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1、直接抗人球蛋白试验阳性的意义直接抗人球蛋白试验阳性的意义n n红细胞抗原的自身抗体红细胞抗原的自身抗体n n近期输血的受血者血浆中的同种抗体与输入的供近期输血的受血者血浆中的同种抗体与输入的供血者红细胞抗原反应血者红细胞抗原反应n n输入的供血者血液或血液成分中的抗体与受血者输入的供血者血液或血液成分中的抗体与受血者红细胞抗原反应红细胞抗原反应n n孕妇体内的同种抗体通过胎盘致敏胎儿红细胞上孕妇体内的同种抗体通过胎盘致敏胎儿红细胞上n n抗菌药物（如青霉素）的抗体与药物致敏的红细抗菌药物（如青霉素）的抗体与药物致敏的红细胞相结合胞相结合1直接抗人球蛋白试验阳性的意义n n红细胞膜受某些药物（以
2、头孢菌素类最多见）红细胞膜受某些药物（以头孢菌素类最多见）疗法而改变，导致蛋白质（包括免疫球蛋白）疗法而改变，导致蛋白质（包括免疫球蛋白）非特异性地被红细胞膜所吸收非特异性地被红细胞膜所吸收n n对给予药物（如奎尼丁及非那西丁）的反应形对给予药物（如奎尼丁及非那西丁）的反应形成药物成药物- -抗药物复合体，使补体成分、抗药物复合体，使补体成分、IgGIgG抗体抗体（占少数）与红细胞相结合（占少数）与红细胞相结合n n为减少器官及骨髓移植患者的为减少器官及骨髓移植患者的T T细胞群体，应细胞群体，应用有嗜异性抗体存在的马抗人淋巴细胞球蛋白用有嗜异性抗体存在的马抗人淋巴细胞球蛋白时时n n非抗体介
3、导的丙球蛋白过高患者非抗体介导的丙球蛋白过高患者2直接抗人球蛋白试验阳性的意义直接抗人球蛋白试验阳性的评价直接抗人球蛋白试验阳性的评价n n血液标本的收集n n初步的血清学研究n n进一步的研究3直接抗人球蛋白试验阳性的意义自身免疫性溶血性贫血自身免疫性溶血性贫血4直接抗人球蛋白试验阳性的意义一、概念一、概念免免疫疫性性溶溶血血 免免疫疫性性溶溶血血是是指指由由于于免免疫疫反反应应而而使使红红细细 胞破坏加速，寿命缩短的过程。胞破坏加速，寿命缩短的过程。溶溶血血性性贫贫血血 溶溶血血性性贫贫血血是是由由于于红红细细胞胞破破坏坏增增多多、增增 速速， 超超过过造造血血补补偿偿能能力力范范围围，所
4、所发发生生 的一种贫血。的一种贫血。自身免疫性溶血性贫血自身免疫性溶血性贫血 是由于机体免疫功能异常，产生了抗是由于机体免疫功能异常，产生了抗自自 身红细胞的抗体，使红细胞破坏加速身红细胞的抗体，使红细胞破坏加速造造 成的溶血性贫血，在后天性溶血性贫成的溶血性贫血，在后天性溶血性贫血血 中多见。中多见。5直接抗人球蛋白试验阳性的意义二、分类二、分类 免疫性溶血性贫血可分为三类n 同种免疫性溶血性贫血 n自身免疫性溶血性贫血 药物引起的免疫性溶血性贫血6直接抗人球蛋白试验阳性的意义7直接抗人球蛋白试验阳性的意义8直接抗人球蛋白试验阳性的意义9直接抗人球蛋白试验阳性的意义自身免疫性溶血性贫血可分为
5、四种主要类型：自身免疫性溶血性贫血可分为四种主要类型： 1 1、 温抗体型自身免疫溶血性贫血（温抗体型自身免疫溶血性贫血（WAIHAWAIHA） 原发性的原发性的 （自发性）（自发性） 继发性的继发性的 （与淋巴瘤、系统性红斑狼疮、（与淋巴瘤、系统性红斑狼疮、 癌症或药物处理有关）癌症或药物处理有关） 2 2、 冷凝集素综合征（冷凝集素综合征（CASCAS） 原发性的原发性的 （自发的）（自发的） 继发性的继发性的 （与淋巴瘤支原体肺炎、传染性（与淋巴瘤支原体肺炎、传染性 单核细胞增多症单核细胞增多症 有关）有关）10直接抗人球蛋白试验阳性的意义11直接抗人球蛋白试验阳性的意义 混合型自身免疫
6、性溶血性贫血（混合型自身免疫性溶血性贫血（MTAMTA） 原发性的原发性的 （自发的）（自发的） 继发性的继发性的 （与系统性红斑狼疮、淋巴瘤有关）（与系统性红斑狼疮、淋巴瘤有关） n 阵发性寒冷性血红蛋白尿（阵发性寒冷性血红蛋白尿（PCHPCH） 原发性的原发性的 （自发性的）（自发性的） 继发性的继发性的 （与梅毒、病毒感染有关）。（与梅毒、病毒感染有关）。12直接抗人球蛋白试验阳性的意义三、血清学特征三、血清学特征13直接抗人球蛋白试验阳性的意义温抗体型自身免疫溶血性贫血温抗体型自身免疫溶血性贫血（WAIHAWAIHA） 常见的自身免疫性溶血性贫血，常见的自身免疫性溶血性贫血， 约占约占
7、 所有免疫性溶血性病例的所有免疫性溶血性病例的4870%4870%， 与温反应性自身抗体有关与温反应性自身抗体有关14直接抗人球蛋白试验阳性的意义 WAIHA WAIHA典型的血清学特征典型的血清学特征 1 1、 直接抗球蛋白试验直接抗球蛋白试验 使使用用单单特特异异性性IgGIgG及及抗抗C3C3试试剂剂时时，可可有有三三三三种种种种 形式的反应：形式的反应： 单独单独单独单独IgGIgG反应反应反应反应、单独单独单独单独C3C3致敏、致敏、致敏、致敏、IgG+C3IgG+C3致敏，致敏，致敏，致敏， 15直接抗人球蛋白试验阳性的意义2 2、在血清中的自身抗体、在血清中的自身抗体 是是IgG
8、IgG型型的的，与与所所有有的的红红细细胞胞在在间间接接抗抗人人球球蛋蛋白白试试验验中中都都呈呈阳阳性性反反应应。血血清清中中的的游游离离抗抗体体量量非常少。非常少。3 3、放散液中、放散液中 可检到可检到IgGIgG抗体。抗体。4 4、自身抗体特异性、自身抗体特异性 主主要要是是针针对对RhRh抗抗原原复复合合物物，但但只只有有在在得得到到稀稀有有表表现现型型红红细细胞胞，如如D D阴阴性性，或或RhRhnullnull时时才才能能明明确确16直接抗人球蛋白试验阳性的意义冷凝集素综合征（冷凝集素综合征（CASCAS） CASCAS（也也称称冷冷凝凝集集素素疾疾病病CHD)CHD)，是是与与冷
9、冷反反应应自自身身抗抗体体有有关关的的溶溶血血性性贫贫血血中中最最常常见见的的一一种种类类型型，约约占占所所有有免免疫疫性性溶溶血血性性病病例例的的16-32%16-32%。可有急性和慢性两种情况。可有急性和慢性两种情况。17直接抗人球蛋白试验阳性的意义CASCAS典型的血清学特征典型的血清学特征1.1. 直接抗球蛋白试验直接抗球蛋白试验 补补体体是是红红细细胞胞上上唯唯一一能能被被检检出出的的蛋蛋白白。多多特特异异性性抗抗球球蛋蛋白白试试剂剂中中抗抗C3dC3d（C4dC4d）成成分分是造成是造成DATDAT阳性的原因。阳性的原因。18直接抗人球蛋白试验阳性的意义19直接抗人球蛋白试验阳性的
10、意义2 2血清血清 在在4 4温温度度测测定定与与免免疫疫性性溶溶血血有有关关的的IgMIgM冷冷反反应应性性自自身身凝凝集集素素效效价价常常大大于于1 1，000000以以以以上上上上；在在体体外外用用超超过过3232温温度度盐盐水水悬悬浮浮红红细细胞胞时时则则很很少少有有反反应应。若若在在反反应应介介质质中中加加入入30%30%牛牛白白蛋蛋白白时时，70 70 % % 有有临临床床意意义义的的样样本本将将在在3737反应反应 20直接抗人球蛋白试验阳性的意义3 3、放散液、放散液 若若红红细细胞胞在在3737收收集集和和洗洗涤涤，细细胞胞上上没没有有 免疫球蛋白，放散液中不会有反应发生。免
11、疫球蛋白，放散液中不会有反应发生。 21直接抗人球蛋白试验阳性的意义n n4 4、自身抗体的特异性、自身抗体的特异性n n 最最 常常 见见 与与 CASCAS有有 关关 的的 特特 异异 性性 为为 抗抗 I I。 较不常见的抗较不常见的抗i i特异性则与感染性单核特异性则与感染性单核 球症有关。球症有关。 在及稀有的情况下，血清中冷反应性在及稀有的情况下，血清中冷反应性 自身凝集素具有自身凝集素具有PrPr特异性或其他特异性。特异性或其他特异性。n n 22直接抗人球蛋白试验阳性的意义阵发性寒冷性血红蛋白尿（阵发性寒冷性血红蛋白尿（PCHPCH） 是DAT阳性的自身免疫性溶血性贫血症最少见
12、的类型，成人中很少见，儿童中占32%。 较为常见PCH是急性暂时的情况，继发于病毒感染症，尤其在幼童当中。它也能出现在老年人中，为一特发性的慢性病。23直接抗人球蛋白试验阳性的意义 PCH典型的血清学特征1、直接抗球蛋白试验 PCH中的自身抗体是IgG，它和IgM冷自身凝集素一样，在身体较冷的部位，PCH的IgG自身抗体与红细胞起反应，使补体成分（C3及C4）与红细胞发生不可逆的结合，然后在较温暖的部位IgG分离。所以直抗阳性是补体造成的。24直接抗人球蛋白试验阳性的意义2 2、血清免疫球蛋白类型血清免疫球蛋白类型 在在PCHPCH中中IgGIgG自自身身抗抗体体，习习惯惯上上称称为为双双相相
13、性性溶溶血血素素，因因为为它它在在低低温温与与红红细细胞胞相相结结合合，在在3737时时 使使 致致 敏敏 红红 细细 胞胞 溶溶 血血 。 DonathDonathLandsteiner(DL)Landsteiner(DL)试验是诊断这种疾病的基础。试验是诊断这种疾病的基础。 25直接抗人球蛋白试验阳性的意义3 3、释放液免疫球蛋白类型释放液免疫球蛋白类型 由由于于补补体体成成分分是是循循环环红红细细胞胞上上唯唯一一存存在在的的球球蛋蛋白白，因因此此从从PCHPCH病病人人红红细细胞胞上上得得到到的的洗洗脱脱液一般是没有活性的。液一般是没有活性的。26直接抗人球蛋白试验阳性的意义4 4、自身
14、抗体的特异性自身抗体的特异性 PCHPCH的的自自身身抗抗体体大大部部分分呈呈现现抗抗-P-P特特异异性性，与与所所有有的的红红细细胞胞（包包括括病病人人自自己己的的红红细细胞胞）起起反反应应，与与罕罕见见p p或或PkPk表表现现型型不不反反应应。亦亦有有例例子子报告具有抗报告具有抗-I-I、抗、抗-i -i和抗和抗-Pr-Pr等特异性。等特异性。27直接抗人球蛋白试验阳性的意义28直接抗人球蛋白试验阳性的意义29直接抗人球蛋白试验阳性的意义 病人的红细胞是抗体还是补体致敏？病人的红细胞是抗体还是补体致敏？ 血清中有抗体吗？血清中有抗体吗？ 如果有，这些抗体是凝集如果有，这些抗体是凝集 还是
15、非凝集性抗体还是非凝集性抗体？体外溶血吗？体外溶血吗？ 最适反应温度是暖（最适反应温度是暖（37 37 ）还是冷（）还是冷（4 4 ）？是自身抗体还是同种抗体？是自身抗体还是同种抗体？ 洗脱液中有抗体活性吗？洗脱液中有抗体活性吗？ 30直接抗人球蛋白试验阳性的意义四、具有自身抗体的患者的血清学检查四、具有自身抗体的患者的血清学检查（一）、输血前试验中可能存在的问题 1、 冷型反应性自身抗体能引起自身凝集 反应，致使ABO及Rh分型试验结果发 生矛盾。自身抗体亦凝集血清分型试 验所用的A型和B型试剂红细胞。31直接抗人球蛋白试验阳性的意义2 2、 被球蛋白致敏的红细胞在接触到高蛋白含被球蛋白致敏
16、的红细胞在接触到高蛋白含 量的商品化的抗量的商品化的抗-Rh -Rh 血清试剂时，可发生血清试剂时，可发生 自发性的凝集反应，致使自发性的凝集反应，致使 Rh Rh 定型试验的定型试验的 结果发生矛盾。结果发生矛盾。32直接抗人球蛋白试验阳性的意义3 3、 血清里存在游离的自身抗体时，不可能获血清里存在游离的自身抗体时，不可能获 得在血清学上完全相配合的血液。这种情得在血清学上完全相配合的血液。这种情 况下要考虑自身抗体可能掩盖有临床意义况下要考虑自身抗体可能掩盖有临床意义 的同种抗体的存在。倘若时间允许，在输的同种抗体的存在。倘若时间允许，在输 血前应测定是否存在同种抗体血前应测定是否存在同
17、种抗体33直接抗人球蛋白试验阳性的意义解决解决ABOABO定型中的问题定型中的问题 1 1 、采集标本后，立即将标本放入、采集标本后，立即将标本放入37 37 并在试并在试验前用温盐水（验前用温盐水（3745 3745 ）洗涤红细胞。）洗涤红细胞。 2 2、用硫醇类试剂（、用硫醇类试剂（2-Me2-Me、DTTDTT等）处理红细等）处理红细胞胞。 3 3、反定型中，可将血清和、反定型中，可将血清和A A、B B红细胞在红细胞在37 37 预热进行试验。预热进行试验。 4 4、用吸收后血清进行试验（自身吸收的或用、用吸收后血清进行试验（自身吸收的或用纯合子纯合子O O型红细胞吸收的型红细胞吸收的
18、34直接抗人球蛋白试验阳性的意义解决解决RhRh定型中的问题定型中的问题 1 1、由冷自身抗体造成可用解决、由冷自身抗体造成可用解决ABOABO定型问题定型问题的方法来避免。的方法来避免。 2 2、由、由IgGIgG致敏的红细胞，试验必须要进行适当致敏的红细胞，试验必须要进行适当的对照试验。的对照试验。 或使用使用有盐水反应活性或使用使用有盐水反应活性的试剂。的试剂。35直接抗人球蛋白试验阳性的意义（二）（二）在有自身抗体存在时检测同种抗体1 1、有温型反应性抗体存在时检测同种抗体有温型反应性抗体存在时检测同种抗体 自身吸收自身吸收 异体吸收法异体吸收法 稀释技术稀释技术36直接抗人球蛋白试验
19、阳性的意义37直接抗人球蛋白试验阳性的意义2 2、有冷型反应性抗体存在时检测同种抗体有冷型反应性抗体存在时检测同种抗体 n用病人本身红细胞在用病人本身红细胞在4 4 吸收血清吸收血清n试验应严格掌握在试验应严格掌握在37 37 n 禁止使用小牛白蛋白和其它增强介质禁止使用小牛白蛋白和其它增强介质 n 使用使用EDTAEDTA抗凝血浆或加抗凝血浆或加EDTAEDTA的血清的血清 n 使用抗使用抗-IgG-IgG试剂，不用多特异性抗蛋白血清试剂，不用多特异性抗蛋白血清38直接抗人球蛋白试验阳性的意义五、自身免疫溶血性贫血病人的输血指南 为患WAIHA病人选择血液为患CAS病人选择血液为患PCH病人选择血液39直接抗人球蛋白试验阳性的意义40直接抗人球蛋白试验阳性的意义
