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1、新课程网校原创资料 版权所有 转载必究新课程网校原创资料 版权所有 转载必究无菌技术无菌技术 获得纯净培养物的关键是防获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵,无菌技术围绕止外来杂菌的入侵,无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开。着如何避免杂菌的污染展开。新课程网校原创资料 版权所有 转载必究无菌技术无菌技术消毒与灭菌的区别?消毒与灭菌的区别?消毒及灭菌的定义:1.消毒定义:利用化学或物理方法,杀死大部份致病微生物的过程。区分为高程度消毒(High-level Disinfection)、中程度消毒(Intermediate-level Disinfection)、低程度消毒(Low-level
2、 Disinfection)三种方式。2.灭菌的定义:以化学剂或物理方法消灭所有微生物,包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒,而达到完全无菌之过程。灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。新课程网校原创资料 版权所有 转载必究无菌技术无菌技术分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生杀灭一切微生物物物理法:热力、辐射、物理法:热力、辐射、微波、等离子体微波、等离子体化学法:醛类、烷化剂化学法:醛类、烷化剂高效消高效消毒法毒法杀灭一切致病杀灭一切致病微生物微生物紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等复配剂等中效消中效消毒法毒法杀灭除芽孢外杀灭除芽孢外的致病微生
3、物的致病微生物超声波、碘类、醇类、超声波、碘类、醇类、酚类酚类低效消低效消毒法毒法杀灭细菌繁殖杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒体、亲脂病毒单单链季胺盐、双胍类、链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子中草药、金属离子新课程网校原创资料 版权所有 转载必究无菌技术无菌技术消毒的方法:消毒的方法:1 1、100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法:、巴氏消毒法:70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮1515minmin3 3、用、用75%75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4 4、氯气消毒水源、氯气消毒水源5 5、紫外线消毒、
4、紫外线消毒新课程网校原创资料 版权所有 转载必究无菌技术无菌技术灭菌的方法:灭菌的方法:1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌:、干热灭菌:160-170 160-170 下加热下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌:、高压蒸气灭菌:100kPa、121 下维持下维持15-30min.新课程网校原创资料 版权所有 转载必究无菌技术无菌技术 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌,它可以杀灭所最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌,它可以杀灭所有的生物,包括最耐热的某些微生物的休眠体,同时可有的生物,包括最耐热的某些微生物的休眠体,同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有
5、些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌,特别是空气中的杂菌污染,试管及玻璃烧瓶都需采菌,特别是空气中的杂菌污染,试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口,通常采用棉花塞,也可采用各种金用适宜的塞子塞口,通常采用棉花塞,也可采用各种金属、塑料及硅胶帽,它们只可让空气通过,而空气中的属、塑料及硅胶帽,它们只可让空气通过,而空气中的其他微生物不能通过。其他微生物不能通过。 而平皿是由正反两平面板互扣而成,这种器具是专而平皿是由正反两平面板互扣而成,这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。为防止空气中微生物的污染而设计的。 新课程网校原创资料 版权所
6、有 转载必究基本操作程序基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存新课程网校原创资料 版权所有 转载必究1、培养基的配制、培养基的配制 人们按照微生物对营养物质的不同需求,人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。配制出供其生长繁殖的营养基质。 固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基基础培养基基础培养基加富培养基加富培养基鉴别培养基鉴别培养基选择培养基选择培养基新课程网校原创资料 版权所有 转载必究1、培养基的配制、培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细
7、菌)牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌) 新课程网校原创资料 版权所有 转载必究1、培养基的配制、培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)1 1称量称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH:pH7pH76 64 4过滤:这一步可以省去。过滤:这一步可以省去。5 5分装:分装:分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎8 8灭菌灭菌9 9倒平板倒平板1010无菌检查:无菌检查:将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时,以检查灭菌是否彻底。新课程网校原创资
8、料 版权所有 转载必究2、倒平板技术、倒平板技术新课程网校原创资料 版权所有 转载必究2、倒平板技术、倒平板技术新课程网校原创资料 版权所有 转载必究3、微生物的接种技术、微生物的接种技术新课程网校原创资料 版权所有 转载必究3、微生物的接种技术、微生物的接种技术新课程网校原创资料 版权所有 转载必究3、微生物的接种技术、微生物的接种技术新课程网校原创资料 版权所有 转载必究4、微生物的恒温培养、微生物的恒温培养新课程网校原创资料 版权所有 转载必究4、微生物的恒温培养、微生物的恒温培养新课程网校原创资料 版权所有 转载必究5、菌种的保存、菌种的保存1、临时保藏:接种到固体斜面培养基,菌落长成后置于4冰箱保存。2、长期保存:甘油冷冻管藏法