻唑酰基基羟胺酸胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱

7、、胺类 -内酰胺酶内酰胺酶降解降解失效失效一呈色反响一呈色反响1. 1. 羟肟酸酸铁反响反响-内内酰胺胺类呈色呈色羟肟酸衍生物酸衍生物Fe3+/3H+鉴别实验鉴别实验 二、二、NaOH2 2HClNOHH- - 内酰胺类内酰胺类H+Fe3+/3 红、棕、褐、棕、褐2. 茚三酮反响茚三酮反响 - -氨基氨基 -氨基氨基茚三酮茚三酮 蓝紫色紫色3. 双缩脲反响双缩脲反响似肽键似肽键开环分解开环分解 - 内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜紫紫4. 与重氮苯磺酸反响与重氮苯磺酸反响橙黄色橙黄色重氮苯磺酸重氮苯磺酸- - -5 56 6OHHC巧合巧合酚酚羟基基头孢哌酮5. 与变色酸与变色酸-硫酸

8、反响硫酸反响活活泼“-CH2-青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨氨苄西林西林分解分解变色酸色酸显色色1. K+、Na+的火焰反响的火焰反响二各种盐的反响二各种盐的反响 焰色焰色鲜黄色黄色 + 醋酸氧醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼四苯硼钠 + Ac白白 K+2. 沉淀反响青霉素盐沉淀反响青霉素盐遇酸遇酸在在过量量HClHCl或或有机溶有机溶剂中溶解中溶解白白青霉素青霉素青霉素钠青霉素钠青霉素钾青霉素钾緘緘+ +H3. 重氮化重氮化 - 巧合反响巧合反响 重氮化重氮化-巧合反响巧合反响芳伯氨基芳伯氨基4. 与三硝基苯酚反响与三硝基苯酚反响 二二苄基乙二胺基乙二胺mp三硝基

9、苯酚三硝基苯酚光谱法光谱法三三1、 UV法法样品、分解品、分解产物物Cu2+头孢氨氨苄 max = 262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm = 1.301.50pH3.8分分子子重重排排2、IR法法3180cm-1 N-H内内酰胺胺 C=O1780cm-13470cm-1 O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺 C=O1250cm-1 C-O以阿莫西林为例以阿莫西林为例色谱法色谱法四四1、 TLC法法对照品对照法对照品对照法2、 HPLC法法三、杂质检查三、杂质检查 药物药物 检查工程检查工程 检查方法检查方法 头孢他啶头孢他啶 聚合物聚合物 HPLC法法 头孢曲松钠头孢曲松钠

10、头孢哌酮钠头孢哌酮钠 头孢噻肟钠头孢噻肟钠 头孢呋辛酯头孢呋辛酯 有关物质和异构体有关物质和异构体 HPLC法法 头孢氨苄头孢氨苄 有关物质有关物质 反相反相TLC法法 青霉素钾钠青霉素钾钠 吸收度吸收度 紫外分光光度法紫外分光光度法 1. 1.头孢他他啶聚合物的聚合物的测定定 固定相：葡聚糖凝胶固定相：葡聚糖凝胶G-10G-10 40120m 40120m 流流动相相A A：3.5%3.5%硫酸硫酸铵的的0.01mol/L0.01mol/L磷酸磷酸盐缓冲液冲液 流流动相相B B：0.01%0.01%十二十二烷基硫酸基硫酸钠 对照品溶液：照品溶液：头孢他他啶对照品照品 100g/ml 100g

11、/ml1 1系统适用性实验：实际塔板数和拖尾因子用系统适用性实验：实际塔板数和拖尾因子用1mg/ml1mg/ml蓝色葡聚糖蓝色葡聚糖20002000、流动相、流动相A A测定；反复性测定；反复性用对照品溶液、流动相用对照品溶液、流动相B B测定。测定。 N N不低于不低于900900，拖尾因子拖尾因子0.751.50.751.5，峰面积的，峰面积的RSDRSD应小于应小于5.0%5.0%。2 2测定方法测定方法 进样供试液，用流动相进样供试液，用流动相A A；进样对照液，用；进样对照液，用流动相流动相B B。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超越头

12、孢他啶计不得超越0.3%0.3%。2.2.头孢呋辛辛酯中有关物中有关物质和异构体的和异构体的检查 固定相：固定相：ODSODS 流流动相：相：0.2mol/L0.2mol/L磷酸二磷酸二氢铵- -甲醇甲醇62:3862:38 1 1头孢呋辛辛酯2-2-异构体的制异构体的制备：头孢呋辛辛酯对 照品照品+ +流流动相相 头孢呋辛辛酯2-2-异构体。异构体。2 2系系统适用性适用性实验：各异构体之：各异构体之间的的R1.5R1.5，以，以 头孢呋辛辛酯A A异构体异构体计算算n1500n1500。 3异构体：异构体： tR1 相相对保管保管时间 r12=- 1-被被测物物 tR2 2-规范物范物异构

13、体异构体 相相对保管保管时间 判判别B异构体异构体 0.85 供供试液液谱图中中A异构体的峰面异构体的峰面积A异构体异构体 1.0 与与A、B异构体峰面异构体峰面积和之比和之比应 为0.480.55。 3.3.头孢氨氨苄中有关物中有关物质的的检查-反相反相TLCTLC法法 固定相：活化后的硅胶固定相：活化后的硅胶G G板置板置5%5%V/VV/V正正十四十四 烷的正己的正己烷溶液中，展至溶液中，展至顶部，部，凉干凉干 展开展开剂：0.1mol/L0.1mol/L枸枸橼酸酸-0.2mol/L-0.2mol/L磷酸磷酸氢二二 钠- -丙丙酮120120：8080：3 3 供供试液：本品液：本品 50mg/ml 50mg/ml 对照液照液1 1：本品：本品 0.5 mg/ml 0.5 mg/ml 对照液照液2 2：-苯甘氨酸苯甘氨酸 0.5 mg/ml 0.5 mg/ml 对照液照液3 3：7-7-氨基去乙氨基去乙酰氧基氧基头孢烷酸酸 0.5 mg/ml 0.5 mg/ml结果判别：供试液如显杂质斑点，与对结果判别：供试液如显杂质斑点，与对照液照液2 23 3位置一样上所的斑点比位置一样上所的斑点比较，其颜色不得更深；如显其他杂质斑较，其颜色不得更深；如显其他杂质斑 点，与对照液点，与对照液1 1所显的主斑点比较，所显的主斑点比较，其颜色不得更深。其颜色不得更深。