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1、微生物学实验微生物学实验 实验三（实验三（P68.72.78) P68.72.78) 微生物菌落形态观察、纯种分离及接种技术微生物菌落形态观察、纯种分离及接种技术一、实验原理一、实验原理p 纯培养纯培养：从一个细胞繁殖得到的微生物后代从一个细胞繁殖得到的微生物后代。p 获得纯培养的方法获得纯培养的方法： 稀释平板分离法稀释平板分离法1平板划线分离法平板划线分离法2单胞挑取法单胞挑取法3组织分离法组织分离法4 选择培养基分离选择培养基分离 5一、实验原理一、实验原理稀释平板分离法稀释平板分离法：将待分离样品做系列稀释，使样品中的微生物细胞充分分将待分离样品做系列稀释，使样品中的微生物细胞充分分散
2、。取合适稀释度的样品与培养基混合，培养出现菌落。如稀散。取合适稀释度的样品与培养基混合，培养出现菌落。如稀释度适合在培养基平板上即可出现的单个菌落。释度适合在培养基平板上即可出现的单个菌落。平板划线分离法平板划线分离法：用无菌接种环挑取待分离材料，在平板培养基表面划线稀释用无菌接种环挑取待分离材料，在平板培养基表面划线稀释而获得单菌落的方法而获得单菌落的方法。1.1.每人从每人从实验二稀释平板测数法实验二稀释平板测数法的培养基平板上选定一个孤立的培养基平板上选定一个孤立的菌落，采用划线法分离、纯化出一个菌株。的菌落，采用划线法分离、纯化出一个菌株。2. 2. 观察、比较、识别从土壤中分离的观察
3、、比较、识别从土壤中分离的细菌、放线菌、霉菌细菌、放线菌、霉菌 的的菌落特征。菌落特征。 3. 3. 学习无菌操作学习无菌操作（倒培养基平板、接种环灭菌、划线分离）（倒培养基平板、接种环灭菌、划线分离）的的基本方法。基本方法。二、实验内容二、实验内容三、实验方法三、实验方法用实验一配制的培养基用实验一配制的培养基每人一个每人一个火焰灼烧灭菌火焰灼烧灭菌挑菌，划线挑菌，划线挑菌量要少挑菌量要少镜检，菌体单一镜检，菌体单一无杂菌污染无杂菌污染STEP 1STEP 2STEP 3STEP 4倒培养倒培养基平板基平板 接种环接种环 灭菌灭菌 选取单选取单 菌落菌落 培养得到培养得到单菌落单菌落无菌操作
4、，在超净工作台酒精灯火焰旁操作无菌操作，在超净工作台酒精灯火焰旁操作无菌基本操作无菌基本操作倒培养基平板倒培养基平板三、实验方法三、实验方法用实验一配制的培养基用实验一配制的培养基每人一个每人一个火焰灼烧灭菌火焰灼烧灭菌挑菌，划线挑菌，划线挑菌量要少挑菌量要少镜检，菌体单一镜检，菌体单一无杂菌污染无杂菌污染STEP 1STEP 2STEP 3STEP 4倒培养倒培养基平板基平板 接种环接种环 灭菌灭菌 选取单选取单 菌落菌落 培养得到培养得到单菌落单菌落无菌基本操作无菌基本操作接种环灼烧灭菌接种环灼烧灭菌 接种和分离工具接种和分离工具1.1.接种针接种针 2.2.接种接种环环 3.3.接种钩接
5、种钩 4.5.4.5.玻璃涂棒玻璃涂棒 6.6.接种圈接种圈 7.7.接种锄接种锄 8.8.小解剖刀小解剖刀 接种环灼烧灭菌接种环灼烧灭菌 三、实验方法三、实验方法用实验一配制的培养基用实验一配制的培养基每人一个每人一个火焰灼烧灭菌火焰灼烧灭菌挑菌，划线挑菌，划线挑菌量要少挑菌量要少镜检，菌体单一镜检，菌体单一无杂菌污染无杂菌污染STEP 1STEP 2STEP 3STEP 4倒培养倒培养基平板基平板 接种环接种环 灭菌灭菌 选取单选取单 菌落菌落 培养得到培养得到单菌落单菌落无菌基本操作无菌基本操作划线分离划线分离平板划线分离方平板划线分离方法法1.1.分区划线法分区划线法 2.2.连续划线
6、法连续划线法 3.3.方格法方格法 4.4.放射法放射法5.5.四格法四格法1. 1. 严格按照无菌操作要求进行操作严格按照无菌操作要求进行操作 ；2 2、划线时接种环与平板、划线时接种环与平板之间保持较小角度（之间保持较小角度（3030）；3 3、划线时用力小，不能将培养、划线时用力小，不能将培养基划破；基划破；4 4、挑菌量不宜太多。、挑菌量不宜太多。菌落特征观察菌落特征观察菌落：菌落：在固体培养基上（内），一个或几个同种微生物细胞局在固体培养基上（内），一个或几个同种微生物细胞局限在一处大量繁殖，形成的肉眼可见的，有一定形态特征的细胞限在一处大量繁殖，形成的肉眼可见的，有一定形态特征的细胞群体。群体。是细菌鉴定的重要指标是细菌鉴定的重要指标。菌落特征观察菌落特征观察：形态、大小、色泽、透明度、致密度、边缘形态、大小、色泽、透明度、致密度、边缘菌落形状菌落形状菌落高度菌落高度菌落边缘菌落边缘点状点状 圆形圆形 丝状丝状 不规则状不规则状 假根状假根状 扁平扁平 圆形圆形 隆起隆起 凸透镜状凸透镜状 垫状垫状 脐突状脐突状 完整完整 波状波状 裂片装裂片装 锯齿状锯齿状 丝状丝状 卷曲状卷曲状四大类微生物菌落基本特征四大类微生物菌落基本特征 四、实验作业四、实验作业微生物实验报告册微生物实验报告册P3P3：1 1；P4P4：1 1；P5P5：1.21.2
