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1、基因工程制药基因工程制药抗体制药抗体制药动物细胞制药动物细胞制药植物细胞制药植物细胞制药酶工程制药酶工程制药现代生物技术改造传统制药工业现代生物技术改造传统制药工业生物技术制药生物技术制药1生物技术制药采用现代生物技术采用现代生物技术, ,借助某些微生物、植物、动借助某些微生物、植物、动物生产医药品，叫物生产医药品，叫生物技术制药生物技术制药。 生物技术制药概念：生物技术制药概念：2生物技术制药现代生物技术的基础学科和分支现代生物技术的基础学科和分支分子生物学分子生物学生物技术疫苗生物技术疫苗生物化学生物化学 遗传学遗传学农业生物技术农业生物技术细胞生物学细胞生物学化学工程化学工程医药生物技术
2、生物技术疫苗生物技术诊断农业生物技术家畜生物技术海洋生物技术现代生物技术现代生物技术3生物技术制药生物制药的特点生物制药的特点专一性专一性无残留性无残留性有预防性有预防性少依赖性少依赖性4生物技术制药一、药物的来源化学合成化学合成从动植物体中分离从动植物体中分离微生物发酵微生物发酵5生物技术制药从动植物中分离6生物技术制药猪苓多糖提取为例7生物技术制药二、生物技术DNA诊断指对患者某一特定基因或其转录产物进行检指对患者某一特定基因或其转录产物进行检测，获取突变基因，从而对疾病进行诊断。测，获取突变基因，从而对疾病进行诊断。称基因诊断、称基因诊断、DNA探针技术。探针技术。类型：酶谱分析法、探针
3、杂交分析法、类型：酶谱分析法、探针杂交分析法、PCR等方法。等方法。应用：遗传病应用：遗传病（染色体病、单基因遗传病、多基因遗传病、线粒体遗（染色体病、单基因遗传病、多基因遗传病、线粒体遗传病、体细胞遗传病）传病、体细胞遗传病）；癌症监测；传染性疾病诊断。；癌症监测；传染性疾病诊断。8生物技术制药二、生物技术干细胞技术干细胞干细胞：指具有自我更新、无限增殖扩容及：指具有自我更新、无限增殖扩容及多向分化潜能的细胞。多向分化潜能的细胞。按其来源分按其来源分：胚胎干细胞、组织干细胞：胚胎干细胞、组织干细胞应用：应用：治疗性克隆：利用病人体细胞克隆为治疗性克隆：利用病人体细胞克隆为干细胞，其干细胞，其
4、DNA编码和基因表型均与病人完编码和基因表型均与病人完全一致，避免免疫排斥反应。全一致，避免免疫排斥反应。9生物技术制药三、生物技术药物的分类生物技术药物生物技术药物可粗分为可粗分为三大类：三大类：1、重组蛋白质药物、重组蛋白质药物2、治疗性抗体药物、治疗性抗体药物3、核酸药物、核酸药物10生物技术制药重组重组DNA技术技术生产的蛋白。生产的蛋白。1、重组蛋白质药物发现具有药物作用特发现具有药物作用特性和活性的目的蛋白性和活性的目的蛋白分离或合成相关基因分离或合成相关基因该基因插入合适的载该基因插入合适的载体中（质粒、病毒等）体中（质粒、病毒等）转入宿主细胞转入宿主细胞构建能表达产生目构建能表
5、达产生目的蛋白的菌种库或的蛋白的菌种库或细胞库细胞库生物反应器或生物反应器或发酵罐或发酵罐或细胞培养制造目的蛋白细胞培养制造目的蛋白11生物技术制药目前经批准的重组蛋白类药物，按照目前经批准的重组蛋白类药物，按照结构结构可分为三类：可分为三类：（1）与人完全相同的多肽和蛋白质）与人完全相同的多肽和蛋白质（2）与人密切相关但不同的多肽和蛋白质，在氨基酸序）与人密切相关但不同的多肽和蛋白质，在氨基酸序列上或翻译后修饰上的差异列上或翻译后修饰上的差异（3）与人相关较远或无关的多肽和蛋白质，如具有调节）与人相关较远或无关的多肽和蛋白质，如具有调节活性，但和已知的人多肽和蛋白质没有同源性的多肽和蛋活性，
6、但和已知的人多肽和蛋白质没有同源性的多肽和蛋白质、双功能的融合蛋白、经蛋白质工程改造和模拟的活白质、双功能的融合蛋白、经蛋白质工程改造和模拟的活性蛋白。性蛋白。1、重组蛋白质药物12生物技术制药2、治疗性抗体药物B淋巴细胞淋巴细胞抗原表位抗原表位单克隆抗体单克隆抗体鼠的脾细胞与鼠的骨髓瘤细胞融合。人鼠的脾细胞与鼠的骨髓瘤细胞融合。人源或人源化单克隆抗体可以解决鼠源性单克隆抗体的源或人源化单克隆抗体可以解决鼠源性单克隆抗体的免疫原性。即利用抗体工程对抗体进行改进从而得到免疫原性。即利用抗体工程对抗体进行改进从而得到具有一定用途，而对人体产生剧烈反应的抗体。具有一定用途，而对人体产生剧烈反应的抗体
7、。采用采用PCR技术、噬菌体表面展示技术和大肠杆菌表达技术、噬菌体表面展示技术和大肠杆菌表达技术构建人抗体库，从中筛选人源性抗体。技术构建人抗体库，从中筛选人源性抗体。13生物技术制药3、核酸药物寡核苷酸药物是具有专一顺序的寡核苷酸，用于阻断有害寡核苷酸药物是具有专一顺序的寡核苷酸，用于阻断有害基因的表达。其基因的表达。其特点特点是有高的特异性，其降解产物对人体是有高的特异性，其降解产物对人体无害。无害。核酸药物可分为核酸药物可分为反义核酸反义核酸、核酶核酶、脱氧核酶脱氧核酶、抗基因寡核抗基因寡核苷酸苷酸和和裸裸DNA疫苗与基因药物疫苗与基因药物。14生物技术制药反义核酸反义核酸为与为与mRN
8、A的一段顺序互补的序列，能阻断的一段顺序互补的序列，能阻断mRNA的翻译；它通过与的翻译；它通过与mRNA配对形成杂交双链，经配对形成杂交双链，经RNase H水解水解DNA/RNA杂交双链中的杂交双链中的RNA链，从而阻断链，从而阻断基因的表达。基因的表达。核酶核酶是一种具有催化作用的是一种具有催化作用的RNA，通过碱基配对与靶，通过碱基配对与靶RNA相互识别、结合并水解催化靶相互识别、结合并水解催化靶RNA从而阻断基因的从而阻断基因的表达。表达。3、核酸药物15生物技术制药脱氧核酶脱氧核酶是具有酶活性的是具有酶活性的DNA分子，它的酶活性可特异切分子，它的酶活性可特异切割割RNA，从而抑制
9、基因的表达。，从而抑制基因的表达。抗基因寡核苷酸抗基因寡核苷酸是将它嵌入双链是将它嵌入双链DNA的大沟中形成的大沟中形成DNA三股螺旋，抑制三股螺旋，抑制DNA结合蛋白（如转录活化因子）和结合蛋白（如转录活化因子）和RNA聚合酶的结合，从而抑制基因的转录。聚合酶的结合，从而抑制基因的转录。核酸药物中另一类为核酸药物中另一类为裸裸DNA基因疫苗与基因药物基因疫苗与基因药物，它们是，它们是将具有预防和治疗疾病的功能基因与真核表达载体重组，将具有预防和治疗疾病的功能基因与真核表达载体重组，将此重组将此重组DNA导入人体细胞，使其表达活性的多肽或蛋白导入人体细胞，使其表达活性的多肽或蛋白质，产生免疫或
10、治疗作用。质，产生免疫或治疗作用。3、核酸药物16生物技术制药三、生物技术药物的分类生物技术药物生物技术药物可细分为可细分为四大类：四大类：酶类、激素和多肽类、疫苗、单抗。酶类、激素和多肽类、疫苗、单抗。17生物技术制药生物制药的类型生物制药的类型18生物技术制药生物制药的类型生物制药的类型19生物技术制药生物制药的类型生物制药的类型20生物技术制药生物制药的类型生物制药的类型21生物技术制药生物制药的类型生物制药的类型疫苗疫苗基因工程疫苗、核酸疫苗基因工程疫苗、核酸疫苗基因工程疫苗：基因重组疫苗、基因重组亚单位基因工程疫苗：基因重组疫苗、基因重组亚单位疫苗、重组牛痘病毒多价活疫苗、基因修饰减
11、毒疫苗、重组牛痘病毒多价活疫苗、基因修饰减毒灭活疫苗。灭活疫苗。第二代疫苗第二代疫苗核酸疫苗核酸疫苗：DNA疫苗疫苗和和RNA疫苗。疫苗。第三代疫第三代疫苗苗单抗：利用单抗：利用细胞融合技术细胞融合技术获得。获得。22生物技术制药生物技术药物与其它药物之间的区别，主要由生生物技术药物与其它药物之间的区别，主要由生物技术药物的以下物技术药物的以下特点特点所决定的：所决定的：（1）生物技术药物的）生物技术药物的生产复杂，技术要求高，要有严格生产复杂，技术要求高，要有严格的监控措施的监控措施。（2）生物技术药物）生物技术药物稳定性易受外界环境条件影响。稳定性易受外界环境条件影响。 （3）生物技术药物
12、存在着）生物技术药物存在着种属特异性种属特异性。（4）生物技术药物）生物技术药物副作用较小，毒性较低，安全性高。副作用较小，毒性较低，安全性高。（5）生物技术药物，很多在体内的）生物技术药物，很多在体内的半衰期短，半衰期短，迅速降解，迅速降解，并在体内并在体内降解的部位广泛，药效反应快降解的部位广泛，药效反应快。四、生物技术药物的特点及其新药评价程序23生物技术制药生物技术来源药物的生物技术来源药物的新药评价新药评价按其特点可分为按其特点可分为5个阶段，个阶段，即：（即：（1）实验室研制与验证；（）实验室研制与验证；（2）中试及质量验证；）中试及质量验证；（3）临床前药效、药代、药理与毒理验证
13、；（）临床前药效、药代、药理与毒理验证；（4）临床试）临床试验；（验；（5）生产）生产当完成临床前试验时向国家药品监督管理局注册司提出申当完成临床前试验时向国家药品监督管理局注册司提出申请临床实验的资料，当请临床实验的资料，当临床临床、期期结束后，一、二结束后，一、二类新药提出申请类新药提出申请试生产试生产的资料。的资料。临床临床期期结束后，一、二结束后，一、二类新药再提出申请转为类新药再提出申请转为正式生产正式生产的报告。的报告。四、生物技术药物的特点及其新药评价程序24生物技术制药发现和筛选生物技术新药发现和筛选生物技术新药:（1）从）从自然界、人或动物或植物自然界、人或动物或植物中中分离
14、提取分离提取具有具有药物作用的生物活性蛋白，以基因工程技术药物作用的生物活性蛋白，以基因工程技术钓取钓取或合成或合成其对应的基因片段，构建能表达制造某种其对应的基因片段，构建能表达制造某种药物的工程菌或细胞株。药物的工程菌或细胞株。（2）从）从基因工程构建的基因组基因工程构建的基因组DNA文库中文库中，筛选筛选表达表达某生物功能的活性蛋白的克隆，制备该活性某生物功能的活性蛋白的克隆，制备该活性蛋白，通过理化生物活性的分析和进一步筛蛋白，通过理化生物活性的分析和进一步筛选来选来获得生物技术新药。获得生物技术新药。五、生物技术来源药物的发现和筛选25生物技术制药（3）应用应用PCR技术、噬菌体表达
15、技术构建噬菌体技术、噬菌体表达技术构建噬菌体文库、细菌表达文库，文库、细菌表达文库，从这些随机肽库中或融合从这些随机肽库中或融合随机多肽库中，以单克隆抗体或纯化蛋白或受体随机多肽库中，以单克隆抗体或纯化蛋白或受体或完整的细胞作为陪体，筛选出与之结合的多肽或完整的细胞作为陪体，筛选出与之结合的多肽和蛋白分子及其相对应的和蛋白分子及其相对应的DNA片段，从中进一步片段，从中进一步筛选开发筛选开发成新的生物技术新药。成新的生物技术新药。五、生物技术来源药物的发现和筛选26生物技术制药（4）应用）应用蛋白质工程技术和计算机模建技术蛋白质工程技术和计算机模建技术，对，对活性蛋白进行突变、剪切、修饰改造或
16、设计全新活性蛋白进行突变、剪切、修饰改造或设计全新的分子，应用基因工程技术生产被改造的或新的的分子，应用基因工程技术生产被改造的或新的分子，筛选出有效的新的活性多肽和蛋白质药物。分子，筛选出有效的新的活性多肽和蛋白质药物。（5）应用）应用DNA合成技术合成技术，合成阻断有害基因的复，合成阻断有害基因的复制、表达的寡核苷酸（反义核酸、核酶和抗基因制、表达的寡核苷酸（反义核酸、核酶和抗基因寡核苷酸）药物，此外通过寡核苷酸）药物，此外通过合成技术合成技术合成随机寡合成随机寡核苷酸库，通过与蛋白多肽或有机分子等配体的核苷酸库，通过与蛋白多肽或有机分子等配体的结合与作用来筛选寡核苷酸药物。结合与作用来筛
17、选寡核苷酸药物。五、生物技术来源药物的发现和筛选27生物技术制药（6）应用）应用基因工程技术为基础的酵母双杂交系基因工程技术为基础的酵母双杂交系统统，通过在其体内检测蛋白质与蛋白质的相互作，通过在其体内检测蛋白质与蛋白质的相互作用，寻找与某已知蛋白质相互作用的未知蛋白质，用，寻找与某已知蛋白质相互作用的未知蛋白质，直接克隆未知蛋白的基因，筛选某些修饰的调整直接克隆未知蛋白的基因，筛选某些修饰的调整蛋白，通过药理作用的验证，发现和设计新的生蛋白，通过药理作用的验证，发现和设计新的生物技术药物。物技术药物。（7）人类基因组计划为人类基因组计划为新的新的靶基因或靶蛋白靶基因或靶蛋白的的开发生物技术新
18、药提供了的源泉。约开发生物技术新药提供了的源泉。约30亿对核苷亿对核苷酸、酸、34万个基因序列的确定，以生物信息学分万个基因序列的确定，以生物信息学分析、分离功能基因和致病基因，通过基因表达、析、分离功能基因和致病基因，通过基因表达、蛋白质分析、功能与代谢、药效毒理和药理学的蛋白质分析、功能与代谢、药效毒理和药理学的研究，发现和设计新的生物技术药物研究，发现和设计新的生物技术药物五、生物技术来源药物的发现和筛选28生物技术制药（8）通过）通过基因工程技术基因工程技术，对一些小分子药物如抗，对一些小分子药物如抗生素等的生物合成途径中的多酶体系基因簇进行生素等的生物合成途径中的多酶体系基因簇进行缺
19、失、替换等突变缺失、替换等突变，重建重建整个合成途径，最终产整个合成途径，最终产生与组合化学文库相似的组合生物合成文库，从生与组合化学文库相似的组合生物合成文库，从中筛选具有新特性的小分子药物。中筛选具有新特性的小分子药物。五、生物技术来源药物的发现和筛选29生物技术制药六、生物技术药物的生产生物技术来源药物的生产生物技术来源药物的生产是通过是通过基因修饰基因修饰的活细胞或的活细胞或机体来生产的，因此它与天然来源的材料如血浆、血机体来生产的，因此它与天然来源的材料如血浆、血清、组织中分离的或化学合成的药物显然不同。清、组织中分离的或化学合成的药物显然不同。生产过程中一般需要生产过程中一般需要高
20、密度发酵高密度发酵或高密度或高密度细胞培养细胞培养和和复杂的复杂的提纯提纯方法及质量控制分析方法及质量控制分析鉴定鉴定方法。方法。对生物技术药物的对生物技术药物的评价与验证评价与验证过程、生产环境的控制、过程、生产环境的控制、净化的无菌操作及净化的无菌操作及质量分析质量分析系统与质量控制，基本上系统与质量控制，基本上与所有的药物制品相同，但鉴于生物技术药物系统的与所有的药物制品相同，但鉴于生物技术药物系统的复杂性复杂性要求要求较其它一般药物为较其它一般药物为高高，一定要确保它们的，一定要确保它们的同源性同源性、批次间的、批次间的一致性一致性及及安全性安全性。30生物技术制药六、生物技术药物的生
21、产1、活性多肽、蛋白质的生产、活性多肽、蛋白质的生产（1）原核系统的生产）原核系统的生产优点优点是：是：对对细菌细菌的生物学及分子生物学的生物学及分子生物学背景的背景的了解了解已非常已非常透彻透彻； 细菌生长细菌生长增殖增殖快快，应用的，应用的培养培养基比较基比较简单简单，易获得高密，易获得高密度培养和高浓度的蛋白产物；度培养和高浓度的蛋白产物； 大肠杆菌大肠杆菌宿主系统已研究的非常成熟，具有各种载宿主系统已研究的非常成熟，具有各种载体和适用于表达生产蛋白的各种方法，可体和适用于表达生产蛋白的各种方法，可达到达到高水平的生产高水平的生产； 可以可以大规模发酵大规模发酵，现已应用超过现已应用超过
22、10万升规模的发酵罐进行工万升规模的发酵罐进行工程菌的生产，程菌的生产，成本较低廉成本较低廉。31生物技术制药六、生物技术药物的生产1、活性多肽、蛋白质的生产、活性多肽、蛋白质的生产（1）原核系统的生产）原核系统的生产缺点缺点是：是： 大肠杆菌生产的蛋白常常是以大肠杆菌生产的蛋白常常是以无活性无活性还原状态的包涵体还原状态的包涵体存在，需要通过氧化产生分子存在，需要通过氧化产生分子内二硫键形成正确的折叠，复性转变为有活性的内二硫键形成正确的折叠，复性转变为有活性的蛋白；蛋白； 大肠杆菌生产的蛋白大肠杆菌生产的蛋白起始序列起始序列为为N-甲酰甲酰甲硫氨酸、大肠杆菌的水解系统常常不能去除该甲硫氨酸
23、、大肠杆菌的水解系统常常不能去除该残基，于是所得蛋白是天然蛋白的残基，于是所得蛋白是天然蛋白的甲硫氨酰衍生甲硫氨酰衍生物；物； 在大肠杆菌中表达的蛋白由于存在微量蛋在大肠杆菌中表达的蛋白由于存在微量蛋白白酶酶而有而有遭致生物降解遭致生物降解的可能；的可能； 大肠杆菌系统大肠杆菌系统产生的蛋白常污染有产生的蛋白常污染有内毒素内毒素，要通过纯化除去。，要通过纯化除去。最近进展可使大肠杆菌表达产生的蛋白以可溶性最近进展可使大肠杆菌表达产生的蛋白以可溶性形式分泌至胞外或细胞周质中，这样既可除去不形式分泌至胞外或细胞周质中，这样既可除去不需要的需要的N-末端的甲硫氨酸和较易纯化。末端的甲硫氨酸和较易纯化
24、。32生物技术制药六、生物技术药物的生产（2）真核系统（哺乳动物细胞及酵母）的生产）真核系统（哺乳动物细胞及酵母）的生产优点优点是产物往往是产物往往分泌于胞外分泌于胞外，并且它具有原核细胞所，并且它具有原核细胞所不具有的蛋白质转录加工的能力，这样生产的活性蛋不具有的蛋白质转录加工的能力，这样生产的活性蛋白能特异地折叠，在一级、二级及三级结构上与天然白能特异地折叠，在一级、二级及三级结构上与天然蛋白一致。蛋白一致。缺点缺点是所需要是所需要费用较高费用较高，技术，技术难度大难度大，其规模越大，其规模越大影影响也越大响也越大，随着生物反应器、微载体、微囊培养系统，随着生物反应器、微载体、微囊培养系统
25、及培养基研究的进展，这方面已有了很大突破。此外及培养基研究的进展，这方面已有了很大突破。此外通常应用永生化的细胞系，要注意污染有潜在的致瘤通常应用永生化的细胞系，要注意污染有潜在的致瘤DNA、病毒及逆转录病毒的可能，必须通过有效的验、病毒及逆转录病毒的可能，必须通过有效的验证确保其安全性。证确保其安全性。33生物技术制药六、生物技术药物的生产2、单克隆抗体单克隆抗体的生产的生产体内法（小鼠腹水法）和体外法（细胞培体内法（小鼠腹水法）和体外法（细胞培养法）制备单克隆抗体，经养法）制备单克隆抗体，经提取纯化提取纯化获得获得特异性单抗制剂。特异性单抗制剂。3、核酸药物核酸药物的生产的生产寡核苷酸生产
26、由寡核苷酸生产由DNA合成仪合成仪进行裸进行裸DNA基基因疫苗和基因药物的生产技术及要求类似因疫苗和基因药物的生产技术及要求类似于于重组多肽蛋白药物重组多肽蛋白药物，不过目标产品不是，不过目标产品不是多肽产品，而是多肽产品，而是DNA。34生物技术制药七、生物技术药物的药学评价七、生物技术药物的药学评价1、起始材料的评价、起始材料的评价2、生产（制造过程）的评价、生产（制造过程）的评价3、质量控制及评价（最终产品的评价）、质量控制及评价（最终产品的评价）35生物技术制药基因工程药物制造基因工程药物制造基因工程药物制造基因工程药物制造实例实例实例实例 干扰素（干扰素（interferon，IFN
27、）是人体细胞）是人体细胞分泌的一种活性蛋白质，具分泌的一种活性蛋白质，具有广泛的有广泛的抗病毒抗肿瘤和免疫调节活性抗病毒抗肿瘤和免疫调节活性，是人，是人体防御系统的重要组成部分。根据分体防御系统的重要组成部分。根据分子结构和抗原性的差异分为子结构和抗原性的差异分为、等等4个类型。个类型。型干扰素在分为型干扰素在分为1b 2a 2b等亚型。等亚型。36生物技术制药一、基因工程菌的组建37生物技术制药二、基因工程干扰素的制备二、基因工程干扰素的制备启开种子启开种子 制备种子液制备种子液 发酵培养发酵培养 粗提粗提精提精提 半成品制备半成品制备 半成品检定半成品检定 分装分装冻干冻干 成品检定成品检
28、定 成品包装成品包装38生物技术制药2b干扰素生产过程干扰素生产过程1.发酵发酵l工程菌：工程菌：SW-IFN-2b/E.coli DH5，质粒用启动，质粒用启动子，含氨苄青霉素抗性基因。子，含氨苄青霉素抗性基因。l培养基：培养基：1%蛋白冻蛋白冻0.5%酵母提取物酵母提取物0.5%NACl。摇床培养：摇床培养：30 ，10h，发酵种子。，发酵种子。l15L发酵罐培养：发酵罐培养：30，8h。然后。然后42，3h。离。离心去上清。心去上清。39生物技术制药 2.产品的提取与纯化产品的提取与纯化 湿菌超声破碎，离心，上清超滤浓湿菌超声破碎，离心，上清超滤浓 缩，缩，Sephadex G50 分离
29、。分离。 经经SDS-PAGE检查。检查。 在经在经DE-52柱纯化柱纯化。40生物技术制药半成品检定半成品检定干扰素效价测定干扰素效价测定蛋白质含量测定蛋白质含量测定比活性比活性纯度测定纯度测定相对分子量测定相对分子量测定三、质量控制标准和要求三、质量控制标准和要求41生物技术制药残余外源性残余外源性DNA含量测定含量测定残余血清残余血清IgG含量测定含量测定残余抗生素活性测定残余抗生素活性测定紫外光谱扫描紫外光谱扫描肽图测定肽图测定等电点测定等电点测定除菌半成品干扰素效价测定、无菌试除菌半成品干扰素效价测定、无菌试验、热原试验。验、热原试验。42生物技术制药成品检定成品检定成品检定成品检定物理性状物理性状鉴别试验鉴别试验水分测定水分测定无菌试验无菌试验热原试验热原试验干扰素效价测定干扰素效价测定安全试验安全试验43生物技术制药生物技术制药
