高效液相色谱分析法

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1、第第十三十三章章 高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法2024/8/26第一节第一节 高效液相色谱的特点与仪器高效液相色谱的特点与仪器 第二节第二节 基本原理与主要分离类型基本原理与主要分离类型 第三节第三节 固定相与流动相固定相与流动相 第四节第四节 影响分离的因素与操作条件选择影响分离的因素与操作条件选择 第一节第一节 高效液相色谱的特点与仪器高效液相色谱的特点与仪器一、一、高效液相色谱高效液相色谱仪仪 二、高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱法的特点 三、流程及主要部件三、流程及主要部件 一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器液相色谱仪（液相色谱仪（2）液相色谱仪（液相色谱仪（3）液相色谱仪（

2、液相色谱仪（4）二、二、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速 、高沸点、热不稳定有机及生、高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。化试样的高效分离分析方法。三、流程及主要部件三、流程及主要部件1.1.流程流程2.主要部件主要部件(1) 高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：150350105 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（ 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)4. 4. 选择流动相时应注意的几个问题选

3、择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。一、一、影响分离的因素影响分离的因素 二、分离类型的选择二、分离类型的选择 三、液相色谱的应用三、液相色谱的应用 四、液相制备色谱四、液相制备色谱 第四节第四节 影响分离的因素与操作条件的选择影响分离的因素与操作条件的选择2024/8/26一

4、、一、影响分离的因素影响分离的因素1. 1. 影响分离的因素与提高柱效的途径影响分离的因素与提高柱效的途径 在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即： H = A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 2. 2.流速流速 流速大于0.5 cm/s时, Hu曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱

5、效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。 3.3.固定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。二、分离类型选择二、分离类型选择三、三、 HPLC的的应用应用 1. 1. 环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 50m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。2. 2. 稠环芳烃

6、的分析稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 C 柱 压：70 104 Pa 检测器：紫外检测器四、制备型液相色谱四、制备型液相色谱 获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。 半制备柱（内径8mm，长度15 30cm），一次制备量.1mg；1.1.色谱柱的柱容量（柱负荷）色谱柱的柱容量（柱负荷） 对分析柱：对分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 对制备柱：对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量； 超载：超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。 超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降降低低10%为宜。为宜。2. 2. 液相制备色谱的方法液相制备色谱的方法收集组分时，通常有以下情况： （1）可获得良好分离，主峰 使用制备柱，超载提高效率； （2）两主成分之间的小组分； 超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。 3. 3. 制备型液相色谱制备型液相色谱 制备型液相色谱制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。 制备柱制备柱：内径2050mm，柱长50cm。