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1、血液分析仪及其临床运用血液分析仪及其临床运用血血液液分分析析仪hematologyanalyzer,HA：临床血液普通床血液普通检查最常用最常用仪器。器。50年年代代，美美国国库尔特特W.H.Coulter发明明电子血子血细胞胞计数数仪并并恳求求专利。利。血液分析仪优势：血液分析仪优势：检测工程多检测工程多速度快速度快精度高精度高易操作易操作一、一、检测原理原理检测功能：功能：细胞胞计数功能数功能细胞分胞分类功能功能检测原理分原理分为2类：一一电阻抗法阻抗法1.电 阻阻 抗抗 原原 理理 (principle of electricalimpedance)， 又又 称称 库 尔 特特 原原 理
2、理 CoulterprincipleCouler计数原理计数原理孔电流真空内电极外电极-+血细胞悬液标本杯2.计数部件构造数部件构造组成成等渗等渗电解解质溶液溶液细胞胞悬液液小小孔孔管管传感感器器transducer宝宝石石孔孔直径直径100m，厚度，厚度约75m脉冲数量和大小反映脉冲数量和大小反映细胞：胞：数量数量体体积大小大小3.白白细胞胞计数和分数和分类计数原理数原理仪器器将将体体积为35450fL的的血血细胞胞，分分为256个通道个通道channel。每个通道：每个通道：1.64fl根根据据细胞胞大大小小，分分别置置于于不不同同的的通通道道中中，显 示示 血血 细 胞胞 体体 积 分分
3、 布布 直直 方方 图 Histogram。经经溶溶血血素素处处置置脱脱水水后后，血血细细胞胞体体积积大大小小发发生了变化！生了变化！第第一一群群3590fl小小细细胞胞区区：淋淋巴巴细细胞胞体积最小：普通在体积最小：普通在3590fl。第第二二群群90160fl是是单单个个核核细细胞胞区区，中间细胞：中间细胞：单单核核细细胞胞、嗜嗜酸酸性性粒粒细细胞胞、嗜嗜碱碱性性粒粒细细胞胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等原始、幼稚细胞、异常细胞等第第三三群群160fl以以上上大大细细胞胞区区：嗜嗜中中性性粒粒细胞体积最大：普通在细胞体积最大：普通在-350fl三分群血液分析仪正常白细胞分类方式图直方三分群血
4、液分析仪正常白细胞分类方式图直方图图3590160300400450(fl)%仪器器组成：成：信号信号发生器生器放大器放大器阈值调理理甄甄别器器整形器整形器计数系数系统2.电阻抗法红细胞检测原理电阻抗法红细胞检测原理1红细胞计数和血细胞比容测定红细胞计数和血细胞比容测定与白细胞计数类似。与白细胞计数类似。(%)100200300400(fl)(2)(2)血血红红蛋蛋白白测测定定：血血红红蛋蛋白白与与溶溶血血剂剂中中的的特特定定试试剂剂结结合合构构成成一一种种血血红红蛋蛋白白衍衍生生物物，在在530530550nm550nm下进展比色。下进展比色。 ICSHICSH引荐用氰化高铁法引荐用氰化高铁
5、法540nm540nm比色。比色。非氰化溶血剂，如非氰化溶血剂，如SDS-HbSDS-Hb。 (3) (3)红细胞其他参数检测红细胞其他参数检测 3.3.电阻抗法血小板检测原理电阻抗法血小板检测原理 血小板计数血小板计数platelet, PLTplatelet, PLT：随红细胞在一个系统中进展检测。随红细胞在一个系统中进展检测。直方图在直方图在2 228fl28fl不同仪器不一。不同仪器不一。血血小小板板平平均均体体积积mean mean platelet platelet volume, volume, MPVMPV。 10 20 30(fl)%二光散射法血液分析仪检测原理二光散射法血液
6、分析仪检测原理 组合运用组合运用电学电学光学光学细胞化学等细胞化学等细胞流电学和光学检测图细胞流电学和光学检测图AcT 5diffAcT 5diff光散射法白细胞检测原理类别光散射法白细胞检测原理类别1 1激光与细胞化学法激光与细胞化学法 1 1过氧化物酶检测通道：过氧化物酶检测通道：嗜嗜酸酸性性粒粒细细胞胞、嗜嗜中中性性粒粒细细胞胞过过氧氧化化物物酶酶活活性性比比单核细胞强单核细胞强淋巴细胞、嗜碱粒细胞无过氧化物酶活性。淋巴细胞、嗜碱粒细胞无过氧化物酶活性。散散射射图图定定位位：X X轴轴为为吸吸光光率率酶酶反反响响强强度度、Y Y轴轴为光散射细胞大小显示检测结果。为光散射细胞大小显示检测结
7、果。 2 2嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞/ /分叶核检测通道。分叶核检测通道。 2 2 容容 量量 、 电 导 、 光光 散散 射射 volumevolume，conductivityconductivity， scatter, VCS scatter, VCS法：法：血血细胞胞未未经任任何何处置置，坚持持与与体体内内完完全全一一样形形状状下下进展。展。VCSVCS法法检测原理原理细胞体胞体积技技术丈量丈量细胞大小胞大小电导性技性技术丈量丈量细胞内部构造胞内部构造光光散散射射scatter, scatter, S S技技术丈丈量量细胞胞形形状状、细胞核和胞核和细胞胞颗粒。粒。 体积体积 电导电导
8、光散射光散射VCSVCS可显示可显示3 3种细胞散点图种细胞散点图DF1DF1体积值和散射光值体积值和散射光值DF2DF2体积值和电导值体积值和电导值DF3DF3体积值和电导值：只显示体积值和电导值：只显示basophil basophil 细胞流电学和光学散点图细胞流电学和光学散点图AcT 5diffAcT 5diffVCSVCS血液分析仪正常白细胞散点图实例血液分析仪正常白细胞散点图实例3 3电阻阻抗抗与与射射频法法能能透透入入细胞胞内内，丈丈量量核核的大小及的大小及颗粒的多少：粒的多少：嗜酸性粒嗜酸性粒细胞胞检测系系统嗜碱性粒嗜碱性粒细胞胞检测系系统 5 5种种白白细胞胞分分类检测系系统
9、：直直流流电direct direct currentcurrent，DCDC为横横坐坐标，以以射射频radio radio frequency frequency ，RFRF为纵坐坐标。幼稚幼稚细胞胞检测系系统：幼稚幼稚细胞膜脂胞膜脂质较成熟成熟细胞少。胞少。参参与与硫硫化化氨氨基基酸酸，与与幼幼稚稚细胞胞的的结合合量量多多于于较成成熟的熟的细胞胞幼幼稚稚细胞胞对溶溶血血剂有有抵抵抗抗作作用用，从从而而提提供供幼幼稚稚髓髓细胞胞信信息息immature immature myeloid myeloid informationinformation，IMIIMI。 4 4 多多 角角 度度 偏
10、偏 振振 光光 散散 射射 multi-angle multi-angle polarized polarized scatter scatter separation separation of of white white cell, MAPSScell, MAPSS法法00：前前角角光光散散射射1133，可可粗粗略略测定定细胞大小。胞大小。1010：狭狭角角光光散散射射771111，可可测定定细胞内部构造相胞内部构造相对特征。特征。9090：垂垂直直光光散散射射7070110110，测定定细胞核分叶情况。胞核分叶情况。9090：消消偏偏振振光光散散射射7070110110，区区分分嗜酸性
11、粒嗜酸性粒细胞与其他胞与其他细胞。胞。 2.2.光散射法光散射法红细胞胞检测原理原理 低角度低角度(2(23)3)：丈量：丈量红细胞体胞体积高高角角度度(5(515)15)：测定定红细胞胞血血红蛋蛋白白浓度度得得到到MCVMCV、MCHMCH、MCHCMCHC测定定值，计算算出出RDWRDW、红细胞胞血血红蛋蛋白白分分布布宽度度red red blood blood cell cell hemoglobin hemoglobin distribution distribution widthwidth，HDWHDW3.3.光散射法血小板检测原理光散射法血小板检测原理 MieMie实实际际Mie
12、 Mie theory theory of of light light scatter scatter for for homogeneous homogeneous spheresspheres：当当球球形形化化的血小板一个一个经过激光照射区时：的血小板一个一个经过激光照射区时：高高角角度度551515：检测细胞胞折折射射指指数数reactive indexreactive index，RIRI；低角度低角度2233：丈量：丈量细胞大小。胞大小。大大血血小小板板与与各各种种碎碎片片假假设体体积类似似，但但由由于内容物不同，于内容物不同，RIRI相差相差较大，故能大，故能鉴别。 5.5.网网
13、织织红红细细胞胞计计数数reticulocytereticulocyte，RETRET原理原理 2020世世纪纪9090年年代代起起，有有多多种种检检测测原原理理类类似似网网织红细胞分析仪。织红细胞分析仪。1 1血液分析仪检测原理：血液分析仪检测原理：用用新新亚亚甲甲蓝蓝染染色色使使红红细细胞胞RNARNA着着色色或或用用荧荧光光染料对染料对RNARNA进展染色。进展染色。检测参数：检测参数：网织红细胞绝对值网织红细胞绝对值RET#RET#网织红细胞百分数网织红细胞百分数RET%RET%网织红细胞平均体积网织红细胞平均体积MCVrMCVr网织红细胞成熟指数网织红细胞成熟指数RMIRMI网网 织
14、织 红红 细细 胞胞 分分 布布 宽宽 度度 reticulocyte reticulocyte distribution width, RDWrdistribution width, RDWr 新亚甲蓝网织红细胞染色新亚甲蓝网织红细胞染色光散射法网织红细胞检测散点图光散射法网织红细胞检测散点图 二、检测参数二、检测参数一检测参数一检测参数 中高档仪器检测参数：中高档仪器检测参数：2020项左右或超越项左右或超越4040多项多项二检测结果及表达方式二检测结果及表达方式表表 常见血液分析报告用语及英文缩写词常见血液分析报告用语及英文缩写词三、三、细胞直方胞直方图横坐横坐标为血血细胞体胞体积大小大
15、小纵坐坐标为不同体不同体积细胞的相胞的相对频率。率。一白一白细胞直方胞直方图正常白正常白细胞直方胞直方图出出现异异常常直直方方图时，常常伴伴警警报信信号号，如如“H“Hhighhigh，高或，高或“L“Llowlow，低。，低。 二二红细胞直方胞直方图正常正常红细胞分布：胞分布：5050200fl 200fl 峰左移峰左移峰右移峰右移双峰双峰三血小板直方三血小板直方图正常血小板直方正常血小板直方图呈左偏呈左偏态分布：分布： 2 230fl30fl分布，主要在分布，主要在2 215fl15fl。 四、方法学评价四、方法学评价 一仪器类型和特点一仪器类型和特点 1. 1.单纯电阻抗法三分群血液分析
16、仪特点单纯电阻抗法三分群血液分析仪特点 1 1检测参数：红细胞、白细胞、血小板检测参数：红细胞、白细胞、血小板 2 2白细胞分类白细胞分类 3 3直方图直方图 4 4报警报警(flag)(flag)功能：文字、图标功能：文字、图标 2. 2. 综综合合光光学学电电学学技技术术血血液液分分析析仪仪特特点点 1 1检测参数：检测参数：红细胞红细胞白细胞白细胞血小板血小板网织红细胞网织红细胞幼稚细胞幼稚细胞2 2白细胞分类白细胞分类五分类，准确性较三分群血液分析仪高。五分类，准确性较三分群血液分析仪高。 3 3直方图和散点图：直方图和散点图：红细胞直方图红细胞直方图白细胞直方图白细胞直方图血小板直方
17、图血小板直方图白细胞分类散点图。白细胞分类散点图。4 4报警功能：文字、图标报警功能：文字、图标3.3.自自动化程度化程度 操作操作过程：半自程：半自动、全自、全自动储存信息：存信息：质量控制：量控制：质量控制量控制软件、件、显示示质控控图形形至至今今，血血液液分分析析仪还只只能能用用作作安安康康人人血血液液筛检之用，尚不能完全替代之用，尚不能完全替代显微微镜功能。功能。( (二二) )仪器性能器性能评价价ICSHICSH 1. 1. 可比性可比性 (comparability) (comparability) 指指血血液液分分析析仪测定定结果果，与与常常规方方法法所所测结果果相相比比较。显微
18、微镜法法是是血血细胞胞检验根根底。底。P P0.050.05有可比性。有可比性。P P0.050.05无可比性无可比性结论：计数数细胞胞越越多多、选用用吸吸管管、计数数盘越多，越多，计数数结果接近真果接近真值。实践任践任务中，中，镜检法很法很难到达此要求。到达此要求。经严厉校正的血液分析仪：经严厉校正的血液分析仪：计数细胞多计数细胞多操作步骤规范化操作步骤规范化准确性高准确性高 CV CV可可2%2%准确性较高准确性较高2. 2. 准准确确性性 (accuracy) (accuracy) 准准确确性性是是指指测定定结果与真果与真值一致性的程度。一致性的程度。3. 3. 总反反复复性性( ( o
19、verall overall precision precision ) ) 指指同一份同一份标本多次丈量的本多次丈量的结果接近的程度。果接近的程度。反复反复测定定1 1份抗凝静脉血份抗凝静脉血1010次，次，计算算CVCV值。4.4.精细度精细度 (precision) (precision) 批批内内within- within- batchbatch精精细细度度：同同一一批批样样本反复测定结果的评价。本反复测定结果的评价。批批间间(between-batch)(between-batch)精精细细度度：对对两两批批或或两两批以上样本反复测定结果的评价。批以上样本反复测定结果的评价。 携带
20、污染率携带污染率(carry over)(carry over)：延延续续测测定定1 1份份高高值值样样本本3 3次次i1i1、i2i2、i3i3再测定再测定1 1份低值样本份低值样本3 3次次j1j1、j2j2、j3j3 携携带带污污染染率率% %j1-j3j1-j3/ /i3-J3i3-J3 准确度和准确度准确度和准确度5. 5. 线性范围线性范围 指测定值与稀释倍数能否呈比例关系。指测定值与稀释倍数能否呈比例关系。线性关系范围越宽越理想。线性关系范围越宽越理想。P P 0.01, 0.01, 非线性相关。非线性相关。 P P 0.05 0.05，未偏离线性。，未偏离线性。 稀释效果稀释效
21、果MCHMCVMCHCRBC三影响直方图变化的要素三影响直方图变化的要素 1. 1.仪器要素仪器要素血细胞体积大小血细胞体积大小仪器阈值仪器阈值孔电压孔电压 2. 2.试剂要素试剂要素稀释液：导电率、浸透压、离子强度稀释液：导电率、浸透压、离子强度溶血剂：种类、浓度、用量和溶血时间溶血剂：种类、浓度、用量和溶血时间 3. 3.操作人员技艺：操作人员技艺：高素质高素质技术培训技术培训上岗前要仔细阅读随机手册上岗前要仔细阅读随机手册掌握掌握ICSHICSH引荐的仪器性能评价方法引荐的仪器性能评价方法全程质量控制全程质量控制 4.4.循证医学对血液分析仪运用指点循证医学对血液分析仪运用指点 1 1
22、循循 证证 医医 学学 evidence-based evidence-based medicine, medicine, EBMEBM：谨谨慎慎、准准确确、合合理理而而明智地对每个患者作出临床决策。明智地对每个患者作出临床决策。 循循 证证 检检 验验 医医 学学 evidence evidence - - based based laboratory medicine, EBLMlaboratory medicine, EBLM。2 2为临床提供真实可靠实验诊断证据。为临床提供真实可靠实验诊断证据。3 3用循征检验医学思想客观评价检验。用循征检验医学思想客观评价检验。 五、临床运用五、临床
23、运用一检测参数临床意义一检测参数临床意义 1. 1.红细胞参数红细胞参数 1 1MCVMCV和和RDWRDW：可可用用于于缺缺铁铁性性贫贫血血的的早早期期诊断和鉴别诊断。诊断和鉴别诊断。2 2红细胞血红蛋白分布宽度红细胞血红蛋白分布宽度2.2.血小板参数血小板参数 1 1血小板血小板计数数 2 2血血小小板板平平均均体体积mean mean platelet platelet volume, MPVvolume, MPV: : 鉴别血小板减低的病因：血小板减低的病因：MPVMPV增增高高：外外周周血血血血小小板板破破坏坏过多多致致血血小小板板减低减低MPVMPV减低：减低：骨髓病骨髓病变引起血
24、小板减低。引起血小板减低。评价骨髓造血功能恢复的情况：价骨髓造血功能恢复的情况： 部分炎症：骨髓造血未受抑制，部分炎症：骨髓造血未受抑制，MPVMPV正常。正常。 败血症：骨髓造血功能抑制，血症：骨髓造血功能抑制，MPVMPV减低。减低。 白血病白血病缓解：解：MPVMPV增高。增高。 骨髓造血衰竭：骨髓造血衰竭：MPVMPV、PLTPLT继续减低。减低。 MPV MPV越小，骨髓受抑制越越小，骨髓受抑制越严重。重。 骨骨髓髓功功能能恢恢复复时，首首先先MPVMPV上上升升，然然后后PLTPLT逐逐渐上上升。升。MPVMPV与与血血小小板板功功能能明明显相相关关：有有出出血血倾向向者者MPVM
25、PV显著低于无出血著低于无出血倾向者。向者。二红细胞直方图在贫血中的运用二红细胞直方图在贫血中的运用 1.1.小细胞性贫血小细胞性贫血1 1RDWRDW正常：轻型地中海贫血正常：轻型地中海贫血 2 2RDWRDW轻度增高：缺铁性贫血轻度增高：缺铁性贫血 3 3RDWRDW明明显显增增高高，两两个个细细胞胞峰峰，小小细细胞胞峰峰明明显显左左移移：铁铁粒粒幼幼细细胞胞性性贫贫血血、缺缺铁性贫血经治疗有效铁性贫血经治疗有效2.2.大细胞性贫血大细胞性贫血(1) RDW(1) RDW正常，细胞主峰明显右移：正常，细胞主峰明显右移：溶血性贫血溶血性贫血白血病前期白血病前期再生妨碍性贫血再生妨碍性贫血巨幼
26、细胞性贫血巨幼细胞性贫血(2) (2) RDWRDW轻轻度度增增高高，红红细细胞胞峰峰明明显显右右移移，基基底底增增宽：宽：叶酸、维生素叶酸、维生素B12B12缺乏性巨幼细胞性贫血。缺乏性巨幼细胞性贫血。(3)RDW(3)RDW明明显显增增高高，红红细细胞胞峰峰明明显显右右移移，出出现现两两个个峰：峰： 巨幼细胞贫血，叶酸、维生素巨幼细胞贫血，叶酸、维生素B12B12治疗初。治疗初。 3.3.正正细胞性胞性贫血血 1 1RDWRDW正常：正常：慢性病慢性病急性失血急性失血骨髓骨髓纤维化化骨髓骨髓发育不良育不良(2) RDW(2) RDW轻度增高：度增高：血血红蛋白异常蛋白异常骨髓骨髓纤维化化3
27、 3 RDW RDW明明显增高：增高： 早期或混合性早期或混合性营养不良养不良 三血小板直方三血小板直方图临床运用床运用 1. 1. 红细胞碎片胞碎片 可干可干扰血小板直方血小板直方图2. 2. 血小板聚集血小板聚集 直方直方图峰左峰左侧起点起点较高高MCVMCV和和RDWRDW正常，可排除小正常，可排除小红细胞干胞干扰3. 3. 小小红细胞胞干干扰 峰峰右右侧离离横横坐坐标较高高，呈脱尾状。呈脱尾状。4. 4. 小血小板小血小板 峰左移，峰左移，MPVMPV偏小。偏小。血涂片可血涂片可见较多小血小板。多小血小板。5. MPV 5. MPV 与与PLTPLT呈非呈非线性性负相关。相关。 四白四
28、白细胞直方胞直方图临床运用床运用直直方方图只只能能提提示示白白细胞胞比比例例变化化或或能能够出出现异异常常细胞胞，故故要要求求用用显微微镜复复查血血涂涂片。片。 1. 1.中性粒中性粒细胞增高胞增高( (淋巴淋巴细胞相胞相对减低减低) ) 嗜中性粒嗜中性粒细胞增多胞增多淋巴淋巴细胞减低症胞减低症 四白细胞直方图临床运用直方图只能提示白细胞比例变化或能够出现异常细胞，故要求用显微镜复查血涂片。1.中性粒细胞增高(淋巴细胞相对减低)嗜中性粒细胞增多淋巴细胞减低症2.中性粒细胞减低淋巴细胞比例增高婴幼儿再生妨碍性贫血嗜中性粒细胞缺乏症淋巴细胞增多症传染性单核细胞增多症慢性淋巴细胞白血病3.3.嗜酸性
29、粒细胞或单核细胞嗜酸性粒细胞或单核细胞 淋巴细胞与单核细胞之间区域异常。淋巴细胞与单核细胞之间区域异常。能能够够存存在在：异异型型淋淋巴巴细细胞胞、浆浆细细胞胞，原原始始细细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞等。胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞等。 4.4.急急性性白白血血病病 白白血血病病细细胞胞在在某某一一区区域域出出高高大细胞峰，同时有报警。大细胞峰，同时有报警。5.5.慢慢性性白白血血病病 在在单单个个核核细细胞胞区区和和嗜嗜中中性性粒粒细胞区左侧范围有一高大的细胞峰。细胞区左侧范围有一高大的细胞峰。 6.6.有核细胞干扰有核细胞干扰 未溶解未溶解有核红细胞有核红细胞宏大血小板宏大血小板乳糜
30、颗粒乳糜颗粒五网五网织红细胞参数胞参数临床运用床运用 1 1 骨骨 髓髓 移移 植植 bone bone marrow marrow transplant, transplant, BNTBNT：RETRET是是独独立立监测骨髓造血恢复的参数骨髓造血恢复的参数HFRHFR变化化比比RETRET总数数变化化更更有有重重要要意意义。 2 2贫血血：HFRHFR、MFRMFR和和LFRLFR是是反反映映造造血血功功能能新新参参数数。贫血血鉴别诊断断的的初初筛目的。目的。3 3放放射射疗法法和和化化学学疗法法：HFRHFR、MFRMFR和和LFRLFR是是骨骨髓髓抑抑制制或或恢恢复复造造血血较敏敏感感的目的。的目的。4 4网网织红细胞成熟指数胞成熟指数RMI=(MFRRMI=(MFRHFR)/ LFR100HFR)/ LFR100RMIRMI减低提示骨髓衰竭和造血无效。减低提示骨髓衰竭和造血无效。
