细菌基本检验技术三

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1、实验一实验一 细菌检验基本技术细菌检验基本技术( (三三) )队工买帕调叔旺凸汽斋劲堵悔制矽片快沤勒函枫机拧钟湿弹惮碑矿婉辕遣细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三目的v掌握观察菌落的方法，了解细菌在液体、半固体培养基的生长表现及意义。v掌握革兰染色法和熟悉细菌涂片的制备。v掌握细菌和基本形态和特殊结构。 居均郎隐剃暂统屑嗜袜掀追闻砸衅攻氮恰桑捶汞旅概辣彩肺丽奎篇叮目督细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三【器材器材】v显微镜、载玻片、察镜纸、小镊子、接种环、酒精灯等 窝孰香某贩禽漆望茄猫秉脖拨匙颜裔淆符卜堵厚勤杆钢披礼柔堕孪湾洒沮细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三细菌染色标本的制作程序细菌染色

2、标本的制作程序涂涂 片片干干 燥燥固固 定定染染 色色爵易年恿粳谐渴众蜒濒耽勃亚闹纳土柠箍芹查钵孟欲竣努营犹铝戌酮豢养细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三 染色方法染色方法v革兰染色法（革兰染色法（Gram stain）v芽胞染色法（芽胞染色法（spore stain）客松奋岸潞楔淖蛤蔽逼跑陇悯酿饮面怪辞葫絮崔邵膳逊朋搽簧胯稗占蛋鞠细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三革兰染色法（革兰染色法（Gram stainGram stain）方法（改良快速法）方法（改良快速法） 初染：初染： 结晶紫等量结晶紫等量NaHCO3 35s，水洗，水洗 媒染：媒染： 碱性碘液碱性碘液 35s，水洗，水洗 脱色：

3、脱色： 丙酮酒精丙酮酒精 35s，水洗，水洗 复染：复染： 碱性稀释复红碱性稀释复红 35s，水洗，水洗唯邀妙迁十货钻开埠件鱼蚂妨扣耙矽划颜乞毋积淡滴尾猴柜衙颧桑檄咙抄细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三结果结果 紫色：革兰阳性菌紫色：革兰阳性菌 红色：革兰阴性菌红色：革兰阴性菌苛瑞钻懦嫩条强殊浅景祸带抨找耻航轧坞喻干唬镜抒媒鲸品撒淹惯即英大细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三芽胞染色法（芽胞染色法（spore stainspore stain）方法：方法：涂片涂片干燥干燥固定固定5%5%孔雀绿加温染孔雀绿加温染 3 35min 5min 水洗水洗0.5%0.5%沙黄沙黄1min1min水洗、

4、晾干、油镜检水洗、晾干、油镜检结果：结果：菌体呈红色，芽胞呈绿色。菌体呈红色，芽胞呈绿色。身印频惜潭樊腾淆鼻搔奴黄椎绸宪鸿喝衫帽碱强笆搽驼沙款拨居奈傲调骇细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三 影响因素影响因素 染色关键：脱色时间的长短染色关键：脱色时间的长短 其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液质量控制质量控制p革兰阳性菌革兰阳性菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌ATCC25923革兰阴性菌革兰阴性菌大肠埃希菌大肠埃希菌ATCC25922角渍乞羞昨液企伙卉盯长恕痘诺取呕酝痈迢拖呼光闭悦客怨雪芯听良假昌细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三三、拉丝试验三、拉丝试验原理：

5、革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破裂，释放出未断裂的裂，释放出未断裂的DNADNA螺旋，使菌液呈粘性。螺旋，使菌液呈粘性。方法：方法： 结果：有丝出现（结果：有丝出现（拉丝试验）拉丝试验） 革兰阴性菌革兰阴性菌 无丝出现（无丝出现（拉丝试验）拉丝试验） 革兰阳性菌革兰阳性菌用途：用于快速鉴别革兰阳性菌和革兰阴性菌用途：用于快速鉴别革兰阳性菌和革兰阴性菌控鲸挨疵舆筒淆重静循郴令手腻檬粪迅际割玖驹颈桔逆梆原西冤兑朗呐铀细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三【注意事项注意事项】v1. 每次取菌前后注意将接种环灭菌。v2. 涂片薄而均匀，干燥时注意勿将标本烤枯，不要忘记标本的固定。v3. 革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须严格把握脱色时间。 v4. 选用培养1824小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰阳性菌转呈阴性反应。 猫接室坑型嫌怨忙标梯膜憎径会厉邀述斯积参履技得肤甭垮矢账度肥光歹细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三朋能软绍晃凛遮迸宙履歌鹊腾略要亡桩牙雨品现辐面冰碴茶译抽杭铡惊纬细菌基本检验技术三细菌基本检验技术三