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1、厌氧菌的检验厌氧菌的检验华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科曾 吉概述l厌氧菌（anaerobic bacteria)是指一大群必须在无氧的条件下才能生长的细菌。l厌氧菌在人体内的很多部位都存在，包括口腔、肠道，上呼吸道、女性阴道等。l在维持人的正常生理代谢提供了重要保证。l1.组织缺氧或氧化还原电势降低，如局部组织供血障碍、大面积外伤或刺伤等；l2. 机体免疫功能下降，如长期使用广谱抗生素、激素、免疫抑制剂等。厌氧菌感染的条件厌氧菌感染的临床及细菌学指征l凡有下列情况者应怀疑有厌氧菌感染：l1感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发音， 是产气荚膜梭菌所引起感染的特征。l
2、2发生在粘膜附近的感染，口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等粘膜，均有大量厌氧菌寄生，这些部分及其附近有破损，极易发生厌氧菌感染。l3深部外伤如枪伤后，人被动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染。l4分泌物有恶臭，或为暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。发红色荧光的分泌物，可能有产黑色素普鲁沃菌和不解糖紫单胞菌；分泌物或脓汁中有硫磺颗粒，为放线菌感染。l5分泌物涂片经革兰染色，镜检发现有细菌， 而常规培养阴性者； 或在液体及半固体培养基深部长的细菌，均可能为厌氧菌感染。l6长期应用氨基糖甙类抗生素治疗无效的病例，可能是厌氧菌感染。l7最近有流产史者，以及胃肠手术后发生的感染。厌氧菌
3、的检验厌氧菌的检验l一、标本的采集与运送l1.适合做厌氧培养的标本：无菌体液、深部脓肿、深部组织或穿刺液；l2.不适合做厌氧培养的标本：鼻咽拭子、痰和气管抽取物、肛拭或肠道内容物、皮肤或粘膜表面的分泌物、排出的尿或导尿、阴道或子宫拭子、前列腺分泌物等。l标本的采集与运送是否适当，对厌氧菌培养能否成功至关重要。在采集和运送时应注意：l标本不能被正常菌群所污染；l应尽量避免接触空气；l尽快送到实验室。 l临床可行的操作方法：l1. 床旁接种；l2. 转运拭子；l（有商品化的，也可自制：如刃天青甘油肉汤）l二、标本的检验l直接镜检：l分离培养：常用的培养基有强化血琼脂平板、卡那万古霉素冻溶血琼脂平板
4、、七叶苷胆汁平板等l鉴定：主要根据菌落性状、染色情况、耐氧试验、生化反应等来鉴定直接镜检l1.将临床标本直接涂片,革兰染色。l可以提供临床医生有关感染的性质，可以给临床医生预处理提供帮助；l可以帮助选择合适的培养基。分离培养方法l厌氧菌的培养方法：l厌氧罐：可用于大量标本的操作，操作较简便，实验设备要求不高。l厌氧手套箱培养法：厌氧条件好，操作复杂，设备要求较高，一般实验室不太适用。l厌氧产气袋法：操作简便，不需要特殊厌氧产气袋法：操作简便，不需要特殊实验条件，适合临床常规操作。但应注实验条件，适合临床常规操作。但应注意厌氧产气袋产热导致细菌死亡，造成意厌氧产气袋产热导致细菌死亡，造成假阴性的
5、产生。假阴性的产生。培养及鉴定l1.培养：标本应迅速接种，然后放厌氧环培养：标本应迅速接种，然后放厌氧环境，一般培养境，一般培养48小时小时;特殊的可以延长。特殊的可以延长。l2.鉴定：首先做耐氧试验，耐氧试验阳性鉴定：首先做耐氧试验，耐氧试验阳性的做革兰染色等染色方法，再做生化鉴的做革兰染色等染色方法，再做生化鉴定。定。耐氧试验生长生长待测菌（厌氧环境下生长）待测菌（厌氧环境下生长）有氧环境有氧环境(普通和普通和CO2环境）环境）厌氧环境厌氧环境生长生长不生长不生长兼性厌氧菌兼性厌氧菌厌氧菌厌氧菌厌氧菌的分类l主要分为以下几个类型l厌氧革兰阳性球菌l厌氧革兰阴性球菌l革兰阴性无芽胞厌氧杆菌l
6、革兰阳性无芽胞厌氧杆菌l梭状芽胞杆菌属厌氧球菌l在临床是有重要意义的主要有：l消化球菌l消化链球菌l韦荣球菌革兰阴性无芽胞厌氧杆菌l类杆菌：是临床上分离最多的厌氧菌梭状芽胞杆菌属l为一大群厌氧或微需氧的粗大芽胞杆菌，革兰阳性，均具有芽胞，故名。临床上有致病性的主要有以下几种：l破伤风梭菌l产气荚膜梭菌l肉毒梭菌l艰难梭菌破伤风梭菌l可引起破伤风，故名。l形态特征：本菌细长，革兰阳性，动力阳性，芽胞正圆形，比菌体大，位于菌体顶端，使菌体呈“鼓槌状”，为该菌的特征。l微生物检验：根据临床表现可作出诊断，一般不作细菌学检查，若临床需要可按下列方法进行。l1、直接涂片l2、厌氧培养l3、毒力试验l4、
7、鉴定产气荚膜梭菌l是引起气性坏疽的主要病原菌，或产生外毒素和多种侵袭性酶类。l形态特征：l革兰阳性粗短大杆菌，两端纯圆，呈单或双排列，芽胞体于菌体中央或次极端，不大于菌体，镜下不易观察到。动力阴性。l培养特性：不严格厌氧，在血平板上，多数菌株呈双层溶血环，内环为 溶血，外环为不完全溶血。l在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时产生大量的气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势汹涌，称为“汹涌发酵”，为本菌的特征。肉毒梭菌l肉毒梭菌主要引起食物中毒，偶有感染人的报道。该菌产生一种毒性极强的外毒素肉毒毒素。l形态特征：肉毒梭菌为革兰阳性粗短杆菌同，单、双排列。芽胞位于次极端形成椭圆形芽胞，芽胞大于菌体，使细菌呈汤匙状或网球拍状。艰难梭菌l艰难梭菌是严格厌氧菌，对氧十分敏感，不易培养。在肠道寄生，为肠道正常菌群。当肠道正常菌群被破坏后，该菌可大量繁殖，引起假膜性结肠炎。临床表现为腹泻、腹痛并伴有全身中毒症状。l形态特征：革兰阳性粗长杆菌，芽胞为卵圆形，位于菌体次极端，一般不大于菌体。
