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1、血清谷丙转氨酶血清谷丙转氨酶活性的测定活性的测定 实验题目实验题目实验目的实验目的n掌握谷丙转氨酶活性测定的掌握谷丙转氨酶活性测定的 原理和方法原理和方法l血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a a一酮戊一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸l血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反应出谷丙转氨酶活性的大小。应出谷丙转氨酶活性的大小。l丙酮酸与丙酮酸与2 2，4-4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中显二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色黄色，在碱，在碱性溶液中成醌型
2、显性溶液中成醌型显棕红色棕红色。实验原理实验原理本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。本法以本法以lml血清与基质液在血清与基质液在37，保温，保温30分钟生分钟生成成2.5g丙酮酸为谷丙转氨酶活性丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位单位求酶活性单位的方法：求酶活性单位的方法： 1、标准品对照法：、标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处检品与标准丙酮酸液同样处理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。 2、标准曲线法：、标准曲线法：取含待测物的一系
3、列标准溶液，取含待测物的一系列标准溶液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。一、标准品对照法一、标准品对照法 取试管取试管4支，标号，按下表加试剂：支，标号，按下表加试剂：基基质质液液血血清清丙丙酮酮酸酸水水4个管同个管同时放入时放入37水浴水浴中。中。准确保温准确保温30分钟，分钟，呈呈色色试试剂剂基基质质液液A A（检品）（检品）0.50.10.5B B（检对照）（检对照）0.10.50.5S S（标准）（标准）0.50.10.5S S（标对照）（标对照） 0.10.50.5实验操作实验操作56放置放置5分钟。分钟。 加加0.4N NaOH液液5.0ml
4、慢慢加入慢慢加入（约（约1分钟），边加边混匀。分钟），边加边混匀。室温放置室温放置 30分钟，分钟，测测OD值，波长值，波长 520nm，用，用蒸馏水蒸馏水调零点。调零点。 计 算（ODA-ODB）（ODs-ODs）= =X （待测样品丙酮酸含量）（待测样品丙酮酸含量）50ug/ml 0.1 ml X= =（ODA-ODB）（ODs-ODs）5 5SGPT单位单位=（ODA-ODB）（ODs-ODs）5 50.10.12.52.5=（ODA-ODB）（ODs-ODs）2020二二、标准曲线法标准曲线法 配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液，配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，
5、并且各加以适量的基质液，作成标准曲线。具体做法如下表。作成标准曲线。具体做法如下表。管号管号1 12 23 34 45 5空白空白标准丙酮酸标准丙酮酸（5050g/mlg/ml）基质液基质液mlml蒸馏水蒸馏水mlml丙酮酸含量丙酮酸含量g g相当相当GPTGPT单位单位0.050.050.50.50.450.452.52.510100.10.10.50.50.40.45.05.020200.20.20.50.50.30.3101040400.30.30.50.50.20.2151560600.40.40.50.50.10.120208080- -0.50.50.50.5- -0 0。各管混匀
6、，放各管混匀，放37水浴水浴5分钟分钟 加加0.4N NaOH液液5.0ml 慢慢加入慢慢加入（约（约1分钟），边加边混匀分钟），边加边混匀然后各加呈色试剂然后各加呈色试剂0.5ml，混匀，混匀56放置放置5分钟。分钟。室温放置室温放置 30分钟分钟测定测定OD值值, 波长波长 520nm，用，用蒸馏水蒸馏水调零点。调零点。ABSSOD值值一标准对照法一标准对照法.原始数据记录原始数据记录2、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果）二、标准曲线法二、标准曲线法.原始数据记录原始数据记录12345空白空白OD标准标准OD标准标准 OD空白空白(纵坐
7、标纵坐标)-标准标准GPT单位单位(横坐标横坐标)1020406080-2、绘制标准曲线，（要求规范作图）、绘制标准曲线，（要求规范作图）3、通过方法一的、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位，在标准曲线中，查得酶活性单位实验结果实验结果注意事项注意事项n操作中加操作中加 0.4N 0.4N NaOHNaOH液时，需以较慢速度液时，需以较慢速度加入，并且边加边摇匀加快时则加入，并且边加边摇匀加快时则a a一戊酮二一戊酮二酸引起的发色增强。酸引起的发色增强。n本实验中各试剂加量都需要准确，并且要本实验中各试剂加量都需要准确，并且要注意控制条件，保温时间要严格注意控制条件，保温时间要严格n本法测定本法测定SGTPSGTP正常值为正常值为4040单位以下。单位以下。n分析实验误差产生的原因分析实验误差产生的原因n血清血清GPT活性测定的意义活性测定的意义实验讨论实验讨论
