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1、一、实验目的：一、实验目的：实验三、蛋白质的沉淀反响实验三、蛋白质的沉淀反响1 1加深对蛋白质胶体溶液稳定要素的认识。加深对蛋白质胶体溶液稳定要素的认识。2 2了解沉淀蛋白质的几种方法及其实意图义。了解沉淀蛋白质的几种方法及其实意图义。3 3了解蛋白量变性与沉淀的关系。了解蛋白量变性与沉淀的关系。二、实验原理：二、实验原理：实验三、蛋白质的沉淀反响实验三、蛋白质的沉淀反响在水溶液中的蛋白质分子由于外表生成水化层和双电层而成为稳定在水溶液中的蛋白质分子由于外表生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化要素影响下，蛋白质颗粒可因失去的亲水胶体颗粒，在一定的理化要素影响下，蛋白质颗粒可
2、因失去电荷和脱水而沉淀。电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反响可分为两类。蛋白质的沉淀反响可分为两类。1 1可逆的沉淀的反响可逆的沉淀的反响 2 2不可逆的沉淀的反响不可逆的沉淀的反响三、实验试剂：三、实验试剂：1. 1. 蛋白蛋白质质溶液；溶液；5%5%卵清蛋白溶液或卵清蛋白溶液或鸡鸡蛋清的水溶液蛋清的水溶液 新新颖鸡颖鸡蛋清蛋清水水=19=19 2. pH4.7 2. pH4.7 醋酸醋酸- -醋酸醋酸钠钠的的缓缓冲溶液冲溶液3. 3%3. 3%硝酸硝酸银银溶液溶液4. 5%4. 5%三三氯氯乙酸溶液乙酸溶液5. 95%5. 95%乙醇乙醇 6. 6. 饱饱和硫酸和硫酸铵铵溶液溶液7. 7.
3、硫酸硫酸铵结铵结晶粉末晶粉末8. 0.1 molL-18. 0.1 molL-1盐盐酸溶液酸溶液9. 0.1 molL-19. 0.1 molL-1氢氢氧化氧化钠钠溶液溶液10. 0.05 molL-110. 0.05 molL-1碳酸碳酸钠钠溶液溶液11. 0.1 molL-111. 0.1 molL-1醋酸溶液醋酸溶液12. 12. 甲基甲基红红溶液溶液13. 2%13. 2%氯氯化化钡钡溶液溶液实验三、蛋白质的沉淀反响实验三、蛋白质的沉淀反响四、实验内容：四、实验内容：蛋白质的盐析：无机盐硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等的浓溶液能析出蛋白蛋白质的盐析：无机盐硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等的浓溶液能析出
4、蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。叫分段盐析。质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。叫分段盐析。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白那么在饱和硫酸铵溶液中如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白那么在饱和硫酸铵溶液中才干析出。才干析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。盐析作用是可逆过程。加加5%5%卵清蛋白溶液卵清蛋白溶液5 ml5 ml于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟那么析出球蛋白的沉淀。
5、倒出少量混浊沉淀，加少量水，察看能否数分钟那么析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，察看能否溶解，为什么？将管中内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解溶解，为什么？将管中内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。提示：沉淀的前奏是白色浑浊为止，此时析出的沉淀为清蛋白。提示：沉淀的前奏是白色浑浊取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，察看沉淀的再溶解。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，察看沉淀的再溶解。实验三、蛋白质的沉淀反响实验三、蛋白质的沉淀反响1 1蛋白蛋白质质的的盐盐析析原理和操作原理和操作四、实验内容：四、实验内容：重金属离子沉淀蛋白质重金属离子沉淀蛋白
6、质 重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。取取1 1支试管，参与蛋白质溶液支试管，参与蛋白质溶液2 ml2 ml，再加，再加3%3%硝酸银溶液硝酸银溶液1212滴，振荡试管，有沉淀滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中参与少量的水，沉淀能否溶解？为什么产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中参与少量的水，沉淀能否溶解？为什么？某些有机酸沉淀蛋白质某些有机酸沉淀蛋白质 酸根离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。酸根离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。取取1 1支试管，参与蛋白质溶液支试管，参与蛋白质溶液2 ml2 ml，再加，再加1 ml
7、 5%1 ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，察看三氯乙酸溶液，振荡试管，察看沉淀的生成。放置片刻，倾出上清液，向沉淀中参与少量水，察看沉淀能否溶解。沉淀的生成。放置片刻，倾出上清液，向沉淀中参与少量水，察看沉淀能否溶解。有机溶剂沉淀蛋白质有机溶剂沉淀蛋白质 取取1 1支试管，参与支试管，参与2 ml2 ml蛋白质溶液，再参与蛋白质溶液，再参与2 ml 95%2 ml 95%乙醇。混匀，察看沉淀的生成乙醇。混匀，察看沉淀的生成实验三、蛋白质的沉淀反响实验三、蛋白质的沉淀反响2 2重金属、有机酸、有机溶重金属、有机酸、有机溶剂测剂测定定原理和操作原理和操作试剂（ml）管号5%卵清蛋白0.1 mol
8、L-1氢氧化钠0.1 molL-1盐酸95%乙醇pH4.7缓冲液123111111111振振摇混匀后，察看各管有何混匀后，察看各管有何变化。放置片刻，向各管内加水化。放置片刻，向各管内加水8 ml8 ml，然后在第，然后在第2 2、3 3号号管中各加一滴甲基管中各加一滴甲基红，再分，再分别用用0.1 molL-10.1 molL-1醋酸溶液及醋酸溶液及0.05 molL-10.05 molL-1碳酸碳酸钠溶液溶液中和之。察看各管中和之。察看各管颜色的色的变化和沉淀的生成。每管再加化和沉淀的生成。每管再加0.1 molL-10.1 molL-1盐酸溶液数滴，酸溶液数滴，察看沉淀的再溶解。解察看沉
9、淀的再溶解。解释各管各管发生的全部景象。生的全部景象。取取3支试管，编号。依下表顺序参与试剂支试管，编号。依下表顺序参与试剂四、实验内容：四、实验内容：3. 3. 乙醇引起的变性与沉淀乙醇引起的变性与沉淀实验三、蛋白质的沉淀反响实验三、蛋白质的沉淀反响阐明：阐明：1.1.交代清楚本次实验的内容，强调逐渐完成，细心做好实景象的记录交代清楚本次实验的内容，强调逐渐完成，细心做好实景象的记录2.2.指点试管、酒精灯、恒温水浴锅的正确运用指点试管、酒精灯、恒温水浴锅的正确运用3.3.强调本卷须知：强调本卷须知：1 1仪器和试剂比较多，运用时要小心谨慎，看准后再用，以防用错；仪器和试剂比较多，运用时要小
10、心谨慎，看准后再用，以防用错；2 2实验内容多，同组的同窗做好妥当安排，相互之间错开进展；实验内容多，同组的同窗做好妥当安排，相互之间错开进展；3 3每项实验应留意察看并做好原始景象和数据的记录，每项实验应留意察看并做好原始景象和数据的记录，以便照实地写出实验报告。以便照实地写出实验报告。二、实验内容：二、实验内容：实验三、蛋白质的沉淀反响实验三、蛋白质的沉淀反响4. 4. 尿蛋白定性检验：加热醋酸法个人检查本人的尿液尿蛋白定性检验：加热醋酸法个人检查本人的尿液3mL3mL尿液加热沸腾，察看有无沉淀。假设有测定参与尿液加热沸腾，察看有无沉淀。假设有测定参与2%2%醋酸数滴醋酸数滴使显酸性，察看测定情况，记录。使显酸性，察看测定情况，记录。三、实验报告：三、实验报告：列表记录实验景象并加以分析。列表记录实验景象并加以分析。实验三、蛋白质的沉淀反响实验三、蛋白质的沉淀反响
