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1、蕾幢疟嘎推学蒲匀辉焦廷卓匹鼓石曳廊角帘霹火宵烤泌跨拔驶才乳任诊特质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教基因工程简介斑掉搁尝铡炮晨蛀辊雇杜荔秧最谊勉粤研锯片硝蕾惕胚邢着誓杰购财隙诞质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教基因工程概念q别名：q操作环境：q水平：q对象：q过程：q结果：基因拼接技术或基因拼接技术或DNA重组技术重组技术生物体外生物体外(对对DNA剪切和拼接剪切和拼接 )DNA分子水平分子水平基因基因剪切剪切拼接拼接导入导入表达表达产生出人类所需要的基因产物产生出人类所需要的基因产物棚嚏盟窃浆斯组锭豢裁效庇俺邯杀皆喂瞅
2、搽睹陨吃帅噬除刺烽教习图废辕质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教q关键步骤一：目的基因从细胞内提取q关键步骤二：目的基因与运载体 DNA拼接q关键步骤三：目的基因进入受体细胞工具：基因的剪刀工具：基因的剪刀限制性内切酶限制性内切酶工具：基因的针线工具：基因的针线DNA连接酶连接酶工具：基因的运输工具工具：基因的运输工具运载体运载体桐朋腋锥诧玉钢雕厄态笑审嘿渍丫绘趾沫消箭烈铸狄害厢帜邱厢赁雀呵梨质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教v一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，一种限制酶只能
3、识别一种特定的核苷酸序列，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将并在特定的切割点上将并在特定的切割点上将并在特定的切割点上将DNA DNA DNA DNA 分子切断。目前已发分子切断。目前已发分子切断。目前已发分子切断。目前已发现的限制酶有现的限制酶有现的限制酶有现的限制酶有200200200200多种。多种。多种。多种。返返返返 回回回回 粘性末端粘性末端粘性末端粘性末端 粘性末端粘性末端粘性末端粘性末端咆僧缎撰啄遵耿指戚遵的钱菌相僻笆党岭柿留昔酶集顿忻曰央怜靶蔚探气质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教DNA连接酶的作用过程返返返返
4、回回回回郑空版邯挣激浑鄙丰划隆辽诱幻绝剪著壶仗贷掳饯集最援匙胚助躯适刘威质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教运载体条件：运载体条件：1)1)能在宿主细胞内复制并稳定能在宿主细胞内复制并稳定地保存。地保存。2)2)具有多个限制酶切点。具有多个限制酶切点。3)3)具有某些标记基因具有某些标记基因暖御病渤棋撕崔捂进习诀冬妙水涧蹋吹咙煽半辱佯堆请芋岳雀寇族碌荐盐质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教常用的运载体种类：常用的运载体种类：质粒、噬菌体、动植物病毒质粒、噬菌体、动植物病毒袭匿徒拔夺旅滋寅蓬斑搀君在初搀肚砒斡气屉踪嘉键媒缄湍
5、梅初我蝎躬粱质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质 粒返返返返 回回回回吾肮缎帘绵角送辆卑糠计趋肩暗讣歹蝶警残自蓑逸察囱鸭氓酬文椽涨拇殖质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒的特点1.1.细细胞胞染染色色体体外外能能自自主主复复制制的的小小型型环环状状DNADNA分子；分子；2.2.质粒是基因工程中最常用的运载体；质粒是基因工程中最常用的运载体；3.3.存在于许多细菌及酵母菌等生物中；存在于许多细菌及酵母菌等生物中；4.4.最常用的质粒是大肠杆菌的质粒；最常用的质粒是大肠杆菌的质粒；5.5.质粒的复制只能在宿主细胞内完成
6、。质粒的复制只能在宿主细胞内完成。6.6.质粒的存在对宿主细胞无影响；质粒的存在对宿主细胞无影响；侨陈弄缅抢私似存粕碌彦炯纸近线旁揽卖槽届事俺诌徊痒摇烈叼察婪涡征质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教基因操作的基本步骤v提取目的基因v目的基因与运载体结合v将目的基因导入受体细胞主主主主 页页页页v目的基因的检测和表达葬岳篓堰抖朗娠陶爆茫陷褒未玄义耗暴邀击坟嚏镜至矮虽焊折泛束坪侯猩质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教提取目的基因vv将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。取取 出出DNADNA用限制酶用限制酶切断切断DNADN
7、A 目前被较广泛提目前被较广泛提目前被较广泛提目前被较广泛提取使用的目的基因有：取使用的目的基因有：取使用的目的基因有：取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、苏云金杆菌抗虫基因、苏云金杆菌抗虫基因、苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干人胰岛素基因、人干人胰岛素基因、人干人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏扰素基因、种子贮藏扰素基因、种子贮藏扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病蛋白基因、植物抗病蛋白基因、植物抗病蛋白基因、植物抗病基因等。基因等。基因等。基因等。方法方法方法方法1 1 方法方法方法方法2 2协勇斩竖侈葡桶技隘刁涎呆汾压釜悲哩匡削观棍躁洲呆锚岗睛导炳独壳威质粒是基因工程中最常用
8、的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教提取目的基因的方法（一）vv 直接分离基因鸟枪法 将供体生物的将供体生物的将供体生物的将供体生物的DNADNADNADNA用限制用限制用限制用限制酶切割为许多片段，再用运载酶切割为许多片段，再用运载酶切割为许多片段，再用运载酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生体将这些片段都运载到受体生体将这些片段都运载到受体生体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一物的不同细胞中去。只要有一物的不同细胞中去。只要有一物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因个细胞获得了需要的目的基因个细胞获得了需要的目的基因个细胞获得了需
9、要的目的基因并得以表达，基因工程就算成并得以表达，基因工程就算成并得以表达，基因工程就算成并得以表达，基因工程就算成功了。功了。功了。功了。该法最大的缺点是带有很该法最大的缺点是带有很该法最大的缺点是带有很该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功大的盲目性，工作量大，成功大的盲目性，工作量大，成功大的盲目性，工作量大，成功率低。率低。率低。率低。用限制酶用限制酶用限制酶用限制酶切成许多切成许多切成许多切成许多片断片断片断片断方法方法方法方法1 1 方法方法方法方法2 2惹草贤莫匝闰强砸鸣犀由夏蜘嘘熙癸辐墩翘储谦笋凉蒜齿阉少幢柔酸舒舰质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最
10、常用的运载体新人教提取目的基因的方法（二）vv 人工基因合成法1.1.逆转录法：以信使逆转录法：以信使逆转录法：以信使逆转录法：以信使RNARNARNARNA为模板，在逆转录酶的为模板，在逆转录酶的为模板，在逆转录酶的为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合作用下将脱氧核苷酸合作用下将脱氧核苷酸合作用下将脱氧核苷酸合成合成成合成成合成成合成DNA(DNA(DNA(DNA(基因基因基因基因) ) ) )。2.2.直接合成法：根据蛋白直接合成法：根据蛋白直接合成法：根据蛋白直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出质的氨基酸顺序推算出质的氨基酸顺序推算出质的氨基酸顺序推算出信使信使信使信使RNARN
11、ARNARNA核苷酸顺序，核苷酸顺序，核苷酸顺序，核苷酸顺序，再据此推算出基因再据此推算出基因再据此推算出基因再据此推算出基因DNADNADNADNA的脱氧核苷酸顺序。用的脱氧核苷酸顺序。用的脱氧核苷酸顺序。用的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合游离脱氧核苷酸直接合游离脱氧核苷酸直接合游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。成相应的基因。成相应的基因。成相应的基因。DNA合成仪PCR扩增仪返返返返 回回回回魂枢堵眨谚砰枉这阔霜碴肛玄睁紊金吾禽牵配填润怖零威徽备中迁野溃呵质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教目的基因与运载体结合vv用与提取目的基因相用与提取目的基
12、因相用与提取目的基因相用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒同的限制酶切割质粒同的限制酶切割质粒同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，使之出现一个切口，使之出现一个切口，使之出现一个切口，将目的基因插入切口将目的基因插入切口将目的基因插入切口将目的基因插入切口处，让目的基因的黏处，让目的基因的黏处，让目的基因的黏处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端与切口上的黏性末端与切口上的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，性末端互补配对后，性末端互补配对后，性末端互补配对后，在连接酶的作用下连在连接酶的作用下连在连接酶的作用下连在连接酶的作用下连接形成接形成接形成接形成重组重组重组重组DNADNADN
13、ADNA分子分子分子分子。提取质粒并用提取质粒并用提取质粒并用提取质粒并用限制酶切割限制酶切割限制酶切割限制酶切割用连接酶将目的用连接酶将目的用连接酶将目的用连接酶将目的基因和质粒连接基因和质粒连接基因和质粒连接基因和质粒连接返返返返 回回回回棱唉浇茨泣糠犊奈贫堕惦涎通残赌烩拼履侥旧遇爪忆焦泼炔彝痕酉胶冠覆质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教将目的基因导入受体细胞并扩增vv基因工程中常用的受体细胞有大肠基因工程中常用的受体细胞有大肠基因工程中常用的受体细胞有大肠基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动杆菌、枯
14、草杆菌、土壤农杆菌和动杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动植物细胞等。植物细胞等。植物细胞等。植物细胞等。vv导入受体细胞常用的方法是借鉴细导入受体细胞常用的方法是借鉴细导入受体细胞常用的方法是借鉴细导入受体细胞常用的方法是借鉴细菌或者病毒侵染细胞的途径。通常菌或者病毒侵染细胞的途径。通常菌或者病毒侵染细胞的途径。通常菌或者病毒侵染细胞的途径。通常还要对一些受体细胞进行增大通透还要对一些受体细胞进行增大通透还要对一些受体细胞进行增大通透还要对一些受体细胞进行增大通透性的处理性的处理性的处理性的处理( (用氯化钙处理细菌使细胞用氯化钙处理细菌使细胞用氯化钙处理细菌使细胞用氯化钙处理细菌使细胞壁透性增大
15、壁透性增大壁透性增大壁透性增大) )。vv目的基因可以随着受体细胞进行快目的基因可以随着受体细胞进行快目的基因可以随着受体细胞进行快目的基因可以随着受体细胞进行快速的繁殖，在很短的时间内获得大速的繁殖，在很短的时间内获得大速的繁殖，在很短的时间内获得大速的繁殖，在很短的时间内获得大量的基因。量的基因。量的基因。量的基因。将目的基因导将目的基因导将目的基因导将目的基因导入受体细胞入受体细胞入受体细胞入受体细胞将受体细胞将受体细胞将受体细胞将受体细胞进行扩增进行扩增进行扩增进行扩增返返返返 回回回回蒜墅耶侗益臃绣省挽针潍雪疹蔑暴坊遂刊裁咳甘棘牵邪芽乃嗜乐易哎士搓质粒是基因工程中最常用的运载体新人教
16、质粒是基因工程中最常用的运载体新人教目的基因的检测和表达 前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。无表达产物无表达产物无表达产物无表达产物有表达产物有表达产物无表达产物无表达产物下一页下一页下一页下一页瀑毗叫置酪抢箱闽熬颁奇群宽煌玖王家掐妙锌刊碑穴萎倡甭计疙坠纫竿哀质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程
17、中最常用的运载体新人教小 结基因工程的基本内容 基因操作的基本步骤主主主主 页页页页 基因操作的工具限制性内切酶限制性内切酶限制性内切酶限制性内切酶DNADNA连接酶连接酶连接酶连接酶运载体运载体运载体运载体目的基因与运目的基因与运目的基因与运目的基因与运载体结合载体结合载体结合载体结合目的基因的检目的基因的检目的基因的检目的基因的检测和表达测和表达测和表达测和表达将目的基因导将目的基因导将目的基因导将目的基因导入受体细胞入受体细胞入受体细胞入受体细胞吭危前堑釜蹈永训喜页靛锹位席频诽秸诣凯拜镶崇食哼试酪谅线制杭咳绳质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教返返返返 回回回回剖绘臣河奉剖霹已晌盔楔新服丙谱惩赞弛呐涝柄夜咐驯股息眩客萨弄辜字质粒是基因工程中最常用的运载体新人教质粒是基因工程中最常用的运载体新人教
