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1、透射电子显微镜生物制品制备技术透射电子显微镜生物制品制备技术n n组织学与胚胎学教研室：苏衍萍冷冻蚀刻法冷冻蚀刻法超薄切片超薄切片冷冻蚀刻法冷冻蚀刻法冷冻割断术冷冻割断术细胞化学法细胞化学法免疫组织化学技术免疫组织化学技术免疫电镜法免疫电镜法电镜放射自显影术电镜放射自显影术放射自显影技术放射自显影技术扫描电镜技术扫描电镜技术被吞噬的红细胞n n现有的透射电镜生物制品制备技术分为两类：现有的透射电镜生物制品制备技术分为两类：n n一类是透射电镜的基本制备技术，包括超薄一类是透射电镜的基本制备技术，包括超薄切片和负染色法；切片和负染色法；n n另一类是生物制品的特殊技术，其中包括冷另一类是生物制品
2、的特殊技术，其中包括冷冻蚀刻法、冰冻割断术、细胞化学法、免疫冻蚀刻法、冰冻割断术、细胞化学法、免疫电镜法、放射自显影技术、电镜法、放射自显影技术、X X线微区分析技线微区分析技术等。术等。 n n1 1、 超薄切片样品的制备超薄切片样品的制备n n（1 1） 取材取材 基本要求是在活体情况下进行基本要求是在活体情况下进行n n取材的原则取材的原则( (快、准、轻、小、冷的原则）快、准、轻、小、冷的原则）n n1 1） 快速：快速：1 1分钟之内投入固定液。分钟之内投入固定液。n n2 2） 块小：块小：0.5-10.5-1mmmm3 3或截面或截面1 1mmmm2 2的长条。的长条。n n3
3、3） 部位准部位准n n4 4） 损损伤伤小小：器器械械应应锐锐利利，避避免免牵牵拉拉、挤挤压压，防止组织受机械损伤。防止组织受机械损伤。n n5 5） 低温：低温：0-40-4o oC Cn n取材的方法取材的方法n n1 1）动物材料：）动物材料： n n对对神神经经组组织织等等要要进进行行原原位位固固定定或或灌灌注注固固定定，待待组织适当硬化后再取材。组织适当硬化后再取材。胚胎干细胞的研究n n2 2）培养细胞：）培养细胞： 生长在瓶中的细胞到足够的生长在瓶中的细胞到足够的量，先倒去培养液，然后倒入适量的戊二醛量，先倒去培养液，然后倒入适量的戊二醛固定液，在冰浴下固定液，在冰浴下3-53
4、-5分钟、弯头吸管吹打或分钟、弯头吸管吹打或用软器械轻轻地刮下贴壁的细胞，将这种混用软器械轻轻地刮下贴壁的细胞，将这种混合液倒入离心管中，合液倒入离心管中，20002000rpmrpm低速离心低速离心15-2015-20分钟，使细胞呈团，弃去上清液，换一次固分钟，使细胞呈团，弃去上清液，换一次固定液，将其移入修块台，修快成标准块定液，将其移入修块台，修快成标准块4 4o oC C固固定、待用。定、待用。n n3 3 3 3）单单单单细细细细胞胞胞胞悬悬悬悬液液液液：精精精精子子子子、血血血血球球球球等等等等其其其其他他他他不不不不易易易易聚聚聚聚集集集集的的的的悬悬悬悬浮浮浮浮游游游游离离离离
5、材材材材料料料料，可可可可加加加加入入入入等等等等量量量量的的的的戊戊戊戊二二二二醛醛醛醛和和和和其其其其他他他他类类类类型型型型的的的的固固固固定定定定液液液液，轻轻轻轻轻轻轻轻地地地地把把把把他他他他们们们们悬悬悬悬浮浮浮浮在在在在固固固固定定定定液液液液中中中中。经经经经过过过过固固固固定定定定n n处理后再离心成团，处理后再离心成团，处理后再离心成团，处理后再离心成团，n n在在在在50505050o o o oC C C C中弃去上清液，中弃去上清液，中弃去上清液，中弃去上清液，n n加入适量的经加入适量的经加入适量的经加入适量的经50505050o o o oC C C Cn n预
6、温的预温的预温的预温的2%2%2%2%的琼浆，的琼浆，的琼浆，的琼浆，n n使团悬浮，将悬浮团使团悬浮，将悬浮团使团悬浮，将悬浮团使团悬浮，将悬浮团n n和琼脂液一同在薄片和琼脂液一同在薄片和琼脂液一同在薄片和琼脂液一同在薄片n n上展层，固定后上展层，固定后上展层，固定后上展层，固定后n n切成切成切成切成1 1 1 1mm3mm3mm3mm3的小块。的小块。的小块。的小块。n n（2 2）固定）固定 n n 固固定定的的目目地地是是把把细细胞胞在在活活体体状状态态时时的的结结构构尽尽可可能能完完整整的的保保存存下下来来，避避免免自自身身酶酶的的分分解解而而出出现现自自溶溶，或或外外界界微微
7、生生物物的的侵侵入入而而产产生生腐败，致细胞的超微结构破坏。腐败，致细胞的超微结构破坏。1）固定液的作用）固定液的作用n nA阻止细胞自溶。阻止细胞自溶。n nB稳定细胞物质成分。稳定细胞物质成分。n nC在在一一些些组组分分的的分分子子之之间间以以化化学学反反应应和和物物理理反反应应建建立立铰铰链链，提提供供一一个个骨骨架架来来稳稳定各种细胞的空间结构。定各种细胞的空间结构。n nD能提供一定的电子反差能提供一定的电子反差n n 理理想想的的固固定定剂剂，应应具具备备以以下下条条件件：能能迅迅速速而而均均匀匀地地渗渗入入组组织织细细胞胞内内部部，稳稳定定细细胞胞内内各各种种成成分分；能能即即
8、刻刻将将细细胞胞“杀杀死死”，尽尽可可能能保保持持细细胞胞微微细细结结构构，减减少少死死后后变变化化；对对细细胞胞不不产产生生收收缩缩及及膨膨胀胀作作用用，不不产产生生人人工工假假象象及及变变形形；可可保保存存酶酶的的活活性性，以利于细胞化学测定工作的进行。以利于细胞化学测定工作的进行。n n2 2）影响固定效果的因素）影响固定效果的因素）影响固定效果的因素）影响固定效果的因素n n固定液的酸碱度固定液的酸碱度固定液的酸碱度固定液的酸碱度( (pHpH值值值值) )n n固定液的固定液的固定液的固定液的pHpH值值值值n n渗透压渗透压渗透压渗透压n n缓冲液的类型缓冲液的类型缓冲液的类型缓冲
9、液的类型n n固定的温度和时间固定的温度和时间固定的温度和时间固定的温度和时间n n当前采用的是在当前采用的是在当前采用的是在当前采用的是在0 04 4下固定下固定下固定下固定1144小时。小时。小时。小时。n n3）常用的几种固定剂）常用的几种固定剂n nA四四氧氧化化锇锇（osmiumtetroxide,OsO4）亦亦称称锇锇酸酸：锇锇酸酸实实际际上上不不是是酸酸，它它的的水水溶溶液液是是中中性性的的，为为一一种种强强氧氧化化剂剂。0.5-1g包包装装，淡淡黄黄色色晶晶体体。具具有有挥挥发发性性和和毒毒性性，在在室室温温下下易易挥挥发发，其其蒸蒸气气对对粘粘膜膜有有刺刺激激作作用用，在在通
10、通风风橱内径相配制。橱内径相配制。n n优点对蛋白质和脂类固定较好。对作为细胞骨架的磷酸脂蛋白的作用好，对核蛋白保护作用很好，因为在有机体内核酸和碳水化合物与蛋白制成复合的形式，因此锇酸几乎和所有的细胞成分结合。分子密度高，产生良好的反差，因此锇酸固定本身也起到生物染色作用。n n缺点不能固定糖元和核酸，对微管固定较差。扩散慢，穿透能力差。具有挥发性和粘膜毒性。不适于进行细胞化学工作。n nB B戊二醛（戊二醛（glutaraldehyde,C5H8O2glutaraldehyde,C5H8O2）n n纯的容易聚合，目前使用25%水溶液进口分装。存放时间久了容易变质，影响固定。n n 优点 (
11、1)对组织穿透力强。(2)能保存某些酶的活性，对糖元、细胞膜、核基质等有较好的作用。(3)而且组织块在溶液中可保存较长的时间，适用于进行超微细胞化学研究。 n nC 甲醛（fomaldehyde）:多用多聚甲醛粉剂配制。其分子小，渗透力强，固定迅速，对酶的活性保存好。 n n2）固定的方法n nA单固定法：对单细胞或固定液易于浸透的组织，一般单独用1-2%四氧化锇固定液固定1-2小时可达到固定的目地。n nB双固定法：戊二醛（2.5%4oC2h）-锇酸（1%4oC2h）。n nC原位固定和灌注固定：将动物麻醉、解剖进行原位固定。灌注固定：通过血液循环将醛类的固定液灌流到所需组织中。神经组织、视
12、网膜、肾脏。n n附附 几种常见固定剂的配制几种常见固定剂的配制 n n固固定定液液的的PHPH值值6.0-8.06.0-8.0，常常用用PHPH值值7.2-7.4,7.2-7.4,对对含含水水较较多多的的组组织织可可用用PHPH值值8.08.0，细细菌菌、病病毒毒可可用用PHPH值值在在7.07.0以下。以下。n n0.0. 2 2mol/Lmol/L磷酸缓冲液的配制磷酸缓冲液的配制n n 磷酸二氢钠（磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2ONaH2PO4.H2O）2.6g2.6gn n 磷酸氢二钠（磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2ONa2HPO4.12H2O）29g29g重蒸水重蒸水加到加到
13、500500mlmln n调调PHPH到到7.47.40.20.2mol/Lmol/L二甲坤酸盐酸缓冲液二甲坤酸盐酸缓冲液二甲坤酸盐酸缓冲液二甲坤酸盐酸缓冲液重蒸水重蒸水重蒸水重蒸水2525mlml二甲坤酸钠（二甲坤酸钠（二甲坤酸钠（二甲坤酸钠（Na(CH3)2AsO2.3H2ONa(CH3)2AsO2.3H2O）2.14g2.14g0.0. 1mol/L1mol/L盐酸盐酸盐酸盐酸88mlml重蒸水重蒸水重蒸水重蒸水加至加至加至加至5050mlmln n调调调调PHPH到到到到7.47.4 B固定液的配制锇酸固定液的配制2%的锇酸固定液的配制：清洗烘干器皿-1G锇酸+50ml双蒸水（棕色瓶）
14、数日可用。0.1mol/L磷酸盐缓冲液或二甲坤酸盐缓冲液配制的1%锇酸固定液。2%的锇酸缓冲液10ml0.2mol/L缓冲液10ml调节PH应为7.3-7.4戊二醛固定液的配制25%戊二醛（ml）0.411.6重蒸水（ml）4.643.40.2ml/L缓冲液（ml）555戊二醛最终浓度12.54n n调节固定液PH值到7.3-7.4n n（3）脱水n n1）清洗:固定后均用和固定液相同的缓冲液冲洗3次，每次15分钟n n2）脱水：常用的脱水剂为乙醇和丙酮。乙醇引起组织中脂类物质抽提较丙酮少，且不会使组织变硬、变脆，故为常用脱水剂，然乙醇不容易和用于包埋剂的环氧树脂相混溶，因此在进入包埋剂之前常
15、用中间剂环氧丙烷置换。脱水程序如下表浓度50%70%90%100%时间10-1510-1510-153次 （ 每 次 10-15）温度4oC4oC转室温室温n n经验：n n脱水剂临时配制。n n浓度梯度上升。n n脱水时间和浓度。n n脱水时的连续性。n n脱水剂的选择。n n（4）浸透：其目的是通过脱水剂稀释包埋剂，最终让包埋剂取代脱水剂，使其渗透到组织中去。脱水和包埋剂的比例2:11:2纯包埋剂时间1-2h2-3h2h温度室温室温37oC温箱n n经验：n n浸透时间。n n浸透温度。n n（5）包埋：n n目目的的:包埋的目的是让包埋剂完全浸透到组织内部，经加温逐渐聚合成坚硬的固体，成
16、为细胞结构的支架，能够承受切片的各种力的作用，有利于切薄片。n n包包埋埋剂剂的的性性质质:粘度适中，有良好的切割性能。能耐受电子束的轰击，高温不易升华、不变形。透明度好。对人无害。包埋剂的种类n n环氧树脂类：目前国内使用较多的环氧树脂有进口环氧树脂类：目前国内使用较多的环氧树脂有进口环氧树脂类：目前国内使用较多的环氧树脂有进口环氧树脂类：目前国内使用较多的环氧树脂有进口的的的的EponEpon812812和国产的和国产的和国产的和国产的618618。n n原理原理原理原理: :环氧树脂具有环氧基和羟基两个主要化学反应基环氧树脂具有环氧基和羟基两个主要化学反应基环氧树脂具有环氧基和羟基两个主
17、要化学反应基环氧树脂具有环氧基和羟基两个主要化学反应基团，环氧基是线型聚合物的末端，易与其它含活性氢团，环氧基是线型聚合物的末端，易与其它含活性氢团，环氧基是线型聚合物的末端，易与其它含活性氢团，环氧基是线型聚合物的末端，易与其它含活性氢原子的化合物如胺类反应，形成首尾相接的长链状聚原子的化合物如胺类反应，形成首尾相接的长链状聚原子的化合物如胺类反应，形成首尾相接的长链状聚原子的化合物如胺类反应，形成首尾相接的长链状聚合物。而单体中的羟基能与酸酐结合，形成分子间的合物。而单体中的羟基能与酸酐结合，形成分子间的合物。而单体中的羟基能与酸酐结合，形成分子间的合物。而单体中的羟基能与酸酐结合，形成分
18、子间的横桥连接。因此，将环氧树脂、胺类和酸酐三者按比横桥连接。因此，将环氧树脂、胺类和酸酐三者按比横桥连接。因此，将环氧树脂、胺类和酸酐三者按比横桥连接。因此，将环氧树脂、胺类和酸酐三者按比例混合，在一定温度条件下，可形成具有三维空间结例混合，在一定温度条件下，可形成具有三维空间结例混合，在一定温度条件下，可形成具有三维空间结例混合，在一定温度条件下，可形成具有三维空间结构的交链状聚合物。构的交链状聚合物。构的交链状聚合物。构的交链状聚合物。n n这种聚合物收缩率小、均匀，组织损伤小，这种聚合物收缩率小、均匀，组织损伤小，耐电子束的轰击。包埋后可保存细胞内的耐电子束的轰击。包埋后可保存细胞内的
19、微细结构。其缺点是粘度较大，操作不便、微细结构。其缺点是粘度较大，操作不便、切片较为困难，而且反差较弱。切片较为困难，而且反差较弱。低粘度包埋剂(Spurr)n n为适应临床诊断电镜的需要，目前低粘为适应临床诊断电镜的需要，目前低粘度包埋剂的应用已日趋广泛。这是一种度包埋剂的应用已日趋广泛。这是一种低粘度的树脂，能较好地渗入组织内部，低粘度的树脂，能较好地渗入组织内部，对组织结构保存好，耐电子束轰击，可对组织结构保存好，耐电子束轰击，可广泛应用于各种生物材料，尤其适宜于广泛应用于各种生物材料，尤其适宜于较致密的组织。较致密的组织。水溶性包埋剂：n n是进行细胞化学研究较理想的包埋剂。n n原理
20、:水溶性包埋剂可以在较低温度的紫外线照射下进行聚合，避免了一般包埋剂必须在高温下聚合而给酶活性带来的破坏，所以是酶活性定位和定量研究十分优良的包埋剂。n n包埋剂:DurcuPan、乙二醇甲基丙烯酸脂(简称GMA)、聚乙二醇、Aquon等n n所加的固化剂，有十二烯基虎铂酸酐（DDSA）和甲基内次甲基四氢苯二甲酸酐（MNA）,增韧剂为邻苯二甲酸二丁酯（ DBP） ,加 速 剂 为 2,4,6,一 三 苯 酚（DMP30）。n n1）环氧树脂的性能和配制：n n618618树脂树脂55mlmln n十二烯基丁二酸酐十二烯基丁二酸酐DSADSA（固化剂）固化剂）55mlmln n苯二甲酸二丁酯苯二
21、甲酸二丁酯DBPDBP（增塑剂）增塑剂）0.30.3mlmln n2,4.62,4.6三苯酚三苯酚称称DMP30DMP30（加速剂）加速剂）0.10.1mlmln n60oC60oC烘箱内加温使粘度下降，用量杯量取所需要的量，一烘箱内加温使粘度下降，用量杯量取所需要的量，一次加入固化剂、增塑剂、加速剂，边加边搅拌，最后充分次加入固化剂、增塑剂、加速剂，边加边搅拌，最后充分搅拌搅拌1010分钟，至分钟，至3737o oC C温箱中使气泡温箱中使气泡逸出。n nEpon812的配制n nA液：Epon81262mln nDDSA(固化剂)100mln nB液：Epon812100mln nMNA(
22、固化剂)89mln nA液和B液分别配制，使用时用不同比例将二者混合后再加1.5%DMP-30(加速剂)即可。A液和B液的比例：冬季2：8。夏季1：9。B液可以增加包埋块的硬度。n n1 1） 包埋的方法包埋的方法包埋的方法包埋的方法n n常规包埋常规包埋常规包埋常规包埋n n将将浸浸透透在在包包埋埋剂剂的的组组织织块块，转转移移到到包包埋埋囊囊中中，使之位于囊的中央，然后加包埋剂。使之位于囊的中央，然后加包埋剂。n n把把写写好好标标本本块块编编号号的的小小纸纸条条卷卷成成环环状状，放放入入囊中，插入包埋剂中。囊中，插入包埋剂中。n n不加盖，不加盖，3737o oC C过夜，这也就是纯包埋
23、剂浸透。过夜，这也就是纯包埋剂浸透。n n次日，升温到次日，升温到6060o oC48C48小时固化。小时固化。n n固化完毕，关温箱，自然冷却。固化完毕，关温箱，自然冷却。n n去掉外壳，取出组织包埋块去掉外壳，取出组织包埋块n n将组织包埋块，存放在干燥器中。将组织包埋块，存放在干燥器中。 n n定向包埋：定向包埋：n n注意事项注意事项n n防潮、干燥。包埋剂要充分混匀。防气泡。包埋后立即清洗器皿。自身保护。干燥器中存放包埋块。n n（6）切片n n1）选择和清洗载网。常用的载网有圆形的铜网，细胞化学和免疫组织化学常用镍网、不锈钢网和银丝网。直径为3mm，目数为200-300n n2 2
24、）支持膜的制备：支持膜的制备：n n福福尔尔莫莫瓦瓦膜膜：常常用用氯氯仿仿配配制制的的 0.2%-1.5%0.2%-1.5%的的聚聚乙乙烯烯醇醇缩缩甲甲醛醛液液（formrarformrar）。注注：制制膜膜时时室室内内的的温温度度小小于于60%60%，否则会出现白点。，否则会出现白点。n n火火棉棉胶胶膜膜：特特点点，火火棉棉胶胶膜膜的的机机械械强强度度比比福福尔尔莫莫瓦瓦膜膜弱弱，但但制制作作容容易易。常常用用1-2%1-2%醋醋酸酸异异戊戊酯酯溶溶液液采采用用漏漏斗斗法法和贴附法制膜。和贴附法制膜。n n帕帕罗罗丁丁支支持持膜膜：目目前前国国外外比比较较常常用用，一一般般配配制制30%3
25、0%左左右的帕罗丁醋酸戊酯溶液制膜，方法同火棉胶同。右的帕罗丁醋酸戊酯溶液制膜，方法同火棉胶同。n n碳碳膜膜：炭炭膜膜的的机机械械程程度度和和稳稳定定性性较较好好，适适用用于于高高分分辨辨率的观察，用真空喷镀仪采用碳升华喷镀法制备。率的观察，用真空喷镀仪采用碳升华喷镀法制备。n n复合膜：有机膜上喷镀复合膜：有机膜上喷镀5-105-10nmnm的碳膜。的碳膜。n n微孔支持膜：高分辨率观察使用。微孔支持膜：高分辨率观察使用。n n2）包埋块修整：修成四面锥体（45oC角）n n5）超薄切片机的构造n n6）切片操作n n7）切片厚度:n n灰色40-50nmn n银灰色50-70nmn n金
26、黄色70-90nmn n紫色90nm以上n n(7)(7)染色染色n n1 1） 常用的电子染色剂常用的电子染色剂n n醋酸铀醋酸铀醋酸铀醋酸铀( (UOUO2 2(CH(CH3 3COO)COO)2 2.2H.2H2 2OO：n n特特性性：具具有有放放射射性性和和毒毒性性，对对光光不不稳稳定定，储储存存、染色最好闭光，变混则失效。染色最好闭光，变混则失效。n n广广泛泛使使用用，能能产产生生较较高高的的反反差差。主主要要是是提提高高核核酸酸、核核蛋蛋白白和和结结缔缔组组织织纤纤维维成成分分的的反反差差；对对糖糖分分、分分泌泌颗颗粒粒、溶溶酶酶体体等等也也能能染染色色，但但对对膜膜的的结结构
27、构染染色色较差。较差。n n常常用用浓浓度度：50%-70%50%-70%的的乙乙醇醇或或丙丙酮酮配配制制的的2%-2%-3%3%的溶液。的溶液。n n染的时间：组织块染色时间为染的时间：组织块染色时间为1-21-2h h或过夜。片染或过夜。片染3030minmin即可。即可。 n n枸橼酸铅（枸橼酸铅（枸橼酸铅（枸橼酸铅（leadacetateleadacetate）：）：）：）：n n特特特特点点点点：毒毒毒毒性性性性大大大大。与与与与空空空空气气气气中中中中的的的的二二二二氧氧氧氧化化化化碳碳碳碳结结结结合合合合形形形形成成成成白色的碳酸铅沉淀。白色的碳酸铅沉淀。白色的碳酸铅沉淀。白色的
28、碳酸铅沉淀。高高高高PHPH（11-1211-12）染色效果好。染色效果好。染色效果好。染色效果好。n n也也也也是是是是目目目目前前前前最最最最广广广广泛泛泛泛使使使使用用用用的的的的染染染染色色色色液液液液。它它它它具具具具有有有有很很很很高高高高的的的的电电电电子子子子密密密密度度度度，对对对对细细细细胞胞胞胞超超超超微微微微结结结结构构构构均均均均有有有有广广广广泛泛泛泛的的的的亲亲亲亲和和和和性性性性，能能能能提提提提高高高高细胞膜系统及酯类的反差。细胞膜系统及酯类的反差。细胞膜系统及酯类的反差。细胞膜系统及酯类的反差。n n枸橼酸铅（枸橼酸铅（枸橼酸铅（枸橼酸铅（leadcitra
29、teleadcitrate）溶液的配制溶液的配制溶液的配制溶液的配制n n硝酸铅硝酸铅硝酸铅硝酸铅Pb(NOPb(NO3 3)2)21.33g1.33gn n枸橼酸钠枸橼酸钠枸橼酸钠枸橼酸钠NaNa3 3(C6H(C6H6 6OO7 7).2H).2H2 2OO1.76g1.76gn n双蒸水双蒸水双蒸水双蒸水3030mlmln n混混混混合合合合后后后后振振振振荡荡荡荡3030minmin呈呈呈呈乳乳乳乳白白白白色色色色，加加加加1.01.0mol/Lmol/L新新新新鲜鲜鲜鲜配配配配制的制的制的制的NaOH8mlNaOH8mln n双蒸水双蒸水双蒸水双蒸水加至加至加至加至5050mlml调
30、调调调PHPH到到到到1212n n2 2）染色方法染色方法n nA A、手工染色手工染色n n单单染染色色：用用一一种种染染色色液液；一一般般材材料料铅铅染染好好，免疫组化铀染好。免疫组化铀染好。n n双双染染色色：先先用用醋醋酸酸铀铀染染色色，再再用用柠柠檬檬酸酸铅铅染染色。色。n n块块染染色色：锇锇酸酸固固定定后后，脱脱水水前前用用50%-70%50%-70%的的乙乙醇醇醋醋酸酸铀铀染染液液染染色色20-3020-30minmin，也也可可在在脱脱水水过过程程中中放放入入含含1%-2%1%-2%的的醋醋酸酸双双氧氧铀铀的的70%70%乙乙醇醇染染液液染染2-102-10h h（4 4o oC C冰冰箱箱）这这样样可可以以省省去去切切片片后后的的铀铀染染过过程。程。n nB B自自动动染染色色：自自动动染染色色使使用用事事先先制制好好的的，已已商商品品化化的的醋醋酸酸铀铀和和柠柠檬檬酸酸铅铅，在在自自动动染染色色仪仪内内进进行行电电镜镜常规染色。常规染色。
